【摘要】：目的：糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一種臨床常見(jiàn)的慢性疾病。隨著人們物質(zhì)生活水平的提高，以營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩、缺乏運(yùn)動(dòng)與超重肥胖為主要特征的不健康生活方式日益流行，DM的發(fā)病率和死亡率逐年上升。DM已成為繼心血管疾病和癌癥之后人類的第三大死亡原因。糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)是DM最常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一，每年造成的失明患者超過(guò)10,000人。DR的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚未完全闡明。近年來(lái)許多研究認(rèn)為，，氧化應(yīng)激反應(yīng)是糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的共同通路。高糖狀態(tài)下機(jī)體氧化與抗氧化防御系統(tǒng)失衡，氧自由基清除能力下降，氧化應(yīng)激產(chǎn)物堆積，損傷組織和細(xì)胞。視網(wǎng)膜組織含有豐富的多不飽和脂肪酸，對(duì)血液中氧分子的攝取量最高，對(duì)于氧化應(yīng)激反應(yīng)也更加敏感。DR的基本病理改變是血-視網(wǎng)膜屏障破壞，新生血管和纖維生成。新生血管的發(fā)生發(fā)展是臨床面臨的難題，后期可引起玻璃體積血和牽拉性視網(wǎng)膜脫離，嚴(yán)重影響視力甚至導(dǎo)致失明。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialgrowth factor, VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derivedfactor, PEDF)分別作為主要的血管刺激因子與血管抑制因子，其二者間的平衡調(diào)節(jié)對(duì)于新生血管形成是至關(guān)重要的。已有文獻(xiàn)指出，高糖可導(dǎo)致視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelial, RPE)細(xì)胞分泌的VEGF和PEDF表達(dá)量發(fā)生改變以及促進(jìn)RPE細(xì)胞增生。隨著氧化應(yīng)激和細(xì)胞因子學(xué)說(shuō)在DR發(fā)病機(jī)制中的探索，尋找安全有效的抗氧化藥物，恢復(fù)血管刺激因子與抑制因子之間的平衡狀態(tài)，對(duì)于提高患者的生活質(zhì)量有重要意義。硫辛酸(lipoic acid, LA)富含于多種食物中，是應(yīng)用廣泛作用強(qiáng)大的抗氧化劑。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用不同濃度的α-硫辛酸(alpha lipoic acid, α-LA)作用于高糖體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮(human retinal pigment epithelial, HRPE)細(xì)胞48小時(shí)，觀察HRPE細(xì)胞形態(tài)、活力、氧化應(yīng)激水平以及VEGF、PEDF分泌含量的變化，以研究α-LA對(duì)高糖環(huán)境下HRPE細(xì)胞的保護(hù)作用并進(jìn)一步探討該藥治療DR的可能作用機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)HRPE細(xì)胞，隨機(jī)分為7組：⑴正常對(duì)照組(葡萄糖濃度：5.56mmol/L)；⑵高糖組(葡萄糖濃度：30mmol/L)；⑶高滲對(duì)照組(5.56mmol/L葡萄糖+24.44mmol/L甘露醇)；⑷高糖+α-LA(50μmol/L)組；⑸高糖+α-LA(100μmol/L)組；⑹高糖+α-LA(200μmol/L)組；⑺高糖+α-LA(300μmol/L)組。各組細(xì)胞在不同條件培養(yǎng)液中培養(yǎng)48h，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。觀察HRPE細(xì)胞形態(tài)，用MTT法檢測(cè)不同濃度α-LA對(duì)細(xì)胞活力的影響，比色法檢測(cè)丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽(glutathione, GSH)的變化，用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定HRPE細(xì)胞上清液中VEGF與PEDF的含量。 結(jié)果： 1高糖組的細(xì)胞活性明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)；甘露醇組細(xì)胞活性與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯改變；各濃度的α-LA干預(yù)組細(xì)胞活性均較高糖組升高(P＜0.05)，總體上呈劑量依賴性。 2與正常對(duì)照組相比，高糖組的MDA含量明顯升高，SOD活性、GSH含量明顯下降(P＜0.05)；甘露醇組則無(wú)明顯改變；α-LA干預(yù)后，相較高糖組，各給藥組SOD活性及GSH含量均升高，MDA含量降低(P＜0.05)，呈劑量依賴性；各藥物濃度組與正常對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 3與正常對(duì)照組相比，高糖組VEGF分泌含量明顯增加，PEDF含量明顯減少(P＜0.05)；甘露醇組則無(wú)明顯變化；α-LA(50,100,200,300μmol/L)能增加PEDF的分泌含量，降低VEGF的分泌含量，相較高糖組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且呈濃度依賴性；各濃度α-LA干預(yù)組與正常對(duì)照組相比VEGF、PEDF的水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 結(jié)論： 1高糖環(huán)境可導(dǎo)致HRPE細(xì)胞活力減低，氧化應(yīng)激水平增強(qiáng)，以及分泌VEGF增多，分泌PEDF減少，這可能與DR的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 2一定濃度的α-LA可抑制高糖環(huán)境下HRPE細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平，使VEGF分泌減少和PEDF分泌增多。提示α-LA可能通過(guò)抗氧化作用調(diào)節(jié)VEGF和PEDF的平衡狀態(tài)從而保護(hù)了HRPE細(xì)胞，抑制了DR病理性新生血管的形成。這為α-LA的臨床應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2263026