發(fā)布時間：2019-08-05 12:55

【摘要】： 目的利用恒河猴血管內(nèi)皮細(xì)胞(RMVECs)移植替代角膜內(nèi)皮細(xì)胞(CECs),通過觀察移植到去除后彈力層的角膜內(nèi)表面的血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)、功能的改變,探索血管內(nèi)皮細(xì)胞移植治療角膜內(nèi)皮損傷的可行性。 方法體外培養(yǎng)增殖RMVECs并用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Brdu)標(biāo)記。將恒河猴4只隨機分為兩組:實驗組(3只)、對照組(1只)。實驗組:將體外培養(yǎng)的Brdu標(biāo)記的RMVECs利用離心沉淀法移植到撕除后彈力層的恒河猴角膜內(nèi)表面后縫回植床;對照組:將撕除后彈力層的術(shù)眼角膜植片原位縫回植床。術(shù)后觀察各組角膜植片透明情況,術(shù)前、術(shù)后7、14、21、30、45、60、90天分別抽取各組房水,用ELISA法測定房水中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)濃度。術(shù)后30、60、90天分別摘取術(shù)眼,行病理切片、抗Brdu單克隆抗體免疫組化染色、掃描電鏡及透射電鏡觀察RMVECs在角膜植片內(nèi)表面的分布及細(xì)胞超微形態(tài)結(jié)構(gòu)。 結(jié)果角膜透明度:在實驗觀察期內(nèi)(3個月),實驗組角膜植片比對照組角膜植片有較好的透明性,未出現(xiàn)新生血管及大泡性角膜病變。病理切片:實驗組角膜內(nèi)表面可見細(xì)胞層,抗Brdu單克隆抗體免疫組化染色陽性,示該細(xì)胞為培養(yǎng)的Brdu標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞;對照組角膜內(nèi)表面未見細(xì)胞樣結(jié)構(gòu)。掃描電鏡:實驗組角膜植片內(nèi)表面可見RMVECs分布均勻,生長良好,呈不規(guī)則多邊形,表面可見微絨毛,RMVECs間可見少量白細(xì)胞,小梁網(wǎng)處部分細(xì)胞碎片聚集;對照組角膜內(nèi)表面呈纖維物質(zhì)樣,未見細(xì)胞生長。透射電鏡:培養(yǎng)的RMVECs及實驗組角膜內(nèi)表面的RMVECs呈不規(guī)則扁圓狀,細(xì)胞間大量橋粒鏈接,胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器豐富,可見特征性WP小體,提示其具備活體血管內(nèi)皮細(xì)胞的特征與活性,對照組角膜內(nèi)表面未見細(xì)胞結(jié)構(gòu)。房水VEGF濃度:實驗組和對照組術(shù)后1周VEGF濃度差別無統(tǒng)計學(xué)意義,術(shù)后2、3、4、6、8、12周差別具有統(tǒng)計學(xué)意義,相應(yīng)時間點實驗組顯著高于對照組。 結(jié)論恒河猴血管內(nèi)皮細(xì)胞能夠在撕除后彈力層的角膜內(nèi)表面生長,其超微結(jié)構(gòu)與活體細(xì)胞相似,細(xì)胞器豐富,細(xì)胞活力好,能在一定程度上發(fā)揮屏障作用及主動液泵功能,維持角膜的脫水狀態(tài)和透明性。房水VEGF濃度在術(shù)后1月內(nèi)持續(xù)升高,之后穩(wěn)定在一較高水平。提示利用血管內(nèi)皮細(xì)胞移植替代角膜內(nèi)皮細(xì)胞的功能有可能成為治療角膜內(nèi)皮損傷的一種新思路。
【圖文】：

圖27圖282、RMVECs移植后，角膜植片透射電鏡觀察RMvECS移植到角膜內(nèi)表面后，呈長梭形生長，與角膜基質(zhì)緊密貼附，相鄰的RMVECS細(xì)胞之間可見橋粒連接。細(xì)胞核亦為長梭形，染色質(zhì)均勻分布。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、溶酶體等細(xì)胞器，但與移植前相比較，細(xì)胞核及線粒體腫脹，，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。胞質(zhì)內(nèi)可見內(nèi)皮細(xì)胞特有的超微結(jié)構(gòu):Weibel一Palade小體(WPBs)(t)。見29、30:

03、對照組角膜內(nèi)表面透射電鏡觀察
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R779.6

【參考文獻】

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本文編號：2523135