【摘要】：實驗一建立噪聲性聽力損傷動物模型 1目的 通過建立噪聲性聽力損傷動物模型，觀察噪聲對大鼠聽性腦干反應（auditorybrainstem response, ABR）閾值及耳蝸基底膜不同頻率區(qū)域外毛細胞形態(tài)學的影響，探討其對聽覺系統(tǒng)的損傷作用。 2方法 40只SD大鼠隨機分為正常對照組和噪聲暴露組：噪聲暴露組給予聲強為115dBSPL白噪聲暴露，每天2小時，連續(xù)3天，對照組不予噪聲暴露。分別于噪聲暴露前1日、暴露后1、3、7、14日對兩組大鼠行ABR檢測，并用在最后一次ABR檢測后對兩組大鼠耳蝸基底膜行鬼筆環(huán)肽—異硫氰酸熒光素(Phalloidin-FITC)染色。 3結(jié)果 大鼠噪聲暴露后與暴露前相比，ABR各頻率反應閾值于暴露后1天達到最高，并隨時間的推移逐漸恢復，14天時趨于穩(wěn)定，聽力低頻閾移約10dB，高頻閾移有30dB (P0.05)；基底膜鋪片F(xiàn)ITC染色示噪聲暴露組底回基底膜毛細胞較頂回缺失嚴重，且有纖毛排列紊亂并出現(xiàn)融合，而對照組毛細胞排列整齊，纖毛呈V或W型，兩組間外毛細胞計數(shù)比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4結(jié)論 在噪聲性聽力損傷過程中，早期的聽力損失存在暫時性閾移，在14天左右才趨于穩(wěn)定，出現(xiàn)永久性閾移，ABR結(jié)果提示氧化還原反應亦在噪聲暴露后1天時最為激烈，且耳蝸基底膜高頻區(qū)域受到的氧化損傷較低頻區(qū)域更為嚴重，不易恢復。 實驗二噪聲對大鼠耳蝸不同頻率區(qū)域基底膜AIF表達的影響 1目的 探討噪聲暴露前后凋亡誘導因子（AIF）在大鼠不同回基底膜外毛細胞的表達差異以及與噪聲性聾高頻聽力易損性的關系。 2方法 40只SD大鼠隨機分為正常對照組和噪聲暴露組：噪聲暴露組給予聲強為115dBSPL白噪聲暴露，每天2小時，連續(xù)3天，對照組不予噪聲暴露，其余條件與噪聲暴露組相同。并于噪聲暴露完成后次日，行耳蝸基底膜取材及鋪片制備，分別采用RT-qPCR、Western blot和免疫熒光染色方法，從定性及定量角度觀察兩組大鼠耳蝸不同回基底膜處AIF的表達。 3結(jié)果 免疫熒光染色顯示，正常組中AIF在頂、底回基底膜外毛細胞胞漿中均有表達，細胞核中無表達，噪聲暴露組AIF在頂、底回基底膜外毛細胞的熒光強度均較正常對照組強，且在細胞核中可見到少量AIF表達；RT-qPCR與Western blot結(jié)果相符，顯示為，在正常情況下,頂回基底膜的AIF表達高于底回，噪聲暴露后，AIF頂、底回基底膜表達均較正常對照組相應部位增高，且頂回較底回更為顯著(P0.05)。 4結(jié)論 正常情況下，AIF在耳蝸不同回基底膜外毛細胞中的表達存在明顯差異，而噪聲暴露后，AIF在耳蝸不同頻率區(qū)域基底膜外毛細胞中的表達顯著增高，并且在此過程中主要發(fā)揮了氧化還原酶的作用，凋亡誘導活性占次要地位，，說明耳蝸不同頻率區(qū)域基底膜抵御氧化還原反應的能力存在明顯差異，這可能是噪聲性聾高頻聽力易損性的分子機制之一。
[Abstract]:Experiment 1: establish an animal model of noise-induced hearing impairment objective to observe the effects of noise on auditory brainstem response (auditorybrainstem response,) in rats by establishing an animal model of noise-induced hearing impairment. ABR) threshold and the morphological changes of outer hair cells in different frequency regions of the cochlear basement membrane. Methods 40 SD rats were randomly divided into normal control group and noise exposure group. The noise exposure group was exposed to 115dBSPL white noise for 2 hours a day for 3 days. The control group was not exposed to noise. ABR was detected on the 1st day before noise exposure, 1 day after exposure and 14 days after exposure, and the cochlea basement membrane of the two groups was stained with Phalloidin-FITC after the last ABR detection. Results compared with before and after noise exposure, the threshold of ABR frequency response reached the highest level on the first day after exposure, and gradually recovered with the passage of time, and tended to stabilize at 14 days, and the low frequency threshold of hearing shifted about 10 dB. High frequency threshold shifted to 30dB (P0.05); FITC staining showed that the basal membrane hair cells in the noise exposed group were more serious than those in the apical gyrus, and the cilia were disordered and fused, while in the control group, the hair cells were arranged neatly, and the cilia were V or W type. There was significant difference in the number of outer hair cells between the two groups (P0.05). Conclusion in the process of noise-induced hearing loss, there is a temporary threshold shift in the early stage of hearing loss, which tends to stabilize at about 14 days, and a permanent threshold shift occurs. The results of ABR showed that the redox reaction was the most intense one day after noise exposure and the oxidation damage in the high frequency region of the basal membrane of cochlea was more serious than that in the low frequency region and it was not easy to recover. Effects of noise on the expression of AIF in the basement membrane of rat cochlea at different frequencies 1 objective to investigate the expression of apoptosis-inducing factor (AIF) in rat hair cells with different return basal membranes before and after noise exposure. The relationship between high frequency hearing loss and noise deafness. Methods 40 SD rats were randomly divided into normal control group and noise exposure group. The noise exposure group was exposed to 115dBSPL white noise for 2 hours a day for 3 days. The control group was not exposed to noise, and the other conditions were the same as those in the noise exposure group. The next day after noise exposure, the basal membrane of cochlea was taken and prepared. The expression of AIF in different basal membrane of cochlea was observed qualitatively and quantitatively by RT-qPCR,Western blot and immunofluorescence staining. Results Immunofluorescence staining showed that AIF was expressed in the cytoplasm of basal membrane hair cells in the top and bottom gyrus, but not in the nucleus in the normal group, and AIF was at the top in the noise exposure group. The fluorescence intensity of basal membrane hair cells in the basal gyrus was stronger than that in the control group, and a small amount of AIF expression could be found in the nucleus. The results of RT-qPCR and Western blot showed that the expression of AIF in basal membrane of parietal gyrus was higher than that in basal gyrus under normal condition. After noise exposure, the expression of AIF in basal membrane of AIF top and bottom gyrus was higher than that in control group. The parietal gyrus was more significant than the bottom gyrus (P0.05). Conclusion under normal conditions, the expression of AIF in different basal membrane hair cells of cochlea is significantly different, but after noise exposure, the expression of AIF in different frequency regions of cochlea is significantly increased. In this process, the redox enzyme was mainly played, and the apoptosis-inducing activity was secondary, which indicated that the ability of the basement membrane to resist the redox reaction was significantly different in different regions of cochlea. This may be one of the molecular mechanisms of high frequency hearing vulnerability in noise deafness.
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R764.433

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本文編號：2341391