【摘要】：背景和目的：EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)編碼早期基因BARF1是新近確立的EBV致癌基因之一,其轉化作用已在多種細胞系中得到證實。由于BARF1在多數鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)和EBV相關胃癌組織中表達,推測其可能在NPC、胃癌等上皮細胞性腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期在檢測BARF1基因多態(tài)性時發(fā)現(xiàn)V29A變異型在NPC中的檢出率高于健康人群。本研究旨在探討B(tài)ARF1基因對NPC細胞系腫瘤原性的影響以及BARF1基因變異型對其致癌潛能的影響,為研究BARF1參與NPC的作用及機制提供依據。 方法：構建BARF1基因原型(B95-8)和變異型(V29A)慢病毒表達載體,分別轉染EBV陰性NPC細胞系CNE,殺稻瘟菌素篩選,RT-PCR和qRT-PCR鑒定目的基因表達獲得BARF1原型和變異型基因穩(wěn)定轉染細胞。以對照病毒轉染細胞為對照,進行MTT實驗、細胞周期檢測、平板克隆形成實驗、凋亡誘導實驗和細胞遷移實驗,檢測BARF1原型和變異型基因對CNE細胞生物學行為的影響。 結果：(1)成功構建BARF1基因原型和變異型基因穩(wěn)定轉染細胞,2種基因在EBV陰性NPC細胞系中均能有效表達。(2)細胞增殖實驗：BARF1原型和變異型基因轉染細胞及對照病毒轉染細胞MTT吸光度值、平板克隆形成率和細胞周期細胞增殖指數均無顯著性差異(P均大于0.05)。(3)凋亡誘導實驗：順鉑(2μg/ml)誘導48h,感染BARF1原型和變異型慢病毒細胞的存活率均高于對照病毒感染細胞,差異有顯著性(P均小于0.05),而細胞凋亡率低于對照病毒感染細胞,差異有顯著性(P均小于0.05),變異型與原型之間細胞存活率和凋亡率均無顯著性差異(P均大于0.05)。(4)細胞遷移實驗：BARF1原型和變異型慢病毒感染細胞的遷移能力高于對照病毒感染細胞,差異有顯著性(P0.05),變異型與原型之間細胞遷移無顯著性差異(P0.05)。 結論：(1)BARF1基因對EBV陰性NPC細胞系CNE無明顯促增殖作用,但可提高其抗凋亡能力和遷移能力,從而增強CNE細胞腫瘤原性,在NPC發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。(2)BARF1V29A變異型對BARF1致癌潛能無明顯影響。
[Abstract]:Background & AIM: EB virus (Epstein-Barr virus, EBV) coding early gene BARF1 is one of the newly established EBV carcinogenic genes, and its transformation has been confirmed in many cell lines. Because BARF1 is expressed in most nasopharyngeal carcinoma (nasopharyngeal carcinoma, NPC) and EBV related gastric cancer tissues, it is speculated that BARF1 may play an important role in the occurrence of NPC, gastric cancer and other epithelial cell tumors. When we detected the polymorphism of BARF1 gene, we found that the detection rate of V29A variant in NPC was higher than that in healthy population. The purpose of this study was to investigate the effect of BARF1 gene on tumorigenicity of NPC cell line and the effect of BARF1 gene variant on its carcinogenic potential, and to provide evidence for the study of the role and mechanism of BARF1 in NPC. Methods: BARF1 gene prototype (B95 鈮，

本文編號：2479195