【摘要】：目的：研究小鼠白色念珠菌角膜炎修復(fù)過程中基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子、膠原纖維及其他修復(fù)相關(guān)分子的動(dòng)態(tài)變化，借以了解真菌性角膜炎發(fā)病過程中角膜損傷修復(fù)的分子機(jī)制。 方法：選用6-8周C57BL/6小鼠，采用角膜基質(zhì)注射法注射0.5μl 1×10~8 CFU/ml的真菌孢子于角膜基質(zhì)誘導(dǎo)白色念珠菌性角膜炎，于感染后數(shù)天裂隙燈持續(xù)觀察角膜變化情況，并于第1、3、5、7、9、11、14天，取小鼠眼球作組織病理學(xué)檢查，觀察角膜形態(tài)的變化，炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)及真菌的生長(zhǎng)情況；同時(shí)，，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)取小鼠角膜中基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子（MMPs，TIMPs）、趨化因子（MCP-1，MIP-2）、膠原纖維（Col1a1、Col3a1和Col4a1）及MXRA-7等分子基因表達(dá)水平的變化；應(yīng)用免疫熒光技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證感染后1天小鼠角膜中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。 結(jié)果：小鼠角膜基質(zhì)注射白色念珠菌孢子后感染了嚴(yán)重的角膜炎，裂隙燈顯微鏡連續(xù)觀察可見小鼠角膜形態(tài)由感染前期的水腫、潰瘍逐漸趨向自愈，最終僅在病變處留下斑翳；感染后第1、3天角膜PAS染色，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)內(nèi)存在大量真菌孢子及菌絲，HE染色可見感染后第3天大量浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞及第11天大量活化的成纖維細(xì)胞。RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大多數(shù)基因表達(dá)水平存在動(dòng)態(tài)變化，其中，MIP-2、MCP-1、MMP-13及TIMP-1于感染后迅速升高，第1天即達(dá)高峰；MMP-3、8、9、10、12分別于感染后的第3天或第5天達(dá)高峰，然后均逐漸下降。MMP-2、TIMP-2、Col1a1、Col3a1和Col4a1在感染后逐漸升高，至第11天表達(dá)量達(dá)高峰；然而MXRA-7的表達(dá)趨勢(shì)與其他分子相反，于感染后迅速下調(diào)，隨后表達(dá)量又逐漸恢復(fù)。HE及免疫熒光可見感染后1天中性粒細(xì)胞由角鞏膜緣向病變部位聚集。 結(jié)論：白色念珠菌角膜炎過程中，不同的修復(fù)相關(guān)分子表現(xiàn)出相同或不同的變化趨勢(shì)，提示各種分子可能來源于不同的細(xì)胞并發(fā)揮著不同的功能。它們的作用機(jī)制及相互作用還需進(jìn)一步研究。 目的：縫線、堿燒傷是誘導(dǎo)炎性角膜新生血管模型常用的兩種方法。本研究主要比較兩種方法誘導(dǎo)的小鼠角膜新生血管發(fā)生早期全基因組的表達(dá)變化。 方法：選用6-8周Balb/c小鼠，建立縫線及堿燒傷誘導(dǎo)的小鼠角膜新生血管模型；分別于兩種模型新生血管生長(zhǎng)初期（縫線第5天，堿燒傷第6天）觀察新生血管的生長(zhǎng)情況，同時(shí)收取小鼠眼球或角膜，用于后期組織病理學(xué)檢查或基因微陣列檢測(cè)。芯片數(shù)據(jù)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化及表達(dá)篩選后，應(yīng)用SAM軟件（Significance Analysis ofMicrooarrays）行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；挑選出的差異基因用DAVID（the Database forAnnotation, Visualization, and Integrated Discovery）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行功能注釋。 結(jié)果：裂隙燈下觀察可見縫線誘導(dǎo)的角膜新生血管生長(zhǎng)于角鞏膜緣與縫線之間，角膜中央無血管區(qū)的透明性并不受影響；而堿燒傷導(dǎo)致整個(gè)角膜的水腫及透明性的喪失。組織病理學(xué)顯示縫線僅導(dǎo)致了局部上皮缺損及角鞏膜緣與縫線間角膜組織的炎性浸潤(rùn)，而堿燒傷損壞了角膜中央整個(gè)上皮層并引起大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)�；蛭㈥嚵袛�(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，縫線第5天，共有1055個(gè)差異表達(dá)的探針（其中有586個(gè)探針上調(diào)，469個(gè)探針下調(diào)）；堿燒傷第6天，共有861個(gè)差異表達(dá)的探針（其中有472個(gè)上調(diào)，389個(gè)下調(diào)）。在兩種模型所有的差異表達(dá)探針中，有一大部分探針（總共530個(gè)，包括286個(gè)上調(diào)和244個(gè)下調(diào)探針）的表達(dá)變化趨勢(shì)是相同的。應(yīng)用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)兩種模型共同差異的基因進(jìn)行功能注釋，發(fā)現(xiàn)共同上調(diào)的基因主要富集于“趨化性”及“免疫反應(yīng)”等GO（Gene Ontology）中，而共同下調(diào)的基因主要富集于“氧化還原”及“程序化細(xì)胞死亡”的GO中。同時(shí)，一些在角膜新生血管及相關(guān)疾病中從未報(bào)道過的基因及基因家族，例如S100家族或α，β，γ晶體蛋白家族，也出現(xiàn)在了差異變化基因之列。 結(jié)論：縫線、堿燒傷造成的角膜損傷不同程度的影響了角膜的透明性�；蛭㈥嚵蟹治鲲@示兩種模型中差異基因的表達(dá)變化趨勢(shì)具有一致性。進(jìn)一步研究微陣列中新發(fā)現(xiàn)的差異表達(dá)基因，將會(huì)擴(kuò)充對(duì)新生血管發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。
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【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R772.21

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 曲利軍;趨化因子在真菌性角膜炎中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2011年

2 石圓圓;單核細(xì)胞上調(diào)RPE細(xì)胞的SDF-1生成促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管的血管發(fā)生[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2362439