【摘要】：目的:探討紫杉醇聚乳酸微球在兔小梁切除術(shù)后抗增殖作用的效果及其安全性評(píng)價(jià)。 方法:①采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定紫杉醇聚乳酸微球在房水中的釋放時(shí)間,觀察其在房水中的緩釋作用。②將健康成年家兔48只構(gòu)建青光眼濾過(guò)手術(shù)動(dòng)物模型,隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)Ⅰ組及實(shí)驗(yàn)Ⅱ組,均行右眼標(biāo)準(zhǔn)小梁切除術(shù);術(shù)前對(duì)實(shí)驗(yàn)Ⅱ組行F-ERG檢查眼底情況,并對(duì)各組的角膜、結(jié)膜、前房、晶體、眼底、眼壓等進(jìn)行檢查以排除眼部疾患。術(shù)中在手術(shù)部位的鞏膜瓣下各組對(duì)應(yīng)不用藥、用0.3mg/ml絲裂霉素C(MMC)及0.3mg/ml紫杉醇5min,及在實(shí)驗(yàn)Ⅱ組的結(jié)膜與鞏膜之間放置2.5mg紫杉醇聚乳酸微球。③濾過(guò)泡按Kronfeld標(biāo)準(zhǔn)分型[1]。比較術(shù)后第7、21、35、49天各組功能型濾過(guò)泡的數(shù)量。④測(cè)量術(shù)前及術(shù)后第7、21、35、49天各組眼壓并記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,比較各組在各時(shí)間點(diǎn)的眼壓有無(wú)差異。⑤組織病理學(xué):術(shù)后第21、35、49天各組均隨機(jī)取四只兔子,摘除已做手術(shù)眼球,取濾過(guò)泡及其周圍角鞏膜組織,固定,制成石蠟切片,做蘇木精—伊紅(HE)染色,光鏡下觀察濾過(guò)道開(kāi)放情況及炎性細(xì)胞數(shù)量;做免疫組化增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)染色,觀察成纖維細(xì)胞的增殖情況;做Masson三色染色觀察濾過(guò)道新生膠原纖維的增殖情況。⑥術(shù)后用裂隙燈檢查各組可能出現(xiàn)的并發(fā)癥:結(jié)膜傷口漏、角膜上皮點(diǎn)狀脫落、淺前房、前房炎癥反應(yīng)、晶體混濁、薄壁濾過(guò)泡等;用間接眼底鏡觀察有無(wú)眼底損害。⑦紫杉醇聚乳酸微球的安全性評(píng)價(jià):將12只兔子于術(shù)后第7、21、35、49天均進(jìn)行裂隙燈顯微鏡檢查,觀察有無(wú)結(jié)膜傷口漏、角膜上皮點(diǎn)狀脫落、淺前房、前房炎癥反應(yīng)等并發(fā)癥,用間接眼底鏡檢查眼底情況,觀察紫杉醇聚乳酸微球?qū)ρ蹆?nèi)組織的安全性;分別于術(shù)前及術(shù)后第7、21、35、49天行角膜內(nèi)皮鏡檢查及F-ERG檢查,分別觀察紫杉醇聚乳酸微球?qū)悄?nèi)皮細(xì)胞、視網(wǎng)膜的毒副作用;并于術(shù)后第49天將兔子處死,取手術(shù)部位對(duì)應(yīng)的角膜、房角、晶體前囊膜組織行透射電鏡檢查,觀察紫杉醇聚乳酸微球?qū)悄?nèi)皮細(xì)胞、房角小梁網(wǎng)內(nèi)皮細(xì)胞及晶體上皮細(xì)胞的影響。 結(jié)果:①房水中藥物含量測(cè)定表明紫杉醇聚乳酸微球有明顯的緩釋作用,體內(nèi)藥物濃度能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持較高水平;②術(shù)后第7天各組功能型濾過(guò)泡的數(shù)量基本相同;術(shù)后第21、35、49天空白對(duì)照組功能型濾過(guò)泡的數(shù)量均是四組中最低的,標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)Ⅰ組功能型濾過(guò)泡的數(shù)量無(wú)顯著差別;實(shí)驗(yàn)Ⅱ組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)功能型濾過(guò)泡數(shù)量明顯多于其他三組;③術(shù)后第7天四組眼壓基本相同(P0.05);實(shí)驗(yàn)Ⅱ組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的眼壓均低于其他三組(P0.05);標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)Ⅰ組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的眼壓基本相同(P0.05),無(wú)顯著差異;術(shù)后第21、35、49天空白對(duì)照組眼壓均較其他三組高(P0.05),有顯著差異;④術(shù)后第7天四組組織病理學(xué)無(wú)顯著差異;術(shù)后第21、35、49天實(shí)驗(yàn)Ⅱ組HE染色顯示大部分濾過(guò)道開(kāi)放情況良好,炎性細(xì)胞數(shù)量較少,PCNA染色顯示成纖維細(xì)胞增殖數(shù)量及Masson三色染色顯示新生膠原纖維增殖數(shù)量均較其他三組少;而從術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)HE染色、PCNA免疫組化染色、Masson三色染色結(jié)果來(lái)看,標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)Ⅰ組的抗增殖效果無(wú)顯著差異,隨著時(shí)間的發(fā)展,濾過(guò)道中增殖的細(xì)胞與纖維逐漸增多;術(shù)后第21天空白對(duì)照組濾過(guò)道的增殖情況較其他三組出現(xiàn)差別,且隨著時(shí)間的推移,這種差別越來(lái)越明顯,濾過(guò)道在術(shù)后第49天已被完全堵塞。⑤術(shù)后并發(fā)癥:標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組有兔眼出現(xiàn)結(jié)膜傷口漏和淺前房的現(xiàn)象;標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)Ⅰ組分別有兔眼出現(xiàn)角膜上皮點(diǎn)狀脫落及薄壁濾過(guò)泡現(xiàn)象,這些并發(fā)癥經(jīng)過(guò)幾天后均愈合,并未發(fā)現(xiàn)異常。而術(shù)后標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組有兔眼出現(xiàn)晶體輕微混濁現(xiàn)象。術(shù)后空白對(duì)照組的前房炎癥反應(yīng)較重,易出現(xiàn)淺前房;而實(shí)驗(yàn)Ⅱ組在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)前房炎癥反應(yīng)均較其他三組輕。⑥紫杉醇聚乳酸微球的安全性評(píng)價(jià)結(jié)果:裂隙燈檢查:紫杉醇聚乳酸微球?qū)ρ蹆?nèi)組織未產(chǎn)生明顯的并發(fā)癥;眼底檢查也未發(fā)現(xiàn)異常;術(shù)后F-ERG檢查顯示視網(wǎng)膜電流圖潛時(shí)及波幅較術(shù)前無(wú)明顯改變;角膜內(nèi)皮細(xì)胞鏡檢查顯示紫杉醇聚乳酸微球未使內(nèi)皮細(xì)胞密度和細(xì)胞面積變異系數(shù)的指標(biāo)發(fā)生明顯改變;透射電鏡結(jié)果顯示,與對(duì)照眼相比,紫杉醇聚乳酸微球?qū)悄?nèi)皮細(xì)胞、房角小梁網(wǎng)內(nèi)皮細(xì)胞、晶體上皮細(xì)胞無(wú)明顯的毒副作用。而紫杉醇聚乳酸微球在應(yīng)用于手術(shù)之前經(jīng)過(guò)60Co輻射滅菌,達(dá)到了無(wú)菌手術(shù)的要求,可應(yīng)用于手術(shù)中。 結(jié)論:本研究制備的紫杉醇聚乳酸微球在房水中的藥物濃度能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持較高水平,具有明顯的緩釋作用;生物相容性良好,無(wú)明顯的毒副作用;術(shù)中在手術(shù)部位結(jié)膜和鞏膜之間植入可有效抑制炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及新生膠原纖維的增殖,有助于功能型濾過(guò)泡的形成,保持濾過(guò)道的通暢,有效地降低眼壓;同時(shí),其應(yīng)用于眼部,具有一定的安全性,不會(huì)對(duì)眼內(nèi)組織產(chǎn)生危害。因此,紫杉醇聚乳酸微球有望成為青光眼濾過(guò)術(shù)后抗增殖的一種新的輔助藥物。
文內(nèi)圖片：
圖片說(shuō)明： 1163.436紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖y = 3.3647x - 4.3147R2= 0.99980204060801001201401601800 10 20 30 40 50 60濃度C（μg/ml）面積（×峰0）1圖 1 紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2.3 色譜行為紫杉醇對(duì)照品溶液，空白房水，紫杉醇聚乳酸微球在房水中的高效液相色譜圖顯示：紫杉醇原料藥的保留時(shí)間為 15.98h (如圖 2)，紫杉醇聚乳酸微球在房水中的保留時(shí)間為 15.92h (如圖 3)，而空白房水中在 15.90h 左右沒(méi)有峰 (如圖 4)。因此，，可知房水中的內(nèi)源性雜質(zhì)、其它代謝物或雜質(zhì)等，對(duì)紫杉醇的測(cè)定沒(méi)有干擾。
文內(nèi)圖片：
圖片說(shuō)明：紫杉醇聚乳酸微球樣品房水中HPLC圖譜
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R779.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2514799