【摘要】：目的：通過(guò)檢測(cè)玻璃體切割術(shù)后前房氧濃度和炎性因子的變化、晶狀體纖維細(xì)胞凋亡情況以、caspase-8和DLAD基因表達(dá)的變化以及硅油填充術(shù)后晶狀體基因表達(dá)譜的變化,探討玻璃體切割術(shù)后并發(fā)性白內(nèi)障的可能發(fā)病機(jī)制。 方法：分五部分進(jìn)行研究,第一部分：建立兔眼玻璃體切割術(shù)后并發(fā)性白內(nèi)障的動(dòng)物模型,術(shù)后裂隙燈觀察晶狀體混濁程度并照相。第二部分：于術(shù)后1天、3天、7天、1月、3月抽取前房房水檢測(cè)氧濃度和IL-2、TNF-a的變化；第三部分：于術(shù)后1天、3天、7天、1月、3月取兔眼晶狀體,病理學(xué)觀察晶狀體纖維細(xì)胞形態(tài)、原位末端核苷標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)其凋亡并計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)、免疫組化法測(cè)定Caspase-8的表達(dá)。第四部分：采用半定量RT-PCR技術(shù)測(cè)定術(shù)后1天、3天、7天、1月、3月晶狀體上DLAD基因的表達(dá)情況。第五部分：應(yīng)用DNA芯片技術(shù)對(duì)硅油填充術(shù)后晶狀體的基因表達(dá)譜進(jìn)行差異表達(dá)譜分析,并采用實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果：成功建立了玻璃體切割術(shù)后并發(fā)性白內(nèi)障的動(dòng)物模型；玻璃體切割術(shù)后前房氧含量和炎性因子IL-2、TNF-a有不同程度的增加；玻璃體切割術(shù)后晶狀體纖維細(xì)胞凋亡增加,細(xì)胞內(nèi)Caspase-8明顯表達(dá)；玻璃體切割術(shù)后晶狀體的DLAD基因隨時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸減弱；芯片結(jié)果表明硅油填充術(shù)后晶狀體變化的基因主要有氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞分化粘附等相關(guān)基因。實(shí)時(shí)定量PCR與芯片檢測(cè)結(jié)果具有相同的方向性,且數(shù)據(jù)非常接近。 結(jié)論：玻璃體切割術(shù)后晶狀體周?chē)h(huán)境的變化導(dǎo)致了某些調(diào)控機(jī)制的破壞,使晶狀體纖維細(xì)胞凋亡增加,而細(xì)胞器的降解減少,這種動(dòng)態(tài)平衡的破壞,從而導(dǎo)致了白內(nèi)障的發(fā)生。硅油填充術(shù)后并發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展涉及多基因改變；實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證了基因芯片的可靠性。
[Abstract]:Objective: to detect the changes of anterior chamber oxygen concentration and inflammatory factors, apoptosis of lens fiber cells, the expression of caspase-8 and DLAD genes and the changes of lens gene expression profile after silicone oil filling. To investigate the possible pathogenesis of complicated cataract after vitrectomy. Methods: the study was carried out in five parts. In the first part, the animal model of complicated cataract after vitrectomy was established, and the degree of lens opacification was observed and photographed by slit lamp after operation. The second part: the changes of oxygen concentration and IL-2,TNF-a were detected by extracting aqueous humor from anterior chamber 1 day, 3 days, 7 days, 1 month and 3 months after operation. The third part: the lens of rabbit eyes was taken 1 day, 3 days, 7 days, 1 month and 3 months after operation. The morphology of lens fiber cells was observed pathologically. Apoptosis was detected by in situ terminal nucleosides labeling (TUNEL) method and the apoptosis index (AI), was calculated. The expression of Caspase-8 was detected by immunohistochemistry. Part IV: the expression of DLAD gene in lens was measured by semi-quantitative RT-PCR at 1 day, 3 days, 7 days, 1 month and 3 months after operation. In the fifth part, the differential expression profiles of lens after silicone oil filling were analyzed by DNA chip technique, and verified by real-time quantitative PCR. Results: the animal model of complicated cataract after vitrectomy was successfully established, and the oxygen content and inflammatory factor IL-2,TNF-a in the anterior chamber were increased in varying degrees. After vitrification, the apoptosis of lens fiber cells increased and the expression of Caspase-8 was obvious, and the expression of DLAD gene in lens decreased gradually with the prolongation of time. The results of microarray showed that the main genes of lens changes after silicone oil filling were oxidative stress, inflammatory reaction, apoptosis, signal transduction, cell differentiation and adhesion and so on. The real-time quantitative PCR has the same directivity as the chip detection results, and the data are very close. Conclusion: the changes of microenvironment around lens after vitrectomy lead to the destruction of some regulatory mechanisms, which increase the apoptosis of lens fiber cells and decrease the degradation of organelle, which destroys the dynamic balance. This leads to the occurrence of cataracts. The occurrence and development of complicated cataract after silicone oil filling involves polygene changes, and the reliability of gene chip is further verified by real-time quantitative PCR.
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R779.6

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本文編號(hào)：2493125