【摘要】：目的：研究端粒功能障礙與激活P53途徑在大鼠耳蝸老化過程中的可能作用，并初步探討老年性耳聾可能的發(fā)病機理。 方法：耳廓反射靈敏的1月齡SD大鼠72只，隨機分為兩組：生理鹽水對照組，D-半乳糖組。D-半乳糖組每日接受頸部皮下注射50g/L的D-半乳糖（500mg/Kg體重），連續(xù)注射八周。生理鹽水對照組每日接受頸部皮下注射等體積生理鹽水，連續(xù)注射八周。按注射后3、6、9個月將每組分為三個亞組，每亞組12只。實時定量PCR檢測耳蝸組織端粒相對長度與P53基因mRNA表達。Western-blotting檢測P53蛋白相對表達水平。 結果：給藥后3月、6月、9月，各時間點D-半乳糖組分別與生理鹽水對照組大鼠相比，端粒相對長度檢測差異均無統(tǒng)計學意義，但生理鹽水對照組大鼠給藥后9月與給藥后3月相比，端粒相對長度縮短，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），D-半乳糖組大鼠給藥后9月與給藥后3月相比，端粒相對長度亦縮短，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。D-半乳糖組大鼠給藥后3月、6月分別與對照組相比，D-半乳糖組P53表達增加，與對照組之間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），給藥后9月D-半乳糖組和對照組之間P53表達差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），生理鹽水組大鼠給藥后3月、6月、9月P53表達呈增加趨勢，給藥后6月、9月與給藥后3月相比差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；D-半乳糖組大鼠3月、6月、9月P53表達呈也出現(xiàn)增加趨勢，給藥后9月與給藥后3月相比差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結論：在內(nèi)耳組織自然老化過程中有端粒的縮短導致其功能障礙的參與，并有抑癌基因P53的激活，說明端粒-P53途徑可能參與了ARHL的病程。D-半乳糖誘導的內(nèi)耳擬老化模型與對照組相比端粒相對長度無明顯改變，但P53有一定范圍的激活，而端�？s短與細胞分裂次數(shù)有關，因此，我們認為P53表達水平改變可能出現(xiàn)在端粒改變之前，端粒縮短可能需要更長的時間，，D-半乳糖誘導的內(nèi)耳擬老化的作用可能通過其它途徑影響P53及其下游信號分子發(fā)揮作用，而P53的持續(xù)激活有一定的限度，會出現(xiàn)一個平臺期，可能為D-半乳糖誘導的線粒體DNA突變與P53依賴的細胞修復相互作用的結果。
[Abstract]:Aim: to investigate the possible role of telomere dysfunction and activation of p53 pathway in cochlear aging in rats and to explore the possible pathogenesis of presbycusis. Methods: 72 1-month old SD rats with sensitive auricle reflex were randomly divided into two groups: normal saline control group, D- galactose group. D- galactose group received subcutaneous injection of 50g/L (500mg/Kg body weight) into the neck for 8 weeks. Saline control group received subcutaneous injection of the same volume of saline into the neck for 8 weeks. Each group was divided into three subgroups with 12 rats in each subgroup. The relative length of telomere and the expression of p53 gene mRNA were detected by real-time quantitative PCR. Western-blotting was used to detect the relative expression of p53 protein. Results: there was no significant difference in telomere relative length between Dgalactose group and normal saline control group at 3 months, 6 months and 9 months after administration. However, the relative length of telomere in the control group was shorter than that in the control group (P 0.05). The relative length of telomere was also shorter in the Dgalactose group than in the control group in 9 months after administration and 3 months after administration. The difference was statistically significant (P0.05). The expression of p53 in D- galactose group was higher than that in control group in 3 months and 6 months after administration. There was no significant difference in p53 expression between Dgalactose group and control group in 9 months after administration (P0.05), but the expression of p53 in saline group showed an increasing trend in 3 months, 6 months and 9 months after administration of normal saline, and there was no significant difference in p53 expression between Dgalactose group and control group (P0.05). The expression of p53 in Dgalactose group was also increased in 6 months, September and 3 months after administration (P0.05), and there was a significant difference in p53 expression between 9 months after administration and 3 months after administration (P0.05). Conclusion: telomere shortening may lead to dysfunction and activation of p53 gene during natural aging of inner ear tissue. The results suggest that telomere p53 pathway may be involved in the course of ARHL. D- galactose induced pseudo aging model of inner ear has no significant change in telomere relative length, but p53 is activated to a certain extent, and telomere shortening is related to the number of cell division. We believe that the changes in p53 expression may occur before telomere changes, and telomere shortening may take longer time to induce pseudoaging of the inner ear induced by D-galactose, which may affect p53 and its downstream signaling molecules in other ways. However, the continuous activation of p53 is limited, and there may be a plateau phase, which may be the result of the interaction between mitochondrial DNA mutation induced by D-galactose and p53 dependent cell repair.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R764.35

【共引文獻】

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本文編號：2210564