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大鼠中耳炎細(xì)菌生物膜模型的建立及其組織形態(tài)學(xué)的觀察

發(fā)布時(shí)間:2019-01-09 07:28
【摘要】: 急性中耳炎(acute otitis media,AOM)是兒童期發(fā)病僅次于上呼吸道感染的最常見(jiàn)的感染性疾病,其中最困擾臨床的是復(fù)發(fā)性AOM和頑固性AOM,據(jù)統(tǒng)計(jì),約20%-30%的兒童罹患復(fù)發(fā)性AOM,且這一數(shù)據(jù)還在逐年增加。頻繁的中耳感染不僅會(huì)引起患兒鼓室硬化、粘連性中耳炎以及中耳膽脂瘤,從而導(dǎo)致患兒聽(tīng)力進(jìn)行性下降,甚至?xí)绊懙秸Z(yǔ)言的發(fā)育。然而,其確切發(fā)病機(jī)制、抗生素耐藥機(jī)理以及反復(fù)發(fā)作的原因等至今仍不清楚。 自2001年P(guān)ost等首次在分泌性中耳炎的發(fā)病機(jī)制中提出細(xì)菌生物膜的致病理論以來(lái),細(xì)菌生物膜與中耳炎的關(guān)系迅速成為學(xué)者們關(guān)注的焦點(diǎn),但目前文獻(xiàn)多側(cè)重于研究細(xì)菌生物膜和分泌性中耳炎的關(guān)系。2009年,Reid等和Hoa等分別在不同的粟鼠AOM動(dòng)物模型上觀察到有細(xì)菌生物膜的存在,但細(xì)菌生物膜在AOM中的形成特點(diǎn)、是否參與AOM的發(fā)病過(guò)程以及臨床意義等,仍有待深入研究;诖,我們?cè)O(shè)計(jì)了本課題。 研究分兩個(gè)部分進(jìn)行,在第一部分研究中,我們探討了通過(guò)聽(tīng)泡穿刺、將肺炎鏈球菌注入到大鼠中耳腔建立大鼠AOM模型的可行性,并通過(guò)觀察其病理變化和病程,探討了該模型的應(yīng)用價(jià)值,以期為后續(xù)的深入研究提供基礎(chǔ)資料。研究證實(shí),將50ul肺炎鏈球菌懸液(1×108CFU/ml)經(jīng)聽(tīng)泡穿刺注入到大鼠中耳腔建立了急性中耳炎的大鼠模型,成功率100%,是研究人類中耳炎較為理想的動(dòng)物模型,不僅可用于急性化膿性中耳炎的研究,也可用于急性分泌性中耳炎的研究。 在成功建立了急性中耳炎大鼠模型的基礎(chǔ)上,我們進(jìn)行了第二部分的研究,采用掃描電鏡并結(jié)合免疫熒光原位標(biāo)記技術(shù)、激光掃描共聚焦顯微鏡來(lái)研究細(xì)菌生物膜在急性中耳炎大鼠中耳腔的形成及其臨床意義,并探討大鼠AOM動(dòng)物模型用于細(xì)菌生物膜研究的可行性。研究發(fā)現(xiàn),細(xì)菌生物膜在中耳急性感染的早期即已開(kāi)始形成,并可能成為日后炎癥反復(fù)發(fā)作或遷延不愈的原因,早期及時(shí)應(yīng)用抗生物膜藥物有助于感染的徹底根除,本研究建立的大鼠急性中耳炎模型是研究細(xì)菌生物膜較為理想的動(dòng)物模型。
[Abstract]:Acute otitis media (acute otitis media,AOM) is the most common infectious disease in childhood, second only to upper respiratory tract infection, among which recurrent AOM and intractable AOM, are the most troubling disease in children. According to statistics, about 20% to 30% of children suffer from recurrent AOM,. And this figure is still increasing year by year. Frequent middle ear infections not only cause tympanic sclerosis, adhesive otitis media and cholesteatoma of the middle ear, but also lead to progressive decline of hearing and even affect the development of language. However, the exact mechanism of its pathogenesis, antibiotic resistance and the causes of repeated attacks are still unclear. Since 2001, when Post et al first put forward the pathogenic theory of bacterial biofilm in the pathogenesis of secretory otitis media, the relationship between bacterial biofilm and otitis media has become the focus of attention. In 2009, Reid et al and Hoa et al observed the presence of bacterial biofilm in different AOM animal models of millet, but the formation characteristics of bacterial biofilm in AOM. Whether or not to participate in the pathogenesis and clinical significance of AOM remains to be further studied. Based on this, we designed the subject. In the first part of the study, we discussed the feasibility of injecting Streptococcus pneumoniae into the middle ear cavity of rats to establish AOM model, and observed its pathological changes and course of disease. The application value of the model is discussed in order to provide basic data for further research. It was proved that the rat model of acute otitis media was established by injecting 50ul pneumoniae suspension (1 脳 108CFU/ml) into the middle ear cavity of rats through auditory bubble puncture, and the success rate was 100%, which was an ideal animal model for the study of human otitis media. It can be used not only in the study of acute suppurative otitis media, but also in the study of acute secretory otitis media. On the basis of the successful establishment of the rat model of acute otitis media, we carried out the second part of the study, using scanning electron microscope (SEM) and immunofluorescence in situ labeling technique. The formation and clinical significance of bacterial biofilm in the middle ear cavity of rats with acute otitis media were studied by laser scanning confocal microscope and the feasibility of using the animal model of AOM in the study of bacterial biofilm was discussed. The study found that bacterial biofilm had begun to form at the early stage of acute infection in the middle ear, and might become the cause of repeated or prolonged inflammation in the future. The early and timely application of anti-biofilm drugs was helpful to the complete eradication of infection. The rat model of acute otitis media is an ideal animal model to study bacterial biofilm.
【學(xué)位授予單位】:暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2010
【分類號(hào)】:R764

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本文編號(hào):2405309

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