【摘要】：目的：建立兔感染茄病鐮刀菌的真菌性角膜炎模型,監(jiān)測模型眼不同時(shí)期淚液中(1,3)-8-D-葡聚糖的濃度變化,結(jié)合病變角膜組織中菌絲負(fù)荷及角膜潰瘍臨床評(píng)分進(jìn)行分析,討論(1,3)-p-D-葡聚糖檢測評(píng)價(jià)真菌性角膜炎動(dòng)物模型的可行性；通過藥物治療真菌性角膜炎動(dòng)物模型,觀察(1,3)-β-D-葡聚糖在真菌性角膜炎愈合過程中的濃度變化,進(jìn)一步討論(1,3)-β-D-葡聚糖評(píng)價(jià)藥物治療真菌性角膜炎療效的應(yīng)用,為探索一種真菌性角膜炎無創(chuàng)篩查和定量評(píng)價(jià)手段提供理論依據(jù)。 方法：1.新西蘭大耳白兔32只,隨機(jī)選取16只為實(shí)驗(yàn)組,16只為陰性對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組采用角膜劃痕法接種標(biāo)準(zhǔn)茄病鐮刀菌株,制作真菌性角膜炎動(dòng)物模型,陰性對(duì)照組接種生理鹽水’。均為右眼接種,左眼為正常對(duì)照組。每日行裂隙燈顯微鏡檢查,于病程第3、7、15、21天進(jìn)行臨床評(píng)分,并分別收集三組淚液10μL行(1,3)-β-D-葡聚糖濃度檢測。分別于上述各時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取實(shí)驗(yàn)組4只、陰性對(duì)照組4只經(jīng)耳緣靜脈栓塞處死后,留取角膜組織行組織病理學(xué)檢查。觀察病情進(jìn)展情況。2.新西蘭大耳白兔42只,按第一部分的方法,接種茄病鐮刀菌,均為右眼接種。從42只兔真菌性角膜炎模中挑選臨床評(píng)分接近的36只進(jìn)行實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分為治療組18只、對(duì)照組18只。治療組自成模后第1天即予5%那他霉素滴眼液點(diǎn)眼,對(duì)照組不予干預(yù)。分別于治療前,治療第3、5、10、15、21天收集患眼淚液行(1,3)-β-D-葡聚糖濃度檢測,并于上述相同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取治療組3只、對(duì)照組3只處死后留取角膜組織,以角膜潰瘍?yōu)橹行姆肿鲀煞?一份行組織病理學(xué)檢查,一份置于經(jīng)高壓消毒的EP管中用于MMP-9蛋白Western-blot檢測。觀察抗真菌藥物治療療效。 結(jié)果：1.兔感染茄病鐮刀菌性角膜炎模型建立成功,成功率100%。病程第3、7、15、21天,實(shí)驗(yàn)組淚液中(1,3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(656.32±97.63)pg/mL、(858.29±96.26)pg/mL、(1047.49±105.36)pg/mL、(1679.47±124.42)pg/mL,而正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)葡聚糖濃度全部穩(wěn)定于20pg/mL以下,顯著低于實(shí)驗(yàn)組(F=69.05,P0.01)。從實(shí)驗(yàn)組(1,3)-p-D-葡聚糖濃度的變化來看,隨著真菌性角膜炎病情的進(jìn)展,(1,3)-β-D-葡聚糖濃度隨之升高,而角膜組織中真菌負(fù)荷未增高,甚至有減少趨勢。 2.治療組治療第3、5、10、15、21天(1,3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(438.38±79.58)pg/mL.(194.39±23.54)pg/mL.(106.54±19.87)(58.36±10.39)pg/mL,(16.27±3.42)pg/mL；而對(duì)照組在病程第3天時(shí)濃度為(554.56±92.26)pg/mL,隨后逐日升高,至21天時(shí)升至(1894.47±156.47)pg/mL,兩組間各檢測時(shí)間點(diǎn)濃度差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=217.65,227.96,P0.01)。角膜組織中MMP-9Western blot檢測結(jié)果顯示,治療前,兩組MMP-9蛋白均有表達(dá),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(T=1.358,P0.05)；至治療15、21天,對(duì)照組蛋白表達(dá)量明顯增加,而治療組無升高,甚至開始下降,差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(T=9.396,25.475,P0.01)。 結(jié)論：1.淚液中(1,3)-β-D-葡聚糖濃度與真菌性角膜炎臨床評(píng)分有相關(guān)性,能夠定量評(píng)價(jià)角膜真菌感染的嚴(yán)重程度,較臨床評(píng)分等半定量評(píng)價(jià)手段更優(yōu)；角膜真菌負(fù)荷僅能評(píng)價(jià)造模是否成功,不能評(píng)價(jià)角膜炎癥程度。 2.淚液(1,3)-β-D-葡聚糖檢測作為一種取材簡便、準(zhǔn)確定量的檢測方法,能夠量化評(píng)價(jià)藥物治療真菌性角膜炎療效。
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【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R772.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2269923