【摘要】：第一部分 聲帶任克氏水腫和聲帶癌患者的吸煙水平及艾森克人格問卷調(diào)查與分析 研究目的： 吸煙可導(dǎo)致聲帶發(fā)生氧化應(yīng)激損傷,表現(xiàn)為較強(qiáng)的炎性反應(yīng),氧化應(yīng)激損傷與聲帶惡性病變有密切的關(guān)系。另一方面,吸煙也是聲帶良性病變?nèi)慰耸纤[的重要病因,然而,吸煙誘導(dǎo)其發(fā)病且?guī)缀醪晦D(zhuǎn)化為癌的分子機(jī)制目前尚不清楚。除了吸煙這一致病因素,任克氏水腫患者通常還存在用聲過度史,此因素與聲帶惡性病變無明顯相關(guān)性。既往研究發(fā)現(xiàn)在其他組織細(xì)胞中,一定程度的機(jī)械性拉伸力能夠抑制不良刺激誘發(fā)的炎癥反應(yīng),促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成,有利于組織細(xì)胞的損傷修復(fù)。因此我們假設(shè)聲帶在發(fā)聲振動過程中所產(chǎn)生的作用于聲帶成纖維細(xì)胞的拉伸力能夠抑制吸煙誘導(dǎo)的炎性反應(yīng),緩解聲帶的炎性損傷,最終可能延緩或抑制聲帶任克氏水腫向惡性病變的轉(zhuǎn)化。本研究旨在通過臨床調(diào)查評估任克氏水腫與聲帶癌患者的吸煙水平,同時運(yùn)用艾森克人格問卷(Eysenck Personality Questionnaire, EPQ)的內(nèi)-外向(Intraversion-Extraversion,簡稱E)維度值評估研究對象的內(nèi)-外向型性格,客觀的證實(shí)兩組患者用聲量的差異,為進(jìn)一步探討吸煙和發(fā)聲振動對聲帶的影響提供理論基礎(chǔ)。 研究方法： 以2009年9月-2011年12月期間就診并行手術(shù)治療的67例任克氏水腫,55例聲帶鱗狀細(xì)胞癌以及60例健康對照為研究對象。任克氏水腫及聲帶癌患者均為長期吸煙者,運(yùn)用吸煙持續(xù)時間及每天吸煙支數(shù)評估總吸煙水平,即采用每天吸煙支數(shù)乘以吸煙年數(shù)所得總吸煙量(pack-years, PKY)比較分析各組研究對象的吸煙水平；運(yùn)用艾森克人格量問卷調(diào)查量表中的E維度分別評估任克氏水腫患者,聲帶癌患者以及健康對照組的內(nèi)-外向型人格,E維度得分高表示具有健談善于交往的人格特點(diǎn),客觀反映用聲量多,然后對所得數(shù)值進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析,從而能夠客觀反映各組研究對象用聲量的差異。 研究結(jié)果： 吸煙水平調(diào)查：任克氏水腫患者和聲帶鱗狀細(xì)胞癌患者的總吸煙量PKY分別為45.69±11.15和46.38±10.50,二者均為中／重度吸煙者,兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.35,P=0.7257)。 EPQ調(diào)查分析：任克氏水腫患者、聲帶鱗狀細(xì)胞癌患者及正常對照組的E維度值分別為62.61±7.02,41.35±7.01和49.2±5.55。三組E維度值有顯著性差異(F=165.02,P0.0001)；任克氏水腫患者的E維度值顯著高于正常對照組及聲帶癌患者的E維度值,聲帶癌患者的E維度值顯著低于任克氏水腫及正常對照組,三組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；三組研究對象的內(nèi)-外向型性格組成比分析有顯著性差異(χ2=158.7225,P0.0001),任克氏水腫患者多傾向于外向型性格,聲帶癌患者多傾向于內(nèi)向型性格,即任克氏水腫患者用聲量顯著高于聲帶癌患者(χ2=158.7225,P0.001)。 研究結(jié)論： 聲帶任克氏水腫患者與聲帶鱗狀細(xì)胞癌患者的總吸煙量無顯著差異；EPQ調(diào)查結(jié)果顯示聲帶任克氏水腫患者多為外向型性格,表現(xiàn)為健談及善于交流,而聲帶癌患者傾向于內(nèi)向型性格,客觀反映出任克氏水腫患者的用聲量顯著高于聲帶癌患者。此研究結(jié)果提示在相同的吸煙刺激下,聲帶發(fā)聲振動水平的差異可能為導(dǎo)致不同的病變性質(zhì)的原因,吸煙刺激與發(fā)聲振動共同參與任克氏水腫的發(fā)病發(fā)展,可能為延緩或阻止任克氏水腫向惡性病變進(jìn)展的原因。 第二部分 任克氏水腫組織和聲帶癌癌旁組織的任克間隙中CD44, COX-2及MMP-9的表達(dá)及意義 研究目的： 吸煙導(dǎo)致呼吸道組織細(xì)胞的共同病變特點(diǎn)是慢性炎癥,任克氏水腫是在慢性炎癥刺激下形成的聲帶良性病變,并且?guī)缀醪晦D(zhuǎn)化為癌。既往有研究證實(shí)聲帶任克氏水腫組織中抗氧化應(yīng)激作用的相關(guān)因子表達(dá)升高,提示任克氏水腫組織可能具有化學(xué)抗癌的作用,但導(dǎo)致其抗氧化應(yīng)激能力增強(qiáng)的機(jī)制尚不明確。聲帶任克間隙內(nèi)的代謝對維持聲帶的正常結(jié)構(gòu)及功能有重要作用,作為透明質(zhì)酸酶的受體,CD44與之結(jié)合后能夠抑制任克間隙成纖維細(xì)胞促炎因子COX-2和MMP-9的表達(dá)。癌旁組織中腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞釋放的炎性因子COX-2和MMP-9參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后。該研究旨在通過比較CD44, COX-2及MMP-9在聲帶任克氏水腫和聲帶癌旁組織中的表達(dá)差異,探討在相同的吸煙刺激和不同程度的發(fā)聲振動作用下,聲帶任克氏水腫組織和聲帶癌旁組織中CD44, COX-2及MMP-9的表達(dá)差異及意義。 研究方法： 任克氏水腫組織、聲帶鱗狀細(xì)胞癌的癌旁組織及正常聲帶組織各20例,癌旁組織及任克氏水腫組織取自2009年9月-2011年12月期間就診并顯微外科手術(shù)切除標(biāo)本,正常聲帶組織取自下咽及食道癌未侵犯喉需做全喉切除的患者,該組患者無吸煙及用聲過度史。顯微鏡下分別分離并獲取各組的任克間隙組織作為研究對象。運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)及蛋白印跡(Western blot, WB)檢測并比較任克氏水腫、聲帶癌旁組織及正常聲帶組織任克間隙內(nèi)CD44, COX-2及MMP-9的基因及蛋白表達(dá)水平。 研究結(jié)果： 設(shè)對照組的CD44, COX-2及MMP-9基因及蛋白表達(dá)均為100%,RT-PCR及WB結(jié)果顯示任克氏水腫組織中CD44基因及蛋白表達(dá)水平較聲帶癌癌旁組織內(nèi)的表達(dá)顯著升高,促炎因子COX-2及MMP-9在聲帶任克氏水腫組織中的表達(dá)較聲帶癌癌旁組織內(nèi)的表達(dá)顯著降低(P0.05)。 研究結(jié)論： 在無顯著差異的總吸煙量誘導(dǎo)下,任克氏水腫的任克間隙內(nèi)CD44的基因及蛋白水平較聲帶癌癌旁組織顯著增高,然而,促炎因子COX-2及MMP-9的水平顯著降低,說明任克氏水腫組織內(nèi)炎性因子的釋放較聲帶癌癌旁組織內(nèi)炎性因子的釋放明顯減少。由于COX-2和MMP-9在炎性組織及癌旁組織的生物學(xué)活性對腫瘤的發(fā)生,復(fù)發(fā)及進(jìn)展有重要作用,本研究結(jié)果提示在吸煙刺激下的任克氏水腫組織較聲帶癌旁組織具有較強(qiáng)的抗炎作用,可能在一定程度緩解或阻止吸煙誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化。 第三部分 周期性拉伸力抑制吸煙誘導(dǎo)的聲帶成纖維細(xì)胞炎性因子的釋放 研究目的： 聲帶任克氏水腫和聲帶鱗狀細(xì)胞癌患者的總吸煙量無顯著差異,吸煙能夠?qū)е侣晭У难仔該p傷,通過上述研究,我們發(fā)現(xiàn)任克氏水腫的任克間隙內(nèi)CD44的基因及蛋白水平較聲帶癌旁組織顯著增高,促炎因子COX-2及MMP-9的水平顯著降低,本結(jié)果提示任克氏水腫組織內(nèi)存在抗炎機(jī)制,從而能夠抑制吸煙誘導(dǎo)的炎性因子的釋放。上述研究還證實(shí)聲帶任克氏水腫和聲帶鱗狀細(xì)胞癌患者的用聲數(shù)量有顯著差異,在聲帶的發(fā)聲振動過程中,對任克間隙內(nèi)的主要功能細(xì)胞聲帶成纖維細(xì)胞可產(chǎn)生一定模式的拉伸力,既往研究發(fā)現(xiàn)機(jī)械性拉伸力能夠抑制成纖維細(xì)胞炎性因子釋放,促進(jìn)組織的損傷修復(fù)。因此,我們設(shè)想用聲程度的差異導(dǎo)致組織細(xì)胞對吸煙刺激的反應(yīng)不同,聲帶振動過程中作用于聲帶成纖維細(xì)胞的周期性拉伸力對吸煙誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)具有抑制作用,任克氏水腫是吸煙誘導(dǎo)炎性損傷和聲帶振動誘導(dǎo)的抑制炎性因子釋放共同作用的結(jié)果。本研究旨在探討周期性拉伸力(cyclic tensile strain, CTS)和香煙煙霧冷凝液(cigarette smoke condensate, CSC)對聲帶成纖維細(xì)胞CD44, COX-2及MMP-9基因及蛋白表達(dá)的影響。 研究方法： 運(yùn)用原代培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)人正常聲帶任克間隙內(nèi)的成纖維細(xì)胞正常聲帶組織取自下咽及食道癌未侵犯喉并需做全喉切除患者,該組患者無吸煙及用聲過度史。顯微鏡下切除分離得到任克間隙組織,運(yùn)用組織法進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),并采用免疫熒光技術(shù)進(jìn)行形態(tài)觀察與鑒定。分別用CSC或/和CTS對人聲帶成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)刺激,采用MTT測定法確定細(xì)胞的相對存活率,根據(jù)MTT結(jié)果確定實(shí)驗所用CSC的濃度以及CTS的強(qiáng)度。將原代培養(yǎng)的人聲帶成纖維細(xì)胞分為四組,分別為正常對照組,單純CTS作用組,單純CSC作用組,CTS和CSC共同作用組。分別作用24小時后采用RT-PCR及WB檢測并比較不同的作用組內(nèi)人成纖維細(xì)胞的CD44, COX-2及MMP-9的基因及蛋白水平。 研究結(jié)果： 原代培養(yǎng)3-6天后,可觀察到細(xì)胞自組織碎片邊緣遷移生長。遷移出的細(xì)胞呈紡錘形,免疫熒光技術(shù)鑒定結(jié)果顯示,第4-6代原代培養(yǎng)細(xì)胞均為人聲帶成纖維細(xì)胞；CSC造成人聲帶成纖維細(xì)胞炎性損傷及死亡,且隨著劑量的升高CSC對細(xì)胞的致死率升高；MTT測定法確定實(shí)驗采用的CSC的濃度為400μg/mLCTS的頻率及強(qiáng)度為0.5Hz,8%,作用時間為24h; CTS(8%,0.5Hz,24h)能夠抑制CSC(400μg/mL,24h)誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡,提高存活率；設(shè)對照組CD44, COX-2及MMP-9基因及蛋白表達(dá)均為100%,RT-PCR及WB檢測結(jié)果示CSC和CTS共同作用組中CD44的基因及蛋白表達(dá)較CSC單獨(dú)作用組顯著升高(P0.05)；COX-2及MMP-9的基因及蛋白在CSC和CTS共同作用組的表達(dá)顯著低于在CSC單獨(dú)作用組中的表達(dá)(P0.05), CTS能夠抑制CSC誘導(dǎo)的炎性因子的釋放。 研究結(jié)論： 該研究證實(shí)作用于人聲帶成纖維細(xì)胞的CTS能夠通過CD44顯著抑制CSC誘導(dǎo)的炎性因子COX-2及MMP-9的釋放,從而使細(xì)胞受到的炎性損傷降低。任克氏水腫是吸煙誘導(dǎo)的炎性損傷和聲帶振動誘導(dǎo)的抗炎反應(yīng)共同作用的結(jié)果,聲帶的發(fā)聲振動抑制了由吸煙誘導(dǎo)的炎性反應(yīng),最終促進(jìn)組織細(xì)胞的修復(fù),這一作用機(jī)制可能是任克氏水腫未逐步轉(zhuǎn)化為癌的原因。同時本研究結(jié)果提示一定模式的發(fā)聲訓(xùn)練能夠促進(jìn)聲帶組織的損傷修復(fù),能夠為吸煙所致聲帶炎性損傷的治療提供新的思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.65

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本文編號：2467484