發(fā)布時(shí)間：2018-11-03 21:27

【摘要】：目的觀察慢病毒載體介導(dǎo)的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(LV-EGFP)經(jīng)不同濃度和途徑轉(zhuǎn)染大鼠角膜的轉(zhuǎn)染效率及毒性,探討慢病毒轉(zhuǎn)染角膜的最佳途徑。方法 25只SD大鼠,隨機(jī)分為5組。A組為感染復(fù)數(shù)(MOI)=5點(diǎn)眼組,B組為MOI=5結(jié)膜下注射組,C組為MOI=10點(diǎn)眼組,D組為MOI=10結(jié)膜下注射組,E組為MOI=10離體轉(zhuǎn)染組,各組予以相應(yīng)濃度LV-EGFP。7d后取轉(zhuǎn)染后角膜于熒光顯微鏡下觀察熒光分布,并分析熒光強(qiáng)度;HE染色觀察轉(zhuǎn)染后角膜細(xì)胞病理改變。結(jié)果熒光顯微鏡觀察顯示,相同MOI組之間比較,點(diǎn)眼方式的角膜熒光分布較結(jié)膜下注射方式均勻。各組相對熒光強(qiáng)度值分別為:A組0.1803±0.0440,B組0.1061±0.0434,C組0.2369±0.0157,D組0.2002±0.0307,E組0.2434±0.0173,點(diǎn)眼方式的角膜熒光強(qiáng)度高于結(jié)膜下注射方式(P0.05),且MOI增加時(shí)EGFP表達(dá)增強(qiáng)(P0.05)。E組熒光強(qiáng)度明顯高于A、B、D組(P0.05),但與C組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HE染色顯示各組角膜細(xì)胞形態(tài)正常,未見明顯凋亡細(xì)胞。離體轉(zhuǎn)染角膜經(jīng)過7d培養(yǎng)液轉(zhuǎn)染后,角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長良好,未出現(xiàn)皺縮、變形及缺失等病理改變。結(jié)論 LV-EGFP可在較低MOI下有效轉(zhuǎn)染大鼠角膜,且持續(xù)轉(zhuǎn)染的安全性良好;點(diǎn)眼方式的轉(zhuǎn)染效率高于比結(jié)膜下注射,提高M(jìn)OI能提高角膜轉(zhuǎn)染的效率。
[Abstract]:Objective to observe the transfection efficiency and toxicity of enhanced green fluorescent protein (LV-EGFP) mediated by lentivirus vector in rat cornea at different concentrations and pathways, and to explore the best way to transfect cornea by lentivirus-mediated green fluorescent protein (LV-EGFP). Methods Twenty-five SD rats were randomly divided into five groups: group A was infected with complex (MOI) = 5 point eye group, group B was injected under MOI=5 conjunctiva group, group C was MOI=10 point eye group, group D was subconjunctival injection group, group E was MOI=10 transfection group in vitro. The corneal fluorescence distribution was observed under fluorescence microscope and the fluorescence intensity was analyzed after transfection with corresponding concentration of LV-EGFP.7d. The pathological changes of corneal cells after transfection were observed by HE staining. Results fluorescence microscope showed that the distribution of corneal fluorescence in the same MOI group was more uniform than that in the subconjunctival injection. The values of relative fluorescence intensity in each group were: group A, 0.1803 鹵0.0440, group B, 0.1061 鹵0.0434A, group C, 0.2369 鹵0.0157, group D, 0.2002 鹵0.0307, group E, 0.2434 鹵0.0173; The fluorescence intensity of cornea of point eye mode was higher than that of subconjunctival injection (P0.05), and the expression of EGFP was increased with the increase of MOI (P0.05). The fluorescence intensity of). E group was significantly higher than that of Aconjunctival injection group (P0.05). However, there was no significant difference between group C and group C (P0.05). HE staining showed that the corneal cells in each group were normal, no obvious apoptotic cells were found. After 7 days of transfection in vitro, corneal endothelial cells grew well, without shrinkage, deformation and deletion. Conclusion LV-EGFP can effectively transfect the cornea of rats at low MOI and the safety of continuous transfection is good. The transfection efficiency of point-eye method is higher than that of subconjunctival injection, and MOI can improve the efficiency of corneal transfection.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科 重慶市眼科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170822)~~
【分類號】：R772.2

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3 張h，

本文編號：2309089