【摘要】：目的:(1)引入納米載體,制備第三代光敏劑——納米酞菁光敏劑。(2)體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞和HREC,并制作CNV大鼠模型,研究納米酞菁光敏劑在體內(nèi)外的藥代動力學(xué)以及藥效學(xué),評估納米載體的構(gòu)效關(guān)系。 方法:(1)合成芳醚樹枝狀酞菁鋅G_1-ZnPc(COOH)_8和G_2-ZnPc(COOH)_(16),以及兩親性嵌段共聚物PLL-PEG-PLL,以后者為載體制備兩種納米粒子——納米酞菁光敏劑G_1-ZnPc(COOH)_8/m和G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m,通過AFM、TEM、UV/vis和熒光光譜對納米粒子的形態(tài)和結(jié)構(gòu)進行表征。(2)紫外可見分光光度計法研究G_1-ZnPc(COOH)_8、G_1-ZnPc(COOH)_8/m在體外培養(yǎng)人RPE和HREC的藥代動力學(xué);CCK-8檢測試劑盒研究兩種光敏劑介導(dǎo)的PDT對人RPE細(xì)胞的毒性作用;利用LSCM觀察了PDT前后細(xì)胞△Ψm的變化。(3)通過三面鏡和激光間接檢眼鏡兩種方式將倍頻532nm激光導(dǎo)入BN大鼠眼內(nèi),間接檢眼鏡檢查、FFA、OCT和光電鏡檢查證實并比較兩種導(dǎo)入方式制作CNV模型的可行性。(4)通過OCT、FFA和電鏡檢查比較G_1-ZnPc(COOH)_8和G_1-ZnPc(COOH)_8/m兩種光敏劑介導(dǎo)的PDT對CNV的影響。 結(jié)果:(1)兩種納米粒子均有特殊的“核-殼結(jié)構(gòu)”,G_1-ZnPc(COOH)_8/m呈球形,直徑大約為50nm,G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m呈扁球形,直徑大約為120nm,兩者的分散性均比較好;G_1-ZnPc(COOH)_8/m最大吸收峰為638nm,相對于G_1-ZnPc(COOH)_8紅移了11nm,G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m的最大吸收峰為623nm,相對于G_2-ZnPc(COOH)16紅移了13nm;G_1-ZnPc(COOH)_8和G_2-ZnPc(COOH) _(16)熒光壽命分別為5.37ns和0.49ns,而G_1-ZnPc(COOH)_8/m和G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m為5.93ns和0.9ns。(2)分析RPE細(xì)胞和HREC對兩種光敏劑的攝取量,發(fā)現(xiàn)兩類細(xì)胞間差異有顯著性,P0.01,兩種藥物間差異沒有顯著性,P0.05;兩種光敏劑介導(dǎo)的PDT對RPE細(xì)胞均有明顯的殺傷作用,納米光敏劑組細(xì)胞存活率明顯比自由酞菁配合物組低,差異有顯著性(p0.01);PDT后LSCM下兩個實驗組細(xì)胞呈較強的單一綠色熒光。(3)光凝后3w,OCT檢查顯示大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮下有團塊狀、梭形或不規(guī)則膨大,其間可見CNV膜的條帶狀或片狀紅白色高密度反光,FFA檢查發(fā)現(xiàn)大部分光凝斑可見明顯熒光滲漏,組織切片光學(xué)顯微鏡下可見有毛細(xì)血管樣物質(zhì)突向視網(wǎng)膜下,電鏡下見增殖組織中新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,其中見紅細(xì)胞;比較兩組模型CNV的滲漏發(fā)生率,發(fā)現(xiàn)兩種不同激光導(dǎo)入法差異沒有顯著性,P0.05。(4)PDT處理后1w和2w,PDT1與PDT2組兩組之間滲漏好轉(zhuǎn)率差異沒有顯著性(P0.05);處理后1w,PDT1與PDT2組兩組之間CNV閉合率差異沒有顯著性(P0.05),而處理后2w,PDT2的CNV閉合率明顯高于PDT1組,兩組之間差異有顯著性(P0.05);PDT后兩個實驗組大鼠視網(wǎng)膜CNV的好轉(zhuǎn)和閉合得到眼底檢查、OCT、FFA和電鏡檢查的證實;PDT后1w和2w,4個對照組CNV滲漏情況和造模3周時相比未見明顯變化。 結(jié)論:(1)芳醚樹枝狀酞菁鋅引入納米載體后熒光強度減弱,熒光壽命增長。(2)納米酞菁光敏劑介導(dǎo)的PDT對RPE細(xì)胞殺傷作用高于自由酞菁配合物。(3)激光間接檢眼鏡導(dǎo)入法導(dǎo)入倍頻532nm激光可以成功誘導(dǎo)CNV模型,值得在CNV模型制作中推廣。(4)納米酞菁光敏劑介導(dǎo)的PDT相對于自由酞菁配合物有更高的CNV閉合率,對于CNV,改良的納米酞菁光敏劑具有更高的光動力活性。
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【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R773.4

【參考文獻】

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本文編號：2269931