【摘要】：目的和意義 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)是我國(guó)南方尤其是廣東省常見的一種惡性腫瘤,俗稱“廣東瘤”。以調(diào)強(qiáng)放療為主的綜合治療對(duì)早期鼻咽癌非常有效,但因其起病隱匿,具有強(qiáng)烈的轉(zhuǎn)移傾向,約75%的患者首診時(shí)就己到達(dá)晚期,發(fā)生局部淋巴結(jié)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,早期診斷是臨床一大難題；而治療后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移則預(yù)后極差,成為鼻咽癌治療失敗、生存率下降的主要原因。因此,篩查鼻咽癌的腫瘤標(biāo)記物,爭(zhēng)取早期發(fā)現(xiàn)、合理治療、預(yù)測(cè)預(yù)后、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā),對(duì)鼻咽癌臨床診治具有極其重要的意義。 目前研究發(fā)現(xiàn),鼻咽癌的發(fā)病與遺傳因素、愛波斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)感染以及環(huán)境因素密切相關(guān)。流行病學(xué)調(diào)查及病因?qū)W研究顯示,雖然人群中EB病毒感染具有普遍性,但只有很少一部分個(gè)體存在EB病毒特異性IgA抗體陽性,而大部分鼻咽癌患者可檢測(cè)出EB病毒特異性抗體或EBV-DNA。鑒于鼻咽癌與EBV感染的相關(guān)性,現(xiàn)有鼻咽癌的外周血標(biāo)志物主要圍繞EB病毒的相關(guān)檢查展開,如EB病毒殼抗原抗體VCA-IgA、早期抗體EA-IgA及EBV-DNA。但EBV作為鼻咽癌標(biāo)志物的敏感性和特異性并不高,在鼻咽癌患者中的EBV陽性率只有60%左右,存在較多的假陽性和假陰性,EBV作為鼻咽癌的標(biāo)志物遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到臨床要求。人類白細(xì)胞抗原(humanleukocyte antigen,HLA)被認(rèn)為是與鼻咽癌發(fā)病最顯著相關(guān)的遺傳因素,在鼻咽癌候選基因研究和全基因組關(guān)聯(lián)性研究中均檢出HLA與鼻咽癌的存在相關(guān)性,HLA的多態(tài)性對(duì)鼻咽癌發(fā)展過程中先天性或獲得性免疫反應(yīng)的激發(fā)具有重要的影響作用。此后不同研究團(tuán)隊(duì)也紛紛報(bào)道不同基因位點(diǎn)與鼻咽癌發(fā)病的相關(guān)性,理論上證實(shí)了基因突變或缺失等遺傳因素在鼻咽癌發(fā)病中的重要作用,但由于技術(shù)和費(fèi)用等限制,目前還無法應(yīng)用于臨床。其它鼻咽癌相關(guān)蛋白及其編碼基因標(biāo)志物的篩選,都止步于實(shí)驗(yàn)理論階段,目前尚無實(shí)用的特異性的鼻咽癌標(biāo)志物。 隨著研究的深入,研究者發(fā)現(xiàn)除了腫瘤相關(guān)的蛋白及其編碼基因,非編碼基因也與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。特別是一類高度保守的非編碼單鏈小分子RNA(microRNA,miRNA),通過與多個(gè)靶基因mRNA的3’非翻譯區(qū)不完全互補(bǔ)配對(duì),可以在轉(zhuǎn)錄后水平抑制基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)50%以上的miRNA定位于腫瘤相關(guān)基因組區(qū)域,染色體異常直接導(dǎo)致miRNA基因拷貝數(shù)的改變,從而造成miRNA在多種腫瘤中表達(dá)失調(diào),并發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用。在幾乎所有腫瘤組織中都檢測(cè)出異常表達(dá)的miRNA,越來越多的研究證實(shí)了miRNA幾乎參與了腫瘤發(fā)生發(fā)展中的每一個(gè)步驟,在腫瘤發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了超出想象的重要作用,其研究結(jié)果發(fā)表在《Nature》.《Science》等權(quán)威雜志上。特定的miRNA可以反映腫瘤的組織來源,并對(duì)其進(jìn)行分子分型,可用來預(yù)測(cè)預(yù)后及判斷治療敏感性,甚至直接參與腫瘤的治療。本課題組在前期研究中也發(fā)現(xiàn)miR-10b促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,miR-26a在鼻咽癌組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),并通過調(diào)控EZH2,抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。miRNA可成為腫瘤在臨床診斷、分型、治療選擇及預(yù)后判斷等各方面的分子標(biāo)志物,存在著不可估量的臨床應(yīng)用前景。 2008年《PNAS》報(bào)道血循環(huán)中miRNA經(jīng)過長(zhǎng)期保存、反復(fù)凍融后仍可穩(wěn)定存在而不發(fā)生降解,在腫瘤患者循環(huán)中的表達(dá)譜與正常人相比存在顯著差異,開啟了循環(huán)miRNA作為腫瘤標(biāo)志物研究的序幕。循環(huán)miRNA作為腫瘤分子標(biāo)志物具有穩(wěn)定、易得、高效的優(yōu)點(diǎn)：miRNA序列保守,在血漿或血清中穩(wěn)定存在,可長(zhǎng)期保存；血樣本容易且可反復(fù)獲得；miRNA檢測(cè)方法已經(jīng)逐漸成熟；腫瘤循環(huán)miRNA表達(dá)譜有明顯異常并且有組織特異性趨勢(shì),其變化發(fā)生早于基因及蛋白,并隨著腫瘤的進(jìn)展而變化。研究顯示聯(lián)合多種血漿miRNA診斷乙肝相關(guān)性肝癌,具有比甲胎蛋白AFP更高的診斷效率。相對(duì)于腫瘤組織miRNA差異表達(dá)的研究,循環(huán)miRNA具有易于檢測(cè)、重復(fù)性好的特性,有更好的臨床應(yīng)用前景。為腫瘤的早期診斷、治療選擇、預(yù)測(cè)預(yù)后、隨訪監(jiān)測(cè)提供了新的思路和方法。 由于個(gè)體之間的差異,實(shí)驗(yàn)方法及標(biāo)準(zhǔn)不同,即使是同一種疾病,同一miRNA范圍,各個(gè)實(shí)驗(yàn)室篩查出的差異miRNA也不盡相同,且循環(huán)1niRNA的表達(dá)水平在個(gè)體之間波動(dòng)較大,很難界定出一個(gè)正常范圍,循環(huán)miRNA成為真正的腫瘤標(biāo)記物還面臨著許多問題。為了避免個(gè)體差異,研究者開始對(duì)腫瘤治療前后血漿IniRNA進(jìn)行配對(duì)比較研究,發(fā)現(xiàn)這種配對(duì)病例研究更容易篩查得到有意義的腫瘤循環(huán)標(biāo)志物。如食管癌、肺癌、胃癌等實(shí)體腫瘤中相關(guān)血漿miRNA水平在治療前后配對(duì)比較中有相對(duì)一致性變化,并與腫瘤治療敏感性或復(fù)發(fā)相關(guān)。 盡管循環(huán)1niRNA已被證實(shí)與腫瘤及各種疾病有著千絲萬縷的關(guān)系,但細(xì)胞外miRNA在循環(huán)中的存在形式及生理功能尚不明了,目前研究認(rèn)為循環(huán)中miRNA主要由細(xì)胞分泌釋放入血,以微囊泡(microvesicles,MVs)或蛋白復(fù)合體的形式存在,在細(xì)胞之間傳遞生物信息。提示MV或蛋白復(fù)合體可能是miRNA的一種載體來傳遞細(xì)胞發(fā)出的生物信號(hào),在系統(tǒng)信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)中起著重要的聯(lián)系和調(diào)節(jié)作用。 鼻咽癌miRNA的研究起步較晚,循環(huán)miRNA的研究更是鮮見報(bào)道,僅有兩篇關(guān)于鼻咽癌血清miRNA的臨床研究。我們前期嘗試對(duì)鼻咽癌患者治療前后血漿miRNA作配對(duì)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)治療后的差異血漿miRNA水平可發(fā)生逆轉(zhuǎn),而在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病例中血漿miRNA差異水平則進(jìn)一步擴(kuò)大。血漿miRNA在鼻咽癌診斷和預(yù)測(cè)治療敏感性等方面的具有潛在的臨床價(jià)值。 基于miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要作用及循環(huán)miRNA在腫瘤臨床診治中的潛在意義,本課題的研究目的是為了全面篩查并驗(yàn)證鼻咽癌血漿中表達(dá)差異的miRNA,觀察其在鼻咽癌治療前后或復(fù)發(fā)時(shí)的動(dòng)態(tài)變化,分析探討血漿miRNA在鼻咽癌早期診斷、預(yù)測(cè)治療敏感性及監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的臨床應(yīng)用價(jià)值,并在鼻咽癌細(xì)胞株中觀察放療照射對(duì)這些差異miRNA表達(dá)水平的影響,以及細(xì)胞上清中這些miRNA的存在形式,初步探討血漿miRNA作為鼻咽癌分子標(biāo)志物的可行性。 材料和方法 1.臨床病例資料 2009年12月～2013年12月在南方醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科住院的并有完整隨訪資料及標(biāo)本的初診鼻咽癌患者286例,同期住院的排除重大系統(tǒng)性疾病及腫瘤病史的慢性化膿性中耳炎、慢性鼻竇炎患者50例作為非腫瘤對(duì)照組。所有病例均經(jīng)過病理學(xué)檢查確診,既往無放療或化療史。鼻咽癌組織學(xué)分型為非角化性未分化型癌或非角化性分化型癌,依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)鼻咽癌2008分期進(jìn)行TNM分期及臨床分期。治療標(biāo)準(zhǔn)參照V.2.2008NCCN鼻咽癌治療指南進(jìn)行,全部病人跟蹤隨訪,定期復(fù)查。2.血標(biāo)本收集分離與保存 全部患者在治療前抽取6～8ml EDTA抗凝全血,其中100例鼻咽癌患者在治療后3月、6月、12月、24月留取血標(biāo)本。所有患者均簽署知情同意書一份。本研究通過美國(guó)NIH下屬ClinicalTrials.gov臨床試驗(yàn)注冊(cè)審查批準(zhǔn),批準(zhǔn)號(hào)NCT01171235,并通過南方醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有標(biāo)本在4個(gè)小時(shí)內(nèi)分離白細(xì)胞及血漿后于—80℃低溫冰箱保存并由專人負(fù)責(zé)登記。 3.miRNA芯片篩查 將20例鼻咽癌及10例正常對(duì)照血漿標(biāo)本委托上�？党缮锕こ逃邢薰具M(jìn)行miRNA芯片檢測(cè)。采用miRCURY Array Power標(biāo)記試劑盒,將Hy3或Hy5熒光基團(tuán)標(biāo)記miRNA,得到用于與芯片雜交的熒光探針,在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用MAUI雜交儀將標(biāo)記好的探針和miRCURY芯片(VVersion16.0, Exiqon, Vedbaek, Denmaik)雜交。選擇表達(dá)倍數(shù)大于1.5且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)的miRNA,根據(jù)其表達(dá)水平進(jìn)一步篩選作為候選miRNA。 4.熒光定量PCR檢測(cè) 抽提血漿或細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后,U6snRNA、miR-634及miR-1228為內(nèi)參照,ddH20為陰性對(duì)照,采用SYBR green法進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過相對(duì)定量以2-△△Ct值代表miRNA的相對(duì)表達(dá)水平。 5.細(xì)胞培養(yǎng) 人鼻咽癌細(xì)胞株5-8F、6-10B、CNE1、CNE2、C666-1采用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素雙抗的RPMI1640培養(yǎng)基,人永生化鼻咽上皮細(xì)胞NP69采用KMSF培養(yǎng)基,在37℃、5%C02、飽和濕度的條件下傳代培養(yǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)用于實(shí)驗(yàn)。 6. miRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 采用陽離子脂質(zhì)體法進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,操作按lipofectamineTM2000試劑說明書進(jìn)行。12孔板中miRNA的轉(zhuǎn)染量為20-80nM。 7.細(xì)胞放療實(shí)驗(yàn) 將鼻咽癌細(xì)胞及NP69細(xì)胞培養(yǎng)3-4代,待生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)取106細(xì)胞種入6孔板,預(yù)實(shí)驗(yàn)中設(shè)置放射劑量為0、2、4、6、8Gy,照射后繼續(xù)培養(yǎng),每隔24h換液,分別在24h、48h后提取細(xì)胞總RNA,檢測(cè)細(xì)胞miRNA的表達(dá)情況。細(xì)胞照射后存活率：細(xì)胞照射0、2、4、6、8Gy后48h,每1ml培養(yǎng)基加入0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液100ul,鏡下觀察,死細(xì)胞被染成明顯的藍(lán)色,而活細(xì)胞拒染呈無色透明狀。每個(gè)照射劑量取5個(gè)視野,分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞,活細(xì)胞率(%)=活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100%。 8.分離細(xì)胞上清e(cuò)xosome 鼻咽癌細(xì)胞培養(yǎng)3-4代后,接種至10cm培養(yǎng)皿,待細(xì)胞狀態(tài)良好,生長(zhǎng)至80%左右換用不含血清的RPMI1640培養(yǎng)基,24-48h后收集培養(yǎng)基上清。采用階梯超高速離心分離細(xì)胞上清e(cuò)xosome,收集沉淀,溶于lml PBS緩沖液,用于下一步實(shí)驗(yàn)。 9.統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差。實(shí)驗(yàn)中涉及到2組獨(dú)立樣本的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；3組或以上獨(dú)立樣本的采用單因素方差分析(One-way ANOVA),進(jìn)一步多重比較采用SNK(Student-Neuman-Keuls)法。ROC曲線分析血漿miRNA的單獨(dú)診斷效率,以是否患病為應(yīng)變量,以8個(gè)miRNA表達(dá)水平為自變量,進(jìn)行二分類Logistic回歸,建立回歸模型,以預(yù)測(cè)概率與是否患病制作ROC曲線分析多個(gè)血漿miRNA聯(lián)合診斷效率。同一患者治療前后血漿miRNA的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),治療后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)血漿miRNA的比較采用重復(fù)測(cè)量的單因素方差分析,兩兩比較采用LSD法。P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.鼻咽癌患者血漿中差異miRNAs篩選及驗(yàn)證 應(yīng)用microRNA芯片對(duì)鼻咽癌患者及正常對(duì)照血漿進(jìn)行niRNA全基因組差異表達(dá)分析,在1891種miRNA中檢測(cè)到33種miRNA表達(dá)差異(差異倍數(shù)1.5,P0.05),其中27個(gè)高表達(dá),5個(gè)低表達(dá)。在隨后的大樣本qPCR驗(yàn)證中,我們檢測(cè)到8種血漿miRNA在鼻咽癌中表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中miR-9-3p、miR-92a-2-5p、miR-124-3p、miR-892b、miR-3676-3p在鼻咽癌血漿中低表達(dá),miR-214-3p、miR-3135a、miR-4257為高表達(dá)(以下均簡(jiǎn)稱為miR-9、miR-92、miR-124、miR-892、miR-3676、miR-214、miR-3135、miR-4257)。其相對(duì)正常對(duì)照組表達(dá)量分別為miR-9(fold change=0.132, t=6.079, P0.001)、 miR-92(fold change=0.167, t=4.562, P0.001)、miR-124(fold change=0.125, t=7.732, P0.001)、miR-892(fold change=0.314, t=3.464, P=0.001)、miR-3676(fold change=0.197, t=4.308, P0.001)、miR-214p(fold change=3.923, t=-4.834, P0.001)、miR-3135(fold change=3.888, t=-4.224, P0.001)及miR-4257(fold change=2.488, t=-5.352, P0.001)。 2.鼻咽癌血漿差異miRNA的診斷價(jià)值及與TNM分期及臨床分期的相關(guān)性 采用ROC曲線(受試者工作特征,receiver operating characteristic)分析8個(gè)血漿miRNA對(duì)于本組鼻咽癌的診斷效率,上述8個(gè)血漿miRNA的ROC曲線下面積在0.688至0.782之間,其中miR-9及miR-124的ROC曲線下面積達(dá)到0.782,聯(lián)合8種血漿miRNA可大大提高鼻咽癌的診斷效率,ROC曲線下面積達(dá)到0.958,靈敏度及特異度均分別達(dá)到0.911及0.867。聯(lián)合其中5個(gè)血漿(miR-9、miR-124、miR-3135、miR-3676及miR-4257) ROC曲線下面積達(dá)到0.953,靈敏度及特異度均分別達(dá)到0.904及0.867；在早期鼻咽癌中,聯(lián)合上述5個(gè)血漿ROC曲線下面積達(dá)到0.919,靈敏度及特異度也可達(dá)到0.844及0.867。其中血漿miR-9與T分期呈負(fù)相關(guān)(F=3.992,P=0.003),隨T分期增加,血漿miR-9表達(dá)量逐漸下降；血漿miR-9(F=3.663,P=0.014)、miR-92(F=4.571,P=0.004)及miR-892(F=6.071, P=0.001)在不同N分期之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血漿miR-9(F=5.622, P=0.001)、miR-92(F=4.638, P=0.004)、 miR-124(F=6.560, P0.001)、miR-892(F=3.102, P=0.029)、miR-3676(F=3.225,P=0.025)及miR-4257(F=3.160,P=0.037)在不同臨床分期之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,上述血漿miRNA在高分期患者中較低分期患者表達(dá)降低,與臨床分期具有相關(guān)性。 3.鼻咽癌患者治療前后血漿差異miRNA的動(dòng)態(tài)變化 在67例鼻咽癌患者中對(duì)比治療前與治療后3月血漿差異miRNA的表達(dá)變化,miR-9(t=5.068,P0.001)、miR-124(t=2.833,P=0.006)、miR-892(t=4.544,P0.001)、miR-3676(t=3.463,P=0.001)在治療后表達(dá)上調(diào),miR-3135(t=-2.229,P=-0.029)在治療后表達(dá)下調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)23例患者進(jìn)行治療前、治療后3月、6月、12月不同時(shí)間點(diǎn)連續(xù)觀察上述8種血漿miRNA的動(dòng)態(tài)變化,血漿miR-9在治療前后各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=4.256,P=0.018),治療后表達(dá)水平平均升高6.8～14.6倍；血漿miR-124(F=2.959,P=0.039)治療后各時(shí)間點(diǎn)較治療前表達(dá)水平升高2.4～5.4倍；血漿miR-892(F=6.289,P=0.001)治療后各時(shí)間點(diǎn)較治療前表達(dá)水平升高6.7～33.7倍；血漿miR-3135(F=3.175,P=0.03)治療后表達(dá)水平平均降低為治療前的0.16～0.48；血漿miR-3676(F=4.058,P=0.01)治療后各時(shí)間點(diǎn)較治療前表達(dá)水平平均升高5.7～9.6倍。預(yù)示這5種血漿miRNA與鼻咽癌帶瘤狀態(tài)相關(guān),腫瘤治療消失后向正常水平恢復(fù),6-12月可恢復(fù)相對(duì)穩(wěn)定水平。 4.鼻咽癌患者復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移時(shí)血漿差異miRNA的改變 8例患者發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移,在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移時(shí)血漿miRNA對(duì)比治療前,低表達(dá)的miR-9(t=-4.169, P=0.004)、miR-124(t=-4.675, P=0.002)均進(jìn)一步下調(diào),miR-892(t=-2.886, P=0.023)、miR-3676(t=-2.459, P=0.044)有7例下調(diào),其余4個(gè)miRNA則無明顯規(guī)律。進(jìn)一步預(yù)示miR-9、miR-124、miR-892、miR-3676可能與鼻咽癌病情演變相關(guān)。5.鼻咽癌細(xì)胞株經(jīng)放療照射后miRNA的變化 miR-9(F=38.714, P0.001)、miR-124(F=16.337, P0.001)、miR-892(F=11.153,P0.001)在所有5株鼻咽癌細(xì)胞中相對(duì)NP69都是低表達(dá),其余miRNA無一致性。在5株鼻咽癌細(xì)胞中低表達(dá)的miR-9、miR-124、miR-892相對(duì)照射前均不同程度的上調(diào),其他miRNA變化無一致性。 6.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-892b對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放療存活率的影響 我們選擇鼻咽癌細(xì)胞照射前后對(duì)比NP69變化最大的miR-892b,在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-892b mimic/inhibitor后,觀察其對(duì)鼻咽癌細(xì)胞照射存活率的影響。轉(zhuǎn)染miR-892b mimic后,5-8F和6-10B細(xì)胞在照射8Gy48小時(shí)后存活率降低了53%和44%(t=-9.824,P0.001；t=-4.638,P=0.002)；而轉(zhuǎn)染miR-892b inhibitor后,兩種細(xì)胞的存活率顯著升高,分別提高了55%和65%(t=4.411,P=0.002；t=6.599,P0.001)。 7.鼻咽癌細(xì)胞上清e(cuò)xosome中miRNA的表達(dá) 經(jīng)過階梯超高速離心分離細(xì)胞上清e(cuò)xosome,在5-8F及6-10B細(xì)胞上清中,檢測(cè)出6種miRNA,其中miR-9、miR-92、miR-124及miR-892在exosome中含量較高,而miR-214及miR-3135則在去除exosome的上清中含量較高,miR-3676及miR-4257則未檢出。 結(jié)論 1.8種鼻咽癌血漿miRNA與正常對(duì)照比較存在表達(dá)差異,其中血漿miR-9、miR-92、miR-124、miR-892、miR-3676表達(dá)降低,而血漿miR-214、miR-3135、miR-4257表達(dá)增高。 2. ROC曲線顯示8種血漿差異miRNA指標(biāo)單獨(dú)診斷效率均較好,聯(lián)合5種血漿miRNA (miR-9、miR-124、miR-3135、miR-3676及miR-4257)可顯著提高鼻咽癌的診斷效率,并在早期鼻咽癌中也具有較高的診斷效率。血漿miR-9、miR-124、miR-892與鼻咽癌TNM分期及臨床分期具有相關(guān)性。 3.鼻咽癌中低表達(dá)的血漿miR-9、miR-124、miR-892及miR-3676在腫瘤治愈后表達(dá)增高,而復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)降低；而高表達(dá)的血漿miR-3135在鼻咽癌治愈后表達(dá)降低。這些血漿差異miRNA在治療前后及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移時(shí)的動(dòng)態(tài)變化顯示了與病情基本一致的變化趨勢(shì)。 4.在鼻咽癌細(xì)胞株放療照射前后,細(xì)胞miR-9、miR-124、miR-892的表達(dá)變化顯示了與血漿miRNA治療前后一致的變化,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-892b可影響鼻咽癌細(xì)胞放療存活率。提示miR-892b可能成為鼻咽癌放療抵抗的標(biāo)志物。 5. miR-9、miR-92、miR-124及miR-892主要是以exosome的形式存在于細(xì)胞上清,而miR-214及miR-3135可能以蛋白復(fù)合體或其他形式存在。.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳智賢;孫愛民;陳勇;劉英;詹軍芳;陳龍華;袁亞維;;放射敏感性、X線輻射劑量對(duì)鼻咽癌細(xì)胞miR-7表達(dá)的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年08期

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本文編號(hào)：2526038