【摘要】：背景 葡萄膜炎通常是指發(fā)生于葡萄膜、視網(wǎng)膜及視網(wǎng)膜血管的炎癥疾病。多為葡萄膜炎多發(fā)生于青壯年，往往反復(fù)發(fā)作，治療棘手，并且由于導(dǎo)致視網(wǎng)膜和視神經(jīng)的損害，其所致盲為不可逆和永久性盲目。VKH綜合征是一種以葡萄膜炎、腦膜刺激征、白癜風(fēng)和聽(tīng)力損害為特征的自身免疫性疾病。Behcet病是一種以葡萄膜炎、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍和生殖器潰瘍、多形性皮膚病變、常伴發(fā)自行消退和惡化為特征的多系統(tǒng)、多器官受累的炎癥性疾病。Behcet病、VKH綜合征是我國(guó)致盲率最高和最常見(jiàn)的葡萄膜炎類型，兩者的病因目前還不清楚，但自身免疫反應(yīng)失調(diào)參與了兩種疾病的發(fā)生，據(jù)報(bào)道這兩種疾病中都存在Th17和Treg細(xì)胞功能和數(shù)量的異常。白介素27（IL-27）主要由抗原提呈細(xì)胞分泌產(chǎn)生，在自身免疫動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)IL-27可以通過(guò)抑制Th17極化和促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的誘導(dǎo)從而抑制炎癥的發(fā)生和發(fā)展。但是，IL-27在人類自身免疫性疾病中的作用還不是很清楚。最近研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)芳香烴受體（AhR）可以參與自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。AhR的配體ITE可以抑制EAE的炎癥嚴(yán)重程度，AhR基因缺陷的巨噬細(xì)胞分泌更多的炎性細(xì)胞因子。但AhR在人類自身免疫性疾病的確切作用尚不清楚。 基于上述研究背景，本課題主要進(jìn)行以下兩方面的實(shí)驗(yàn)：1.探討IL-27和AhR在VKH綜合征或Behcet病患者的表達(dá)水平，以期確定其是否參與這兩種疾病的發(fā)生和發(fā)展。2.進(jìn)一步探討IL-27和AhR在這兩種疾病發(fā)生中的作用及機(jī)制。通過(guò)上述研究，以期闡明這兩種疾病的發(fā)生機(jī)制，為其防治提供新策略和新靶點(diǎn)。 第一部分IL-27在Vogt-小柳原田綜合征發(fā)病機(jī)制作用中的研究 目的： 盡管VKH綜合征被認(rèn)為是一種自身免疫性疾病，但是其確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。在動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)IL-27是促炎T細(xì)胞免疫反應(yīng)的抑制者。在此，我們主要探討IL-27在Vogt-小柳原田綜合征發(fā)病中所起的作用。 方法： 分別抽取VKH綜合征的活動(dòng)期和靜止期患者，正常對(duì)照組的外周靜脈血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，使用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)IL-27P28和EBI3的mRNA表達(dá)水平；使用ELISA方法檢測(cè)血清，PBMCs，naiveCD4+T細(xì)胞和DC-T細(xì)胞共培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子水平。利用流式技術(shù)檢測(cè)IL-17陽(yáng)性T細(xì)胞的比例。 結(jié)果： （1）活動(dòng)期VKH患者PBMCs中IL-27p28mRNA（IL-27獨(dú)有的亞單位）水平顯著低于VKH靜止期患者和正常對(duì)照組，而三組中EBI3mRNA的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異�；顒�(dòng)期VKH患者中IL-27血清水平顯著低于靜止期患者和正常對(duì)照組，而靜止期患者和正常對(duì)照組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。活動(dòng)期Vogt-小柳原田綜合征患者PBMCs無(wú)論是否有SAC刺激，其培養(yǎng)上清中IL-27水平顯著低于靜止期患者和正常對(duì)照組，而靜止期VKH綜合征患者和正常對(duì)照組的PBMC是否SAC刺激，，其培養(yǎng)上清中IL-27水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 （2）活動(dòng)期VKH綜合征患者PBMCs中產(chǎn)生IL-17陽(yáng)性的CD4+T細(xì)比例顯著高于靜止期VKH患者和正常對(duì)照組，而在靜止期VKH患者和正常對(duì)照組之間分泌IL-17陽(yáng)性的CD4+T細(xì)胞比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 （3）重組IL-27顯著抑制VKH患者和正常對(duì)照組中na ve CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化和IL-17分泌. IL-27處理的DC可以顯著抑na ve CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化。 （4） IL-27顯著促進(jìn)na ve CD4+T細(xì)胞分泌IL-10，而且活動(dòng)期VKH綜合征患者的naiveCD4+T細(xì)胞在IL-27的刺激下分泌IL-10的水平顯著低于靜止期患者和正常對(duì)照組。 （5） VKH患者經(jīng)過(guò)藥物治療后，血清中IL-27水平顯著升高，PBMCs分泌IL-27水平也顯著上調(diào)，體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素可以顯著促進(jìn)PBMCs分泌IL-27，而環(huán)孢素對(duì)IL-27分泌沒(méi)有影響。 結(jié)論： 我們的結(jié)果顯示：活動(dòng)期VKH患者中IL-27表達(dá)降低可能導(dǎo)致Th17細(xì)胞的高表達(dá)，進(jìn)而參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。調(diào)節(jié)IL-27將可能為治療此類疾病提供一個(gè)新策略。 第二部分芳香烴受體在Behcet病發(fā)病機(jī)制中作用的研究 目的： 最新研究發(fā)現(xiàn)芳香烴受體（AhR）在免疫和炎癥反應(yīng)中起著重要作用。AhR通過(guò)與其配體（例如非毒性的FICZ和ITE）發(fā)揮作用。Behcet病是一個(gè)自身炎癥性疾病，在本項(xiàng)目研究中，我們探討AhR在Behcet病發(fā)病機(jī)制中的作用及其機(jī)制。 方法： 分別抽取活動(dòng)期Behcet病患者、靜止期Behcet病患者和正常對(duì)照組的外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），磁珠分離單核細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞。利用熒光定量PCR的方法檢測(cè)PBMCs中AhR表達(dá)水平，利用ELISA方法檢測(cè)PBMCs培養(yǎng)上清， CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)上清，DCs和DC/T細(xì)胞共培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子水平；利用流式檢測(cè)產(chǎn)生IL-17和INF-γ的CD4+T細(xì)胞比例。 結(jié)果： （1） AhR在活動(dòng)期Behcet病患者PBMCs中mRNA表達(dá)水平降低�；顒�(dòng)期Behcet病患者PBMCs在anti-CD3/CD28的刺激下分泌IL-17，IFN-γ和IL-22的水平顯著高于正常對(duì)照組。FICZ和ITE能夠顯著抑制Behcet病患者和正常對(duì)照組PBMCs分泌IL-17，IFN-γ，并可以顯著促進(jìn)其分泌IL-22。 （2）活動(dòng)期Behcet病患者CD4+T細(xì)胞分泌IFN-γ, IL-17和IL-22的水平顯著高于正常對(duì)照組。而且FICZ和ITE可以抑制CD4+T細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-17，而對(duì)IL-22分泌具有促進(jìn)作用。在FICZ和ITE對(duì)CD4+T細(xì)胞作用的過(guò)程中，F(xiàn)ICZ和ITE能夠顯著上調(diào)STAT3和STAT5的磷酸化水平，而對(duì)于STAT1和STAT4的磷酸化水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)的影響。FICZ和ITE不僅可以分別顯著抑制Th1和Th17細(xì)胞重要的轉(zhuǎn)錄因子T-bet和RORC表達(dá)，而且對(duì)Th17細(xì)胞功能和亞型維持的分子IL-23R和CCR6也有顯著的抑制作用。 （3）FICZ和ITE可以顯著抑制活動(dòng)期Behcet病患者和正常對(duì)照組中LPS-處理的DCs表面HLA-DR，CD80和CD86分子的表達(dá)水平，對(duì)DCs表面CD40和CD83的表達(dá)水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)影響。 （4）活動(dòng)期Behcet病患者LPS處理的DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著高于正常對(duì)照組。FICZ和ITE能夠顯著抑制活動(dòng)期Behcet病患者和正常對(duì)照組DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α。而對(duì)于抗炎因子，F(xiàn)ICZ和ITE能夠促進(jìn)活動(dòng)期Behcet病患者和正常對(duì)照組DCs分泌IL-10。 （5）FICZ和ITE對(duì)DC啟動(dòng)的Th1和Th17細(xì)胞極化具有抑制作用。 結(jié)論： 本部分研究顯示了AhR的表達(dá)降低與Behcet病的活動(dòng)性相關(guān)，AhR活化降低導(dǎo)致了Th1和Th17細(xì)胞免疫反應(yīng)的上調(diào)。AhR活化還可以控制DC的分化、成熟和功能。因此，調(diào)節(jié)AhR激活可能為治療此類疾病提供了一個(gè)新策略。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R773.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊培增,張震,王紅,周紅顏,黃祥坤,李兵;葡萄膜炎的臨床類型及病因探討[J];中華眼底病雜志;2002年04期

本文編號(hào)：2291164