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米諾環(huán)素對大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護及對GDNF和VEGF表達的影

發(fā)布時間:2017-03-07 18:17

  本文關(guān)鍵詞:米諾環(huán)素對大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護及對GDNF和VEGF表達的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《河北醫(yī)科大學》 2013年

米諾環(huán)素對大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護及對GDNF和VEGF表達的影響

蔡晶晶  

【摘要】:目的:視神經(jīng)損傷是臨床常見的眼外傷類型,可以導致嚴重的視力障礙甚至視力完全喪失,是眼科領域亟待解決的難題。既往認為視神經(jīng)損傷后無再生能力,而近年來研究顯示,約有50%視神經(jīng)損傷患者能不同程度的恢復視力,表明視神經(jīng)損傷后在一定條件下可以再生。因此,尋找一種安全有效的藥物以延緩視神經(jīng)損害病變的發(fā)展迫在眉睫。米諾環(huán)素是一種第二代半合成四環(huán)素類抗生素,近年研究顯示,米諾環(huán)素(Minocycline,MC)對受損的神經(jīng)元有相當強的保護作用。人們對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究發(fā)現(xiàn),其在神經(jīng)系統(tǒng)的變性等疾病中具有抗炎、抗凋亡等作用,能夠通過抑制小膠質(zhì)細胞及前凋亡因子,拮抗谷氨酸的神經(jīng)毒性作用,從而提高神經(jīng)元的生存率,發(fā)揮神經(jīng)元保護作用。動物模型研究表明,米諾環(huán)素在腦中可達50%的血藥峰濃度,因此在許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如腦缺血、腦外傷、萎縮性脊髓側(cè)索硬化、亨廷頓病等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜疾病動模型中均顯示有一定的神經(jīng)元保護作用。而且經(jīng)實踐證明,長期口服米諾環(huán)素無明顯不良反應、安全有效。雖然米諾環(huán)素用在中樞神經(jīng)保護方面的研究日漸增加,但在視神經(jīng)損傷后,米諾環(huán)素能否發(fā)揮一定的神經(jīng)保護作用及作用機制尚不清楚,且在眼科視神經(jīng)保護方面的報道少見。 本實驗通過采用視神經(jīng)夾傷模型建立大鼠視神經(jīng)損傷模型,并加以腹腔注射一定劑量的米諾環(huán)素進行干預,應用計算機圖像分析技術(shù)和免疫組化技術(shù)對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞和膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)及血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)的表達進行半定量測定,探討米諾環(huán)素對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用,從而為臨床治療視神經(jīng)損傷提供實驗依據(jù)。 方法:選用健康清潔級雄性SD大鼠50只(由河北醫(yī)科大學實驗動物研究中心提供),體質(zhì)量(200±20)g,適應性喂養(yǎng)5d后查雙眼,屈光間質(zhì)清,瞳孔等大、等圓,對光反射靈敏,眼底無異常者入組,隨機分為三組:空白對照組10只,生理鹽水對照組20只,米諾環(huán)素治療組20只。兩實驗組均采用視神經(jīng)鉗夾法將左眼制成視神經(jīng)損傷模型,右眼為自身對照眼,之后行直接檢眼鏡檢查,眼底紅光反射正常,無缺血,無眼球突出,眼瞼閉合完全者為成功模型,右眼不予處理。 實驗動物10%水合氯醛(35mg/kg)腹腔注射麻醉并經(jīng)常規(guī)無菌處理后,沿角鞏膜緣環(huán)形剪開顳側(cè)球結(jié)膜,鈍性分離暴露視神經(jīng)眶內(nèi)段,用標定力量的反向鑷于球后2mm處鉗夾視神經(jīng),致傷時間為20s,用l0-0尼龍線縫合球結(jié)膜2針,結(jié)膜囊內(nèi)涂氧氟沙星眼膏。米諾環(huán)素組、生理鹽水組于視神經(jīng)夾傷前1h及夾傷后每天腹腔分別注射米諾環(huán)素45mg/kg、等容量生理鹽水,空白對照組無特殊處理。 分別于傷后1天、3天、7天、14天、28天多聚甲醛心臟灌注處死大鼠,立即摘除左眼眼球,鋸齒緣后0.5mm處剪開眼球壁,去除眼前節(jié)和玻璃體。用體積分數(shù)為4%的多聚甲醛進行固定,4℃冰箱過夜,眼杯行全層石蠟包埋,制備5~7μm視網(wǎng)膜切片,顯微鏡觀察并同步采集圖像。 常規(guī)HE染色觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學變化,并應用圖像分析系統(tǒng)(×400)對結(jié)果進行分析(每張切片取4個視野,在距離視乳頭中心1.5mm處視網(wǎng)膜為觀察始點分別向四面各取1個視野,每個眼球取2張切片)。GDNF的檢測采用免疫組化半定量的方法,計算機圖像分析,并用多功能真彩色細胞圖像分析管理系統(tǒng)對視網(wǎng)膜中陽性反應部位進行分析,得出平均光密度值。 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,平均光密度值及平均陽性細胞數(shù)結(jié)果均以x|-±s表示,同一組內(nèi)不同時間點數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(One-wayANOVA),不同組間同一時間點數(shù)據(jù)進行兩樣本t檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義,P0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。 結(jié)果: 1視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞蘇木精-伊紅染色結(jié)果: 1.1視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞形態(tài)學改變:空白對照組大鼠視網(wǎng)膜大致呈3層平行排列,分為神經(jīng)節(jié)細胞層、雙極細胞層及感光細胞層,視網(wǎng)膜節(jié)細胞位于視網(wǎng)膜內(nèi)層,單層排列,細胞比較致密,細胞核排列均勻整齊。生理鹽水對照組可見隨著損傷時間延長,大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層胞核排列明顯紊亂,空泡化程度增強,雙極細胞層胞核數(shù)量也不同程度減少。比較而言,相同時間點米諾環(huán)素治療組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞排列相對整齊,空泡化程度相對較弱,雙極細胞層飽和數(shù)量相對較多。 1.2視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量改變:正常對照組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)為29.9±0.10。生理鹽水對照組大鼠1天、3天、7天、14天、28天光鏡下每×400視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目分別為:23.6±2.07個、18.2±0.84個、12.2±1.30個、7.4±2.19個、3.6±1.51個,米諾環(huán)素治療組大鼠1天、3天、7天、14天、28天光鏡下每×400視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目分別為:26.4±2.07個、21.8±2.59個、15.4±1.14個、11.8±1.64個、7.6±1.81個,相同時間點治療組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量均高于對照組,3天時間點視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P 0.05),7天、14天、28天時間點視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)差異有顯著統(tǒng)計學意義(P 0.01)。 2視網(wǎng)膜GDNF和VEGF免疫組化半定量檢測結(jié)果: 2.1GDNF在視網(wǎng)膜中的表達:大鼠視網(wǎng)膜中GDNF主要在各層細胞胞體表達,呈棕黃色,正常對照組視網(wǎng)膜組織中GDNF弱陽性表達,平均光密度值為0.1543±0.0060,各時間點無變化。生理鹽水對照組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層GDNF表達平均光密度值1天、3天、7天、14天、28天的值分別為:0.2323±0.0024、0.2804±0.0040、0.2962±0.0022、0.3401±0.0021、0.2830±0.0027,米諾環(huán)素治療組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層GDNF表達平均光密度值1天、3天、7天、14天、28天的值分別為:0.2348±0.0036、0.2870±0.0041、0.3016±0.0022、0.3506±0.0060、0.2882±0.0023,視神經(jīng)夾傷后兩實驗組均有GDNF陽性表達,生理鹽水對照組表現(xiàn)為弱陽性;米諾環(huán)素治療組GDNF表達呈上升趨勢,14天后表達呈強陽性;生理鹽水對照組表達也隨時間有所增強,但14天時表達較治療組仍不明顯;相同時間點治療組GDNF陽性率均高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P 0.05)。 2.2VEGF在視網(wǎng)膜中的表達:大鼠視網(wǎng)膜中VEGF主要在各層細胞胞體、胞漿表達,呈棕黃色。正常對照組視網(wǎng)膜組織中VEGF弱陽性表達,平均光密度值為0.1598±0.0055,各時間點無變化。生理鹽水對照組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層VEGF表達平均光密度值1天、3天、7天、14天、28天的值分別為:0.2266±0.0013,0.2276±0.0011,0.2909±0.0044,0.3209±0.0033,0.3427±0.0011;米諾環(huán)素治療組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層VEGF表達的平均光密度值1天、3天、7天、14天、28天的值分別為:0.2271±0.0017,0.2287±0.0007,0.3090±0.0105,0.3256±0.0021,0.3488±0.0010。米諾環(huán)素治療組及生理鹽水對照組VEGF表達均呈上升趨勢,第1、3、7天時間點生理鹽水對照組較米諾環(huán)素治療組平均光密度值數(shù)值比較無統(tǒng)計學意義(P0.05),從第14天開始米諾環(huán)素治療組VEGF表達的平均光密度值較生理鹽水對照組高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),28天時間點時,血管內(nèi)皮生長因子表達的平均光密度值較生理鹽水對照組高,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 結(jié)論: 1米諾環(huán)素可減少視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡,,對視神經(jīng)有保護作用。 2米諾環(huán)素能增強視神經(jīng)損傷后早期視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)的表達,對損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞有一定的保護作用。 3米諾環(huán)素能增強視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達,從而發(fā)揮視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞保護作用。

【關(guān)鍵詞】:
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R774.1
【目錄】:

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9 車向明,許延發(fā),王康,盛薇,賈建洛;早期胃癌血管內(nèi)皮生長因子的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];中華胃腸外科雜志;2002年04期

10 茹晉麗,李小峰,胡學芳,王來遠,李雪飛;血管內(nèi)皮生長因子在類風濕關(guān)節(jié)炎的表達[J];中華風濕病學雜志;2003年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙忠芳;呂仁榮;霍然;傅洪濱;徐廣琪;;普萘洛爾治療增生期血管瘤患兒血清中VEGF、MMP-9的變化[A];中華醫(yī)學會整形外科學分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學專業(yè)委員會學術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

2 徐勇;黃仁魏;王東寧;林桂真;林東軍;何易;李旭東;林曲;;急性白血病血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和受體的表達及其臨床意義研究[A];中華醫(yī)學會第八次全國血液學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 李飛;李樹清;;VEGF表達在局灶性腦缺血后亞低溫腦保護中的作用研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術(shù)會議論文摘要[C];2010年

4 趙忠芳;呂仁榮;霍然;傅洪濱;徐廣琪;;普萘洛爾治療增生期血管瘤患兒血清中VEGF、MMP-9的變化[A];中華醫(yī)學會整形外科學分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學專業(yè)委員會學術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學會醫(yī)學美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

5 杜娟;王景美;錢曉萍;劉寶瑞;;COX-2和VEGF在胃癌中的表達和意義[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術(shù)會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

6 田翀;彭曉琳;張嫦慧;唐玉涵;任瑋葉;孫秀發(fā);郝麗萍;應晨江;;VEGF在白藜蘆醇緩解內(nèi)皮細胞高通透性的作用[A];營養(yǎng)與慢性病——中國營養(yǎng)學會第七屆理事會青年工作委員會第一次學術(shù)交流會議論文集[C];2010年

7 陳西華;;小鼠月經(jīng)模型中Hif-1α對VEGF調(diào)節(jié)作用的研究[A];中國生理學會第23屆全國會員代表大會暨生理學學術(shù)大會論文摘要文集[C];2010年

8 梁國剛;;TGF-β1和VEGF在大腸癌中的表達及臨床意義[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合普通外科臨床與基礎學術(shù)會議暨全國中西醫(yī)結(jié)合外科危重病學習班論文匯編[C];2003年

9 廖圣愷;;5-LOX、CD-34、VEGF在涎腺黏液表皮樣癌中的表達及意義[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

10 孫大軍;杜建時;王征;臧廣生;劉卓;;丹參與VEGF聯(lián)合應用在動物肢體缺血模型中的實驗研究[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學會周圍血管疾病專業(yè)委員會第六屆換屆暨學術(shù)交流會論文集[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 由香港麥迪信醫(yī)學出版有限公司供稿;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

2 張中橋;[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 王雪飛 孫揚;[N];健康報;2005年

4 新華社;[N];中國醫(yī)藥報;2005年

5 馬志中;[N];健康報;2007年

6 王婷婷;[N];科技日報;2004年

7 北京同仁醫(yī)院眼科中心教授 宋維賢;[N];健康報;2008年

8 文執(zhí) 編譯;[N];科技日報;2002年

9 王天堂;[N];中國化工報;2002年

10 北京同仁醫(yī)院眼科中心 宋維賢;[N];中國醫(yī)藥報;2008年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張國鵬;兩種核素報告基因系統(tǒng)用于監(jiān)測治療基因VEGF165表達的基礎研究[D];華中科技大學;2010年

2 費嘉;VEGF mRNA反義核酸對白血病細胞藥物敏感性的影響[D];暨南大學;2003年

3 趙薇;細胞因子GM-CSF、VEGF對大鼠內(nèi)皮祖細胞功能活性的影響及其信號轉(zhuǎn)導途徑的體外研究[D];中國醫(yī)科大學;2008年

4 夏思文;神經(jīng)橋接導管內(nèi)GDNF緩釋微囊對大鼠面神經(jīng)的誘向再生作用[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

5 董宏偉;大腸癌形成過程中腫瘤血管生成與細胞凋亡的變化及VEGF和p53表達的意義[D];中國醫(yī)科大學;2002年

6 彭湃;VEGF在慢性創(chuàng)面愈合中的作用及機理研究[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

7 范海濤;Survivin與VEGF的檢測及二者反義寡核苷酸對膀胱癌的治療研究[D];吉林大學;2010年

8 楊秀鵬;Tryptase誘導AML骨髓基質(zhì)細胞高表達VEGF及機制的研究[D];中國醫(yī)科大學;2010年

9 葉琇錦;成人急性白血病患者骨髓血管新生及相關(guān)機理的實驗研究和臨床意義[D];浙江大學;2002年

10 張聚良;血管內(nèi)皮生長因子變異體基因的構(gòu)建、表達及表達產(chǎn)物體內(nèi)誘導自身抗體產(chǎn)生的研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔡晶晶;米諾環(huán)素對大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護及對GDNF和VEGF表達的影響[D];河北醫(yī)科大學;2013年

2 孫潔;VEGF表達及微血管密度與三陰性乳腺癌及非三陰性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系[D];廣西醫(yī)科大學;2010年

3 齊振平;非小細胞肺癌中VEGF及其受體Flt-1的表達及臨床意義[D];大連醫(yī)科大學;2010年

4 劉小兵;腦膠質(zhì)瘤VEGF,bFGF,IGFBP-2在血漿和腦脊液的定量分析及意義[D];河北醫(yī)科大學;2010年

5 張志學;肺腺癌中血管內(nèi)皮生長因子及其受體的表達與血管生成及預后的關(guān)系[D];青島大學;2001年

6 李磊;VEGF,MMP-2在胃癌中的表達及其與浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學;2002年

7 孫丹;Snail、VEGF、MMP-9在肝細胞肝癌中的表達及臨床意義[D];山東大學;2010年

8 欒東風;鋅對高糖條件下視網(wǎng)膜müller細胞分泌VEGF的影響[D];吉林大學;2010年

9 郭曉斌;在細胞三維立體培養(yǎng)模型中觀察VEGF對H460細胞MMP-2表達的影響[D];蘭州大學;2010年

10 劉冬梅;高糖環(huán)境下脂聯(lián)素對人心肌細胞增殖及VEGF表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2010年


  本文關(guān)鍵詞:米諾環(huán)素對大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護及對GDNF和VEGF表達的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號:248892

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