【摘要】：目的研究硫氧還蛋白(thioredoxin,TXN)在視神經(jīng)軸突保護(hù)中的作用,為視神經(jīng)損傷提供有效的治療方案。方法制作大鼠視神經(jīng)夾傷模型,以正常大鼠作為正常對照組。按夾傷后處死時間不同,選取傷后1周、2周、4周三個時間點,提取實驗組和正常對照組中大鼠視網(wǎng)膜的mRNA和蛋白,通過RT-PCR和Western blot實驗方法檢測TXN表達(dá)情況;用曲古抑菌素A(TSA)刺激RGC-5細(xì)胞,觀察在TSA刺激后,RGC-5細(xì)胞的軸突形成情況,并檢測TXN表達(dá)量的變化。構(gòu)建TXN的真核表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染進(jìn)RGC-5細(xì)胞,在TNF-α刺激條件下,觀察RGC-5細(xì)胞的軸突形成情況以及軸突長度的改變。結(jié)果與正常大鼠比較,視神經(jīng)夾傷模型大鼠中TXN的mRNA以及蛋白水平明顯下降。在傷后1周,TXN mRNA表達(dá)量僅下降了32%,而在傷后2周、4周則分別下降了55%以及70%,說明TXN表達(dá)水平的降低是隨著夾傷后時間的延長而增加的。用TSA誘導(dǎo)RGC-5細(xì)胞24 h,觀察到RGC-5細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,約65%的細(xì)胞分化產(chǎn)生軸突,而對照組(DMSO處理)中細(xì)胞沒有形成軸突,同時Western blot結(jié)果顯示,相對于DMSO處理,TSA刺激后TXN的表達(dá)明顯升高。在TNF-α刺激下,RGC-5細(xì)胞的軸突形成比率從(65±5)%減少至(30±4)%,軸突長度從(100±6)μm下降至(74±6)μm。而在過表達(dá)TXN情況下,TNF-α刺激RGC-5細(xì)胞,軸突形成比率為(52±7)%,軸突的長度為(92±8)μm,較未刺激細(xì)胞僅有較少的降低。結(jié)論在軸突發(fā)生損傷后,TXN的表達(dá)量顯著下降。而在軸突形成過程中,TXN的表達(dá)量明顯上升并且過表達(dá)TXN能很好地減輕外界刺激誘導(dǎo)的軸突損傷。TXN可能參與了軸突形成并且能有效地防止軸突的損傷。
[Abstract]:Objective to study the role of thioredoxin (thioredoxin,TXN) in the protection of optic nerve axons and to provide an effective treatment for optic nerve injury. Methods the rat model of optic nerve clip injury was established, and the normal rats were used as the normal control group. According to the time of death after clamping injury, mRNA and protein were extracted at three time points 1 week, 2 weeks and 4 weeks after injury, and the expression of TXN was detected by RT-PCR and Western blot assay. RGC-5 cells were stimulated by trigutin A (TSA). The axonal formation of RGC-5 cells was observed after TSA stimulation, and the expression of TXN was detected. The eukaryotic expression plasmid of TXN was constructed and transformed into RGC-5 cells. The axonal formation and axonal length of RGC-5 cells were observed under the condition of TNF- 偽 stimulation. Results compared with normal rats, the mRNA and protein levels of TXN in optic nerve clip injury model rats were significantly decreased. The expression of, TXN mRNA decreased by only 32% at 1 week after injury, 55% and 70% at 2 weeks and 4 weeks after injury, respectively, indicating that the decrease of TXN expression increased with the prolongation of clamping time. RGC-5 cells were induced by TSA for 24 h. The morphology of RGC-5 cells was significantly changed, about 65% of the cells differentiated to produce axons, while the cells in the control group (DMSO treatment) did not form axons. At the same time, Western blot results showed that compared with DMSO treatment, The expression of TXN increased significantly after TSA stimulation. Under the stimulation of TNF- 偽, the axonal formation ratio of RGC-5 cells decreased from (65 鹵5)% to (30 鹵4)%, and the axon length decreased from (100 鹵6) 渭 m to (74 鹵6) 渭 m. Under the condition of overexpression of TXN, the axonal formation rate and axon length of RGC-5 cells stimulated by TNF- 偽 were (52 鹵7)% and (92 鹵8) 渭 m, respectively, which were only lower than those of unstimulated cells. Conclusion the expression of TXN decreased significantly after axonal injury. In the process of axonal formation, the expression of TXN increased obviously and overexpression of TXN could alleviate the axonal injury induced by external stimulation. TXN may be involved in axonal formation and can effectively prevent axonal injury.
【作者單位】： 武漢市中心醫(yī)院眼科;
【分類號】：R774.6

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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