【摘要】： 隨著科技的發(fā)展,近距離工作的要求在增多,全世界范圍內(nèi)近視的發(fā)病率也在逐年增高,近視已經(jīng)嚴(yán)重影響著患者的學(xué)習(xí)、工作、生活,因而近視也成為了全球共同關(guān)注的問題。雖然近二百年來對(duì)近視的研究在不斷進(jìn)行,各項(xiàng)可能影響因素也在不斷地被發(fā)現(xiàn),但是其病因及發(fā)病機(jī)制仍沒有確切的結(jié)論,因此對(duì)近視的研究依然是世界眼科學(xué)家研究的重要課題。 自從1977年Wiesel首次用縫合恒河猴眼瞼的方法成功誘導(dǎo)出形覺剝奪性近視(form deprivation myopia, FDM)以來,近視動(dòng)物模型的建立方法也在不斷發(fā)展完善。目前,基本確立了兩種近視的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?即形覺剝奪性近視(form deprivation myopia, FDM)和離焦性近視(defocus myopia)。形覺剝奪性近視是指用縫合眼瞼或戴彌散鏡片或半透明眼罩來嚴(yán)重破壞動(dòng)物的形體視覺所引起的近視。離焦性近視是指強(qiáng)迫動(dòng)物視近或給動(dòng)物配戴負(fù)球鏡片使物體聚焦于視網(wǎng)膜的后方,從而引起調(diào)節(jié)的發(fā)生,使眼軸延長(zhǎng),所造成的近視。這兩種近視動(dòng)物模型的建立使得人們對(duì)近視的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸有了更加深入的認(rèn)識(shí),也使眼科學(xué)家對(duì)近視有了更加深入的研究。目前的研究表明：形覺剝奪可導(dǎo)致視網(wǎng)膜上的多種神經(jīng)遞質(zhì)與生長(zhǎng)因子的水平發(fā)生改變,而在這些研究中發(fā)現(xiàn)：誘導(dǎo)近視發(fā)生的物質(zhì)主要來自視網(wǎng)膜的神經(jīng)上皮層。其大致產(chǎn)生過程如下：視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮產(chǎn)生的一級(jí)信使首先作用于視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)和脈絡(luò)膜,使之產(chǎn)生下一級(jí)的生化物質(zhì)也稱為二級(jí)信使,二級(jí)信使再作用于鞏膜,調(diào)控鞏膜生長(zhǎng)從而使鞏膜重塑,引起眼軸的過度延長(zhǎng),從而形成近視。其他一些自分泌或旁分泌環(huán)路涉及的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子及其酪氨酸激酶受體可能也對(duì)RPE細(xì)胞的病理改變起著至關(guān)重要的作用。但是這些因素對(duì)近視的影響機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。 褪黑素(melatonin, MLT)它進(jìn)入蛙黑色素細(xì)胞后會(huì)使蛙全身的膚色變淺,因此被稱為褪黑素,是松果體在生理?xiàng)l件下夜間分泌的一種甲氧吲哚,化學(xué)名為N-乙酰-5-甲氧色胺,是由5-羥色胺轉(zhuǎn)化而來的,其分泌節(jié)律由交叉上核團(tuán)來根據(jù)晝夜節(jié)律來控制。長(zhǎng)期以來,人們認(rèn)為褪黑素的生物作用主要是調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律、中心溫度、造血、糖代謝節(jié)律以及睡眠-覺醒生物節(jié)律相位轉(zhuǎn)換,改善睡眠。但隨著研究的深入,人們還發(fā)現(xiàn)褪黑素還具有(1)直接清除自由基；(2)增強(qiáng)抗氧化酶的活力及其基因表達(dá)；(3)抑制一氧化氮合酶(NOS)的活性；(4)具有強(qiáng)大的線粒體保護(hù)功能。近年來已有研究表明NO與視網(wǎng)膜的發(fā)育、視覺興奮和視覺信息的傳導(dǎo)有關(guān),提示其可能參與近視的形成。在Jaworski等及Kumi等的研究中發(fā)現(xiàn),早基因c-fos可通過AP-1位點(diǎn)調(diào)控多巴胺限速酶-酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinases,MMPs),也已被證明對(duì)近視的發(fā)生及發(fā)展具有重要作用,另外,c-fos具有的抗細(xì)胞凋亡等功能也可能對(duì)近視的發(fā)展具有一定影響,并且褪黑素通過對(duì)視交叉上核內(nèi)c-fos基因的調(diào)節(jié),來實(shí)現(xiàn)光周期信號(hào)的傳遞。 本實(shí)驗(yàn)擬建立豚鼠FDM模型,觀察褪黑素和iNOS、c-fos在豚鼠FDM視網(wǎng)膜中的表達(dá)及作用。 材料與方法 選用出生7天齡的健康花色豚鼠30只,用半透明眼罩遮蓋豚鼠右眼,左眼為對(duì)照眼。實(shí)驗(yàn)前對(duì)豚鼠進(jìn)行散瞳檢影驗(yàn)光,排除先天性近視及其它眼疾,用形覺剝奪的方法建立近視眼動(dòng)物模型。形覺剝奪8周后,分別檢測(cè)雙眼屈光度及眼軸長(zhǎng)度。HE染色光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜鞏膜病理變化,免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)視網(wǎng)膜褪黑素受體、iNOS和c-fos的表達(dá)水平。應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0對(duì)蛋白表達(dá)進(jìn)行圖像分析,表達(dá)強(qiáng)度用平均光密度值表示。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用x±s表示,采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),雙眼之間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),在此基礎(chǔ)上進(jìn)行單因素方差分析及相關(guān)性檢驗(yàn),以a=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1.形覺剝奪前遮蓋眼屈光度(3.85±0.80D)與對(duì)照眼屈光度(3.75±1.20D)無明顯差異(P0.05),形覺剝奪8周后遮蓋眼屈光度(—7.25±2.60D),對(duì)照眼屈光度(2.85±0.96D)(P0.05)；形覺剝奪前遮蓋眼眼軸長(zhǎng)度(6.78±0.18mm)與對(duì)照眼眼軸長(zhǎng)度(6.86±0.22mm)無明顯差異(P0.05),形覺剝奪8周后,遮蓋眼眼軸長(zhǎng)度(8.54±0.20mm),對(duì)照眼眼軸長(zhǎng)度(7.12±0.17mm),有顯著差異(P0.05)。 2.免疫組化檢測(cè)形覺剝奪前褪黑素的表達(dá)遮蓋眼(0.3650±0.0518A)和對(duì)照眼(0.4142±0.0778A)無明顯差異(P0.05),iNOS的表達(dá)遮蓋眼(0.3321±0.0476A)和對(duì)照眼(0.3431±0.0354A)無明顯差異(P0.05),c-fos的表達(dá)遮蓋眼(0.3752±0.0560A)和對(duì)照眼(0.3756±0.0822A)無明顯差異(P0.05)；形覺剝奪8周后褪黑素的表達(dá)遮蓋眼(0.3199±0.0279A)和對(duì)照眼(0.3960±0.0932A)有顯著差異(P＜0.05),iNOS的表達(dá)遮蓋眼(0.4005±0.0605A)和對(duì)照眼(0.3326±0.1071A)有顯著差異(P0.05),c-fos的表達(dá)遮蓋眼(0.2083±0.0604A)和對(duì)照眼(0.3654±0.0733A)有顯著差異(P0.05),也就是遮蓋眼較對(duì)照眼視網(wǎng)膜中褪黑素受體的表達(dá)減少,iNOS表達(dá)增多,c-fos表達(dá)減少。 3.遮蓋眼中褪黑素受體與iNOS的表達(dá)(r=—0.8132,P=0.0260.05),呈負(fù)相關(guān),而與c-fos的表達(dá)(r=0.7085,P=0.0750.05)呈正相關(guān)。 結(jié)論 1.單眼半透明眼罩遮蓋8周后明顯形成近視,動(dòng)物形覺剝奪模型成功建立。 2.遮蓋眼視網(wǎng)膜中褪黑素受體表達(dá)明顯減少,提示褪黑素可能參與了近視的形成。 3.遮蓋眼視網(wǎng)膜中iNOS表達(dá)明顯增多,提示iNOS可能參與了近視的形成。 4.遮蓋眼視網(wǎng)膜中c-fos表達(dá)明顯減少,提示c-fos可能參與了近視的形成。 5.遮蓋眼視網(wǎng)膜中褪黑素和iNOS的表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān),褪黑素和c-fos呈明顯的正相關(guān)�？梢酝茰y(cè)在形覺剝奪性近視的形成過程中褪黑素影響了iNOS、c-fos的表達(dá)和活性,導(dǎo)致了近視的形成。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R778.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2273662