【摘要】：[目的]耳毒性藥物及噪聲所引起的毛細(xì)胞丟失是感音神經(jīng)性耳聾的主要致病原因。但與低等非脊椎動(dòng)物不同,哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞無(wú)自發(fā)性再生能力,因此毛細(xì)胞丟失所導(dǎo)致的感音神經(jīng)性耳聾目前仍是臨床治療中的一大難題。找到促進(jìn)哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞原位再生的生物學(xué)途徑是治療感音神經(jīng)性耳聾的重要研究方向。 [方法]本實(shí)驗(yàn)采用新生SD大鼠體外耳蝸培養(yǎng)模型,研究Shh在促進(jìn)新生哺乳動(dòng)物耳蝸毛細(xì)胞及支持細(xì)胞再生中的作用及其機(jī)制。為了進(jìn)一步研究誘導(dǎo)成年耳蝸再生的方法,我們采用Er-Cre Rb loxp/loxp轉(zhuǎn)基因鼠,在體外培養(yǎng)模型中敲除Rbl基因,研究其對(duì)成年耳蝸毛細(xì)胞及支持細(xì)胞再生中的促進(jìn)作用。 [結(jié)果]1).在新生大鼠耳蝸新霉素?fù)p傷體外模型中,Shh蛋白可促進(jìn)支持細(xì)胞增殖,部分增殖的支持細(xì)胞可轉(zhuǎn)分化為毛細(xì)胞,新生毛細(xì)胞表達(dá)前體細(xì)胞標(biāo)記物Pax2與Sox2。2).通過(guò)RT-PCR研究方法,顯示新生耳蝸體外培養(yǎng)中加入Shh蛋白可成功激活Hh信號(hào)通路,使其下游多種作用因子表達(dá)上調(diào),從而進(jìn)一步產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控作用。3).Shh通過(guò)抑制pRb功能促進(jìn)毛細(xì)胞再生。Shh通過(guò)抑制pRb蛋白的表達(dá)及促進(jìn)其過(guò)磷酸化兩個(gè)方面同時(shí)抑制pRb的功能。并誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白Cyclin B1, Cyclin D2, Cyclin D3和Cdc2的上調(diào),從而促進(jìn)靜止期細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期。4).在成年小鼠內(nèi)耳感覺上皮體外培養(yǎng)模型中,Rb1敲除能夠促進(jìn)耳蝸和橢圓囊的支持細(xì)胞及毛細(xì)胞增殖。 [結(jié)論]1).Shh可促進(jìn)毛細(xì)胞損傷后的新生耳蝸支持細(xì)胞的增殖和毛細(xì)胞的再生。2).在體外培養(yǎng)條件下, Shh可成功激活Hh信號(hào)通路,使其下游多種作用因子表達(dá)上調(diào)。3).Shh對(duì)毛細(xì)胞的再生促進(jìn)作用是通過(guò)對(duì)Rb蛋白維持細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)作用的抑制所產(chǎn)生的。4).在成年耳蝸中敲除Rbl基因可促進(jìn)毛細(xì)胞及支持細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期,對(duì)成年毛細(xì)胞的再生有非常重要的促進(jìn)作用。
【圖文】：

持細(xì)胞的增殖功能缺陷可導(dǎo)致毛細(xì)胞再生的終止。因此，在低等脊椎動(dòng)物毛細(xì)胞再生過(guò)程中，支持細(xì)胞是毛細(xì)胞再生的來(lái)源，而支持細(xì)胞的分裂增殖則是毛細(xì)胞再生過(guò)程中及其關(guān)鍵的步驟[7] [8]。音稷因子（Sonic hedgehog, Shh)是hedgehog(Hh)基因家族成員之一，，最初于1980年在果姆中發(fā)現(xiàn)。SHH編碼一種高度保守的分泌型糖蛋白，對(duì)于胚胎發(fā)育、器官形成，細(xì)胞增殖和分化具有重要作用[9]。哺乳動(dòng)物有三種HH蛋白：Shh (Sonichedgehog), Ihh (Indian hedgehog), Dhh (Desert hedgehog)。分別在不同的組織中有不同的表達(dá)形式，并在發(fā)育中起到不同的作用。SHH是哺乳動(dòng)物三種Hh配體中在脊椎動(dòng)物胚胎中表達(dá)最廣泛和大量的，在發(fā)育中大腦、脊椎和多種發(fā)育中器官的上皮-間質(zhì)界面表達(dá)。Shh是一種強(qiáng)烈的形態(tài)發(fā)生誘導(dǎo)劑，對(duì)脊椎動(dòng)物胚胎中多種結(jié)構(gòu)的發(fā)育起重要的作用，包括四肢，神經(jīng)組織，肺，項(xiàng)面骨豁，毛發(fā)，牙齒，胃腸道，腦垂體等.Shh編碼一種分泌性糖肽。Shh肽鏈與}\0細(xì)胞表面的特異性受體(Patched, Ptc)結(jié)合，并通過(guò)一種包括Glil家族轉(zhuǎn)錄因子的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以調(diào)節(jié)祀細(xì)胞內(nèi)特定基因的轉(zhuǎn)錄水平[10]。Glil和Ptc的表達(dá)是HH活性的保守IE位，因此，被廣泛的作為Hh信號(hào)通路的活性指標(biāo)[11] [12]。

1.新霉素?fù)p傷后，耳鍋毛細(xì)胞逐漸丟失。在ImM新霉素處理24小時(shí)并繼續(xù)用無(wú)血清培養(yǎng)液培養(yǎng)5天后，可觀察到毛細(xì)胞呈梯度丟失（圖1.F)。由于外毛細(xì)胞比內(nèi)毛細(xì)胞對(duì)新霉素?fù)p傷更為敏感，毛細(xì)胞丟失由外毛細(xì)胞開始。并且呈現(xiàn)出底圈損傷較嚴(yán)重，頂圈損傷較輕的模式。在最終得到的耳鍋標(biāo)本中，底圈耳鍋內(nèi)外毛細(xì)胞幾乎全部丟失，近存留部分死亡毛細(xì)胞殘骸。中圈內(nèi)毛細(xì)胞存留較為完整，外毛細(xì)胞則大部分損傷（圖5. F-J)。向耳鍋?lái)斎Ψ较�，外毛�?xì)胞損傷程度逐漸減輕。耳鍋?zhàn)铐敳棵?xì)胞損傷非常輕微，結(jié)構(gòu)與正常培養(yǎng)耳賜類似。新霉素?fù)p傷毛細(xì)胞后，Corti氏器結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，毛細(xì)胞排列紊亂。部分區(qū)域內(nèi)外毛細(xì)胞無(wú)法明顯區(qū)分。但支持細(xì)胞未見明顯損傷
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R764

【共引文獻(xiàn)】

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2 趙換軍;趙洪良;張翠萍;付小兵;;DNA甲基化對(duì)干細(xì)胞分化的影響及其作用方式[J];感染、炎癥、修復(fù);2013年04期

3 李俊賢;謝春光;;影響糖尿病代謝記憶效應(yīng)的因素探究[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年04期

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6 陳志強(qiáng);韓新煥;曹新;;Sonic Hedgehog信號(hào)通路與內(nèi)耳發(fā)育調(diào)控[J];遺傳;2013年09期

7 曾彬;王艾麗;胡冬冬;李昌;;小鼠胚胎心臟心外膜細(xì)胞體外培養(yǎng)模型的建立[J];中國(guó)組織工程研究;2013年44期

8 潘群雄;蘇子劍;王聰仁;莊建良;;EPCAM在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2013年20期

9 汪浩;李曉群;翁敏杰;高凌志;杜建霖;佘強(qiáng);;成年小鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死后胚胎基因Tbx18的表達(dá)情況[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

10 公緒合;王國(guó)干;王鵬博;王斯佳;;間充質(zhì)干細(xì)胞治療心血管疾病的研究進(jìn)展[J];中國(guó)心血管雜志;2013年05期

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本文編號(hào)：2527426