【摘要】：研究目的 建立早期形覺剝奪性近視(form-deprivation myopia, FDM)動物模型,檢測豚鼠視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中轉(zhuǎn)化生長因子β2 (transforming growth factor-beta2, TGF-β2)及活化蛋白-1 (activator protein-1, AP-1)的水平;形覺剝奪同時分別給予AP-1的抑制劑姜黃素和視黃酸受體β(retinoic acid receptorβ, RARβ)特異性抑制劑LE540,比較不同處理對屈光狀態(tài)的影響,并檢測視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中TGF-β2和AP-1的水平,探討TGF-β2和AP-1在形覺剝奪性近視豚鼠視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中的作用及其與視磺酸(retinoic acid, RA)信號傳遞過程的關(guān)系。 方法 第一部分：同批次3周齡豚鼠12只,采用戴頭套法遮蓋左眼,右眼為自身對照眼。飼養(yǎng)至21天作為形覺剝奪動物模型。觀測指標：1.實驗前后均測量屈光度,實驗結(jié)束后摘除眼球,測量眼軸長；2.應用ELISA法檢測視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中TGF-β2含量,western blotting方法檢測視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中AP-1含量的變化。 第二部分：另選同種豚鼠40只,隨機分為4組,Ⅰ組6只,為正常對照組,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組各12只。Ⅱ組為實驗對照組,左眼球后注射0.1%DMSO0.1ml;Ⅲ組左眼球后注射0.1m(1.5g/L)姜黃素；Ⅳ組左眼球后注射0.1ml (0.1 g/L) LE540;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組均隔日給藥一次,共3次,并遮蓋左眼至第21天。右眼為自身對照眼。觀測指標同第一部分。計量資料數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理,并進行正態(tài)分布及Levene方差齊性檢驗后行t檢驗和方差分析。 結(jié)果 第一部分：12只動物實驗眼誘導出明顯的相對近視,且與自身對照眼比較差異有統(tǒng)計學意義(t=-0.575,P=0.001)。實驗眼眼軸均長于自身對照眼(t=-4.920,P=0.000)。實驗眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中TGF-β2水平較自身對照眼明顯降低(t=-4.933, P=0.004), Western blotting所得c-Fos和GAPDH的灰度圖顯示,實驗眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中AP-1活性較自身對照眼減低(t=-2.832,P=0.037)。 第二部分：實驗干預后Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ組的實驗眼形成相對近視,三組左右眼屈光度差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)。Ⅲ組和Ⅳ組之間實驗眼實驗前后屈光度變化差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組干預后左右眼眼軸長度差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組實驗眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中TGF-β2含量較自身對照眼明顯降低(P0.05)；Ⅰ組實驗后雙眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中的TGF-β2含量與自身對照眼相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組實驗后實驗眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中的AP-1活性表達與自身對照眼相比均明顯降低(P0.05)；Ⅰ組實驗后雙眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中的AP-1活性表達與自身對照眼相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論 豚鼠形覺剝奪可導致近視發(fā)生；豚鼠早期形覺剝奪眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中AP-1活性和TGF-β2表達下調(diào)；AP-1抑制劑姜黃素的使用可以影響豚鼠形覺剝奪性近視的形成作用,豚鼠早期形覺剝奪眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中TGF-β2表達受AP-1活性的影響；RARβ抑制劑LE540的使用可以影響豚鼠早期形覺剝奪性近視的形成作用；豚鼠早期形覺剝奪眼視網(wǎng)膜色素上皮-脈絡膜中RARβ可以調(diào)控AP-1和TGF-β2的活性表達,AP-1和TGF-β2可能是調(diào)控豚鼠FDM形成的RA信號通路的重要因子,RA--RARp--AP-1--TGF-β2的視磺酸信號通路可能是調(diào)控豚鼠FDM形成的重要通路之一。
【圖文】：

實驗眼均為左眼，右眼為自身對照眼。形覺剝奪均采用6號同色氣球(河北雄縣乳膠廠)于豚鼠口鼻、雙耳及非實驗眼處開窗，制成大小合適的頭套遮蓋左眼，頸部以膠帶固定防止脫落，，飼養(yǎng)至21天(見圖1)，期間動物處于活動狀態(tài)。于預計時間點用10%水合氯醛過度麻醉處死。實驗過程中動物的使用遵循《實驗動物管理條例》。圖1豚鼠形覺剝奪性近視模型制作1.1.3實驗方法1.1.3.1屈光度的測量12只豚鼠實驗干預前后均行屈光度測量，本實驗采用單盲法，由同一名有多年驗光經(jīng)驗的視光師檢影。動物處于安靜狀態(tài)下，結(jié)膜囊內(nèi)點l%復方托毗咔胺滴眼液共3次，每次間隔 5min，30min后于暗室內(nèi)行視網(wǎng)膜檢影。動物頭部位置固定，工作距離為0.50m，以0.25D間隔在水平及垂直子午線上帶狀光檢影

胺滴眼液共3次，每次間隔 5min，30min后于暗室內(nèi)行視網(wǎng)膜檢影。動物頭部位置固定，工作距離為0.50m，以0.25D間隔在水平及垂直子午線上帶狀光檢影，散光以半量計入球鏡(見圖2)。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R778.11

【引證文獻】

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1 馮雪莉;段山;;信號通路與近視眼局部生長調(diào)控研究進展[J];眼科新進展;2013年05期

本文編號：2531856