【摘要】：目的 通過建立兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷動物模型,腹腔內(nèi)注射氨基胍,研究視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化和NO、iNOS表達(dá)的變化及氨基胍對其的影響。探討氨基胍在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制,為氨基胍對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的治療方面的研究提供理論依據(jù)。 材料與方法 體重3±0.2kg的日本純種大耳白兔81只,健康雄性,隨機(jī)分為正常組(17只)、損傷組(32只)、治療組(32只)三組,正常組不建立視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷(retina ischemia-reperfusion injury ,RIRI)模型,損傷組和治療組通過升高眼內(nèi)壓造成視網(wǎng)膜缺血后,再恢復(fù)正常眼內(nèi)壓而制作成兔RIRI模型,治療組每日腹腔注射氨基胍注射液80mg /kg,損傷組和正常組注射等量生理鹽水。損傷組和治療組分別于缺血即時、6h、24h和72h每個時間點各取兩只兔子活體行眼底照相及造影,正常組任取兩只兔子行眼底照相及造影。各組分別于1h、6h、24h和72h處死余下動物摘除眼球,部分視網(wǎng)膜切片行HE染色,鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)變化;部分用TUNEL法檢測視網(wǎng)膜組織細(xì)胞凋亡變化;部分視網(wǎng)膜通過硝酸還原酶法檢測NO濃度,用比色法檢測iNOS活力。結(jié)果進(jìn)行圖像分析,所得數(shù)據(jù)資料均用spss13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 1.眼底照相及熒光血管造影 正常眼底照相成橘紅色,血管走行良好;高眼壓后眼底顏色蒼白,血管走行急劇變短,視網(wǎng)膜動脈閉塞;再灌注后視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張,呈暗紅色。24h時視網(wǎng)膜水腫最重,可見大片白色棉絮狀滲出。 正常眼底造影未見熒光素滲漏;高眼壓后熒光素局限于視盤,視網(wǎng)膜血管未見熒光素充盈。再灌注后視網(wǎng)膜及視盤恢復(fù)充盈,可見熒光素滲漏。24小時熒光素滲漏達(dá)最大量。治療組與損傷組各時間點比較:視網(wǎng)膜水腫程度減輕、血管閉塞程度及比例降低、熒光素滲漏量及面積減輕減少。 2.視網(wǎng)膜HE染色 正常組:視網(wǎng)膜內(nèi)界膜平滑完整,三層細(xì)胞分界清楚,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞體積較大,核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻。內(nèi)外核層細(xì)胞均呈多層排列,細(xì)胞排列整齊緊密。 損傷組:再灌注1h組,可見視網(wǎng)膜組織輕度水腫; 6h組,視網(wǎng)膜水腫較前加重,偶見空泡變性; 24h組,視網(wǎng)膜全層高度水腫,各層細(xì)胞排列疏松,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)大量減少; 72h組,視網(wǎng)膜水腫減輕。 治療組:再灌注1h組,視網(wǎng)膜組織輕度水腫; 6h組,視網(wǎng)膜水腫較前加重,未見空泡變性; 24h組,視網(wǎng)膜各層厚度均小于損傷組,視網(wǎng)膜水腫程度輕于損傷組,內(nèi)外核層細(xì)胞排列稍顯疏松,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少; 72h組,視網(wǎng)膜輕度水腫。 治療組各時間點視網(wǎng)膜的病理改變,均較損傷組明顯減輕。 3.TUNEL染色凋亡細(xì)胞計數(shù)和定位 正常組未見凋亡陽性細(xì)胞表達(dá)。損傷組再灌注1h,凋亡陽性細(xì)胞微量表達(dá);6h組陽性細(xì)胞表達(dá)增多;24h陽性細(xì)胞表達(dá)達(dá)高峰,72h細(xì)胞凋亡表達(dá)明顯減少。治療組凋亡陽性細(xì)胞表達(dá)趨勢基本同損傷組,但表達(dá)量明顯減少。同一時間下,視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞計數(shù)治療組均低于損傷組(p0.05)。同一組內(nèi)(損傷組和治療組)相鄰時間之間凋亡細(xì)胞計數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),24h凋亡細(xì)胞數(shù)量達(dá)高峰。 4.NO濃度的改變 正常組兔視網(wǎng)膜中檢測到N O少量的表達(dá)。損傷組和治療組1h,N O濃度逐漸增高,6h N O濃度繼續(xù)增高,至2 4h達(dá)到最高,后開始減弱,7 2h NO濃度仍高于正常水平。同一時間下,視網(wǎng)膜NO含量治療組均低于損傷組(p0.05)。同一組內(nèi)(損傷組和治療組)相鄰時間之間NO含量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),24hNO含量達(dá)高峰。 5.iNOS活力的改變 正常組兔視網(wǎng)膜中均未能檢測到i N O S的表達(dá)。損傷組和治療組1h,視網(wǎng)膜中檢測到i N O S的微量表達(dá), 6h開始有i N O S的表達(dá),并逐漸加強(qiáng),至2 4h達(dá)到最強(qiáng),后開始減弱,7 2h仍可見到i N O S的表達(dá)。同一時間下,視網(wǎng)膜i N O S活力治療均低于損傷組(p0.05)。同一組內(nèi)(損傷組和治療組)相鄰時間之間i N O S活力差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),24hi N O S活力達(dá)高峰。 結(jié)論 氨基胍治療組各時間點視網(wǎng)膜的病理改變均較損傷組明顯減輕,提示氨基胍能夠減輕視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷,對維持視網(wǎng)膜的形態(tài)和功能起到重要作用;氨基胍治療能減少凋亡陽性細(xì)胞表達(dá);視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷可引起NO濃度和iNOS活性的升高,氨基胍注射液可能通過抑制iNOS的活性,減少NO的生成來實現(xiàn)其對RIRI的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R774.1

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本文編號：2330045