【摘要】：視網(wǎng)膜在很多疾病狀態(tài)下都會受到力的牽張作用,比如病理性近視,玻璃體后脫離,增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變等。這些力的牽張作用,在疾病的病理生理過程中扮演重要角色。Muller細胞作為視網(wǎng)膜中主要的膠質(zhì)細胞,對維持神經(jīng)元的穩(wěn)態(tài)和代謝平衡都有非常重要的作用,幾乎參與各種視網(wǎng)膜損傷和疾病過程。已經(jīng)有研究初步提示Muller細胞在生物力的牽張作用下有一系列細胞生物學(xué)效應(yīng)。但其具體的分子生物學(xué)效應(yīng)及在視網(wǎng)膜疾病發(fā)病機制中的作用還有待進一步深入研究。本研究通過觀察Muller細胞,在持續(xù)性機械牽張作用下基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrixmetalloproteinase-2,MMP2)基因和蛋白水平的變化；在周期性機械牽張作用下全基因組的變化,進一步揭示了Muller細胞復(fù)雜的生物力學(xué)效應(yīng),為解釋和進一步研究眾多有視網(wǎng)膜受力的視網(wǎng)膜疾病的分子生物學(xué)機制提供了新的思路。第一部分持續(xù)性機械牽張作用下大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞MMP-2表達變化的研究目的 觀察持續(xù)性機械牽張對大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞MMP-2分泌的影響。方法 原代培養(yǎng)SD大鼠Muller細胞,選取2-3代生長良好的細胞種到底部由彈性硅膠膜組成細胞培養(yǎng)板中,給予幅度為15%,持續(xù)時間為24h的持續(xù)機械牽拉。用Real-time PCR, Western blot分別檢測Muller細胞胞內(nèi)MMP-2基因和蛋白的表達變化,用Western blot 和t ELIS A檢測分泌至Muller細胞培液中MMP-2的含量,用凝膠酶譜檢測培液中有活性的MMP-2的含量。結(jié)果Muller細胞經(jīng)過24h牽拉,胞內(nèi)MMP-2的mRNA和蛋白水平有明顯提高,胞外MMP-2總蛋白及其活性形式的含量亦有明顯增加。結(jié)論 持續(xù)性機械牽張能夠促進Muller細胞MMP-2的表達和分泌,這為解釋眾多有視網(wǎng)膜牽引因素的視網(wǎng)膜疾病的視網(wǎng)膜重塑機制提供了新的思路。第二部分周期性機械牽張作用下大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞全基因組表達變化的研究目的 觀察在周期性機械牽張刺激下Muller細胞全基因組的表達變化。方法 原代培養(yǎng)SD大鼠Muller細胞,選取2-3代生長良好的細胞種到底部由彈性硅膠膜組成細胞培養(yǎng)板中,分別給予1h和24h的周期性牽拉,牽拉幅度均為15%,收集細胞的RNA進行基因芯片雜交。芯片結(jié)果用GeneSpring基因芯片分析軟件進行分析,用聚類分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)數(shù)據(jù)庫注釋基因的功能和信號通路。篩選出的感興趣基因進一步用Real-time PCR驗證。結(jié)果 基因芯片結(jié)果分析顯示機械牽拉1h和24h后,與對照組相比,Muller細胞分別有532和991個基因有表達差異(t-test, p0.05)。在這些差異表達的基因中,在1h和24h分別有56和62個表達差異在2倍以上。篩選出一些與刺激應(yīng)激(如,Egr2,IL6)),細胞增殖(如,Areg,Atf3),組織重塑(如,PVR, Loxl2)和血管新生(如,Epha2,Nrn1)相關(guān)的基因,進一步用PCR的驗證結(jié)果與芯片結(jié)果吻合度很高。KEGG信號通路分析顯示在兩個時點MAPK信號通路均有明顯的表達變化。結(jié)論 在周期性機械牽張下Muller細胞的大量基因發(fā)生了表達變化,涉及眾多的分子信號通路。這些結(jié)果提示了Muller細胞復(fù)雜的生物力學(xué)特性,為眾多有視網(wǎng)膜牽引因素的視網(wǎng)膜疾病分子機制的解釋和進一步研究提供了新的思路。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R774.1

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本文編號：2283607