【摘要】：目的 研究不同周齡C57BL/6小鼠內(nèi)耳形態(tài)的變化以及CaV1.3鈣離子通道蛋白在內(nèi)耳組織中的表達(dá),探討其在年齡相關(guān)性聽(tīng)力損失(age-related hearing loss, AHL)中的作用。 方法 應(yīng)用聽(tīng)性腦干反應(yīng)(ABR)分別檢測(cè)4周齡,14周齡,24周齡,48周齡的C57BL/6小鼠的聽(tīng)力,HE染色和掃描電鏡觀察內(nèi)耳形態(tài)年齡相關(guān)性的變化。用免疫熒光方法觀察CaV1.3鈣離子通道蛋白在內(nèi)耳組織中的分布和表達(dá)。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)CaV1.3鈣通道蛋白基因(CACNA1D)mRNA在內(nèi)耳組織的表達(dá)。 結(jié)果 隨著年齡的增長(zhǎng)ABR反應(yīng)閾值明顯提高,相對(duì)與其他周齡而言,48周齡的C57BL/6小鼠ABR反應(yīng)閾值則顯著增高。隨著年齡的增長(zhǎng)毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞也逐漸出現(xiàn)缺失,靜纖毛數(shù)量有所減少,少數(shù)出現(xiàn)倒伏等病理變化;48周左右毛細(xì)胞幾乎完全缺失,螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失明顯增多,血管紋和螺旋韌帶可見(jiàn)一定程度的萎縮。免疫熒光顯示CaV1.3主要分布在小鼠耳蝸內(nèi)外毛細(xì)胞的側(cè)膜和頂膜、血管紋細(xì)胞,螺旋(板)緣細(xì)胞、螺旋韌帶、螺旋凸,前庭膜上也有適度的表達(dá),CaV1.3在老齡鼠(48周齡)耳蝸各部分的表達(dá)明顯減少。RT-PCR的結(jié)果顯示CaV1.3鈣通道蛋白基因(CACNA1D)mRNA表達(dá)具有一定的組織特異性,在耳蝸和腎臟中均有表達(dá),隨年齡的增長(zhǎng)CaV1.3鈣通道蛋白表達(dá)量逐漸減少。 結(jié)論 揭示了C57BL/6小鼠內(nèi)耳形態(tài)以及聽(tīng)覺(jué)功能的年齡相關(guān)性改變,CaV1.3鈣離子通道蛋白隨年齡的增長(zhǎng)而減少,可能與年齡相關(guān)性聽(tīng)力損失有一定的關(guān)系。
[Abstract]:Objective to study the morphological changes of the inner ear and the expression of CaV1.3 calcium channel protein in the inner ear of C57BL/6 mice at different weeks, and to explore its role in age-related hearing loss (age-related hearing loss, AHL). Methods auditory brainstem response (ABR) was used to detect the morphological and age-related changes of the inner ear in C57BL/6 mice at the age of 4 weeks, 14 weeks and 24 weeks and 48 weeks of age, respectively. The distribution and expression of CaV1.3 calcium channel protein in inner ear were observed by immunofluorescence. The expression of CaV1.3 calcium channel protein (CACNA1D) mRNA in inner ear was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR). Results with the increase of age, the threshold of ABR reaction increased significantly, and the threshold of ABR reaction in C57BL/6 mice at 48 weeks of age was significantly higher than that in other weeks. Along with the age, hair cells and spiral ganglion cells also appeared to be missing gradually, the number of static cilia decreased, a few pathological changes such as lodging almost completely disappeared around 48 weeks, and the loss of spiral ganglion cells increased obviously. The stria vascularis and the spiral ligament were atrophied to a certain extent. Immunofluorescence showed that CaV1.3 was mainly distributed in the lateral membrane and apical membrane of mouse cochlear inner and outer hair cells, stria vascularis cells, spiral (plate) marginal cells, helical ligaments, spiral convexes. There was also a moderate expression of CaV1.3 on the vestibular membrane. The results of RT-PCR showed that the expression of CaV1.3 calcium channel protein (CACNA1D) mRNA in the cochlea was tissue specific and expressed in the cochlea and kidney. The expression of CaV1.3 calcium channel protein decreased with age. Conclusion Age-related changes of inner ear morphology and auditory function in C57BL/6 mice may be related to age-related hearing loss.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R764

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本文編號(hào)：2206366