【摘要】： 目的利用恒河猴血管內皮細胞(RMVECs)移植替代角膜內皮細胞(CECs),通過觀察移植到去除后彈力層的角膜內表面的血管內皮細胞形態(tài)、功能的改變,探索血管內皮細胞移植治療角膜內皮損傷的可行性。 方法體外培養(yǎng)增殖RMVECs并用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Brdu)標記。將恒河猴4只隨機分為兩組:實驗組(3只)、對照組(1只)。實驗組:將體外培養(yǎng)的Brdu標記的RMVECs利用離心沉淀法移植到撕除后彈力層的恒河猴角膜內表面后縫回植床;對照組:將撕除后彈力層的術眼角膜植片原位縫回植床。術后觀察各組角膜植片透明情況,術前、術后7、14、21、30、45、60、90天分別抽取各組房水,用ELISA法測定房水中血管內皮細胞生長因子(VEGF)濃度。術后30、60、90天分別摘取術眼,行病理切片、抗Brdu單克隆抗體免疫組化染色、掃描電鏡及透射電鏡觀察RMVECs在角膜植片內表面的分布及細胞超微形態(tài)結構。 結果角膜透明度:在實驗觀察期內(3個月),實驗組角膜植片比對照組角膜植片有較好的透明性,未出現(xiàn)新生血管及大泡性角膜病變。病理切片:實驗組角膜內表面可見細胞層,抗Brdu單克隆抗體免疫組化染色陽性,示該細胞為培養(yǎng)的Brdu標記的血管內皮細胞;對照組角膜內表面未見細胞樣結構。掃描電鏡:實驗組角膜植片內表面可見RMVECs分布均勻,生長良好,呈不規(guī)則多邊形,表面可見微絨毛,RMVECs間可見少量白細胞,小梁網處部分細胞碎片聚集;對照組角膜內表面呈纖維物質樣,未見細胞生長。透射電鏡:培養(yǎng)的RMVECs及實驗組角膜內表面的RMVECs呈不規(guī)則扁圓狀,細胞間大量橋粒鏈接,胞質內細胞器豐富,可見特征性WP小體,提示其具備活體血管內皮細胞的特征與活性,對照組角膜內表面未見細胞結構。房水VEGF濃度:實驗組和對照組術后1周VEGF濃度差別無統(tǒng)計學意義,術后2、3、4、6、8、12周差別具有統(tǒng)計學意義,相應時間點實驗組顯著高于對照組。 結論恒河猴血管內皮細胞能夠在撕除后彈力層的角膜內表面生長,其超微結構與活體細胞相似,細胞器豐富,細胞活力好,能在一定程度上發(fā)揮屏障作用及主動液泵功能,維持角膜的脫水狀態(tài)和透明性。房水VEGF濃度在術后1月內持續(xù)升高,之后穩(wěn)定在一較高水平。提示利用血管內皮細胞移植替代角膜內皮細胞的功能有可能成為治療角膜內皮損傷的一種新思路。
【圖文】：

圖27圖282、RMVECs移植后，角膜植片透射電鏡觀察RMvECS移植到角膜內表面后，呈長梭形生長，與角膜基質緊密貼附，相鄰的RMVECS細胞之間可見橋粒連接。細胞核亦為長梭形，染色質均勻分布。細胞質內可見大量內質網、高爾基復合體、溶酶體等細胞器，但與移植前相比較，細胞核及線粒體腫脹，，內質網擴張。胞質內可見內皮細胞特有的超微結構:Weibel一Palade小體(WPBs)(t)。見29、30:

03、對照組角膜內表面透射電鏡觀察
【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R779.6

【參考文獻】

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本文編號：2523135