【摘要】：【目的】探討connexin26基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化與老年性聾的關(guān)系。 【方法】D-半乳糖誘導(dǎo)擬老化大鼠模型建立,聽性腦干反應(yīng)(ABR)檢測(cè)大鼠用藥前后聽閾,實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)線粒體DNA4834bp缺失突變率;實(shí)時(shí)定量RT-PCR,免疫印跡Western Blot測(cè)定用藥后Cx26的mRNA和蛋白表達(dá)水平;軟件分析GJB2基因(編碼Cx26蛋白)啟動(dòng)子區(qū);BSP法結(jié)合基因測(cè)序法檢測(cè)GJB2基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度;相關(guān)分析比較GJB2基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度與Cx26mRNA、蛋白表達(dá)水平以及不同劑量組的關(guān)系。 【結(jié)果】線粒體DNA4834bp缺失突變率隨D-半乳糖劑量增大而增加,四組之間ABR閾移差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);A、B、C、D四組Cx26mRNA表達(dá)水平各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Cx26蛋白表達(dá)水平D組較A、B組均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Methyl Primer Express軟件顯示GJB2基因啟動(dòng)子區(qū)富含CpG島;BSP結(jié)合基因測(cè)序法顯示高劑量組內(nèi)耳組織中GJB2基因啟動(dòng)子區(qū)呈高甲基化;GJB2基因甲基化程度與Cx26mRNA、蛋白表達(dá)有相關(guān)性。 【結(jié)論】在擬老化大鼠內(nèi)耳組織中存在GJB2基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化與其低表達(dá)相關(guān),推測(cè)GJB2基因衰老性甲基化可能參與老年性聾的發(fā)生發(fā)展。 【目的】研究縫隙連接蛋白connexin30在D-半乳糖誘導(dǎo)的擬老化大鼠內(nèi)耳中的表達(dá)。 【方法】D-半乳糖誘導(dǎo)擬老化大鼠模型建立,聽性腦干反應(yīng)(ABR)檢測(cè)大鼠用藥前后聽閾,實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)線粒體DNA4834bp缺失突變率;實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)定各組用藥后Cx30 mRNA的表達(dá)水平;免疫印跡Western Blot測(cè)定各組用藥后Cx30蛋白的表達(dá)水平。 【結(jié)果】線粒體DNA4834bp缺失突變率隨D-半乳糖劑量增大而增加,四組之間ABR閾移差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Cx30mRNA表達(dá)水平各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Cx30蛋白表達(dá)水平B組較A組、D組顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 【結(jié)論】Cx30蛋白表達(dá)水平在擬老化大鼠內(nèi)耳組織中存在不同程度的代償性升高,推測(cè)connexin30可能參與老年性聾的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:[objective] to investigate the relationship between hypermethylation in promoter region of connexin26 gene and senile deafness. [methods] D-galactose induced aging rat model was established. Auditory brainstem response (ABR) was detected by auditory brainstem response (ABR) and mitochondrial DNA4834bp deletion mutation rate was detected by real-time quantitative PCR. Real-time quantitative RT-PCR, immunoblotting Western Blot was used to detect the expression of mRNA and protein in Cx26, the promoter region of GJB2 gene (encoding Cx26 protein) was analyzed by software, the methylation degree of GJB2 gene promoter region was detected by BSP method combined with gene sequencing. Correlation analysis was used to compare the degree of methylation in the promoter region of GJB2 gene with the expression level of Cx26mRNA, protein as well as the different dose groups. [results] the mutation rate of mitochondrial DNA4834bp deletion increased with the increase of D-galactose dose, and there was no significant difference in ABR threshold shift among the four groups (P0.05). There was no significant difference in the expression of Cx26mRNA among the four groups (P0.05). The expression level of Cx26 protein in group D was significantly lower than that in group A and group B (P0.05), but there was no significant difference among the other groups (P0.05); Methyl Primer Express software showed that the promoter region of GJB2 gene was rich in CpG island). BSP-binding gene sequencing showed that the promoter region of GJB2 gene was hypermethylated in the inner ear of the high dose group, and the methylation degree of GJB2 gene was correlated with the expression of Cx26mRNA, protein. [conclusion] the hypermethylation of the promoter region of GJB2 gene is associated with its low expression in the inner ear of aging rats. It is suggested that aging methylation of GJB2 gene may be involved in the occurrence and development of senile deafness. [objective] to study the expression of gap junction protein (connexin30) in the inner ear of D-galactose-induced aging rats. [methods] D-galactose induced aging rat model was established. Auditory brainstem response (ABR) was detected by auditory brainstem response (ABR) and mitochondrial DNA4834bp deletion mutation rate was detected by real-time quantitative PCR. Real-time quantitative RT-PCR was used to detect the expression level of Cx30 mRNA and Western blot Western Blot was used to detect the expression of Cx30 protein in each group. [results] the mutation rate of mitochondrial DNA4834bp deletion increased with the increase of D-galactose dose, and there was no significant difference in ABR threshold shift among the four groups (P0.05), but there was no significant difference in Cx30mRNA expression level among the four groups (P0.05). The expression level of Cx30 protein in group B was significantly higher than that in group A and group D (P0.05), but there was no significant difference among the other groups (P0.05). [conclusion] the expression level of Cx30 protein in the inner ear tissue of aging rats increased in varying degrees, suggesting that connexin30 may be involved in the occurrence and development of senile deafness.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R764.43

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2457816