【摘要】：背景 腺樣囊性癌是一種惡性腫瘤,它起源于腺體,在顏面部的涎腺中發(fā)生最多,其次是淚腺。淚腺腺樣囊性癌是淚腺上皮性腫瘤中最為常見并且惡性程度最高的腫瘤,其發(fā)生率居于第二位,僅次于多形性腺瘤。淚腺腺樣囊性癌進(jìn)展快,預(yù)后差,且其發(fā)病機(jī)制不明,除了手術(shù)外尚無有效治療方法。從基因和蛋白質(zhì)水平探討淚腺腺樣囊性癌的發(fā)生機(jī)制,尋找與其發(fā)生相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記物成為研究的一個熱點(diǎn)。分子生物學(xué)方面的研究認(rèn)為,腫瘤是一類由于某些染色體上的DNA損傷引起細(xì)胞內(nèi)某些基因異常表達(dá),以致細(xì)胞生長失去控制、缺乏分化及異常增生的一類復(fù)雜的基因疾病�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,與其相關(guān)的特征基因在不同組織(如癌、瘤、正常組織)的表達(dá)具有差異性。探索發(fā)現(xiàn)這些表達(dá)差異的特征基因,對進(jìn)一步了解腫瘤的發(fā)病機(jī)制、提高治療的針對性、做好早期預(yù)防及預(yù)后有著重大意義。Survivn和Livin是新近發(fā)現(xiàn)的IAPs家族中兩種最具有表達(dá)特異性的凋亡抑制蛋白,能夠直接或間接抑制Caspase-3凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中相關(guān)因子的活性,成為研究的重點(diǎn)。另外,在現(xiàn)代抗腫瘤藥物中,中藥占居重要的地位,其中銀杏葉提取物有明顯的抗腫瘤活性及輔助化療作用,其能夠通過調(diào)節(jié)凋亡基因的表達(dá)來抑制腫瘤細(xì)胞增殖和加速細(xì)胞凋亡,且對正常組織細(xì)胞的不良反應(yīng)較少,近年來在臨床上的應(yīng)用越來越廣泛。然而,目前Survivin、Livin和Caspase-3在淚腺腺樣囊性癌中的表達(dá)分析,及銀杏葉提取物在淚腺腺樣囊性癌發(fā)生發(fā)展中的作用很少有報道。 目的 通過比較Survivin、Livin和Caspase-3在淚腺腺樣囊性癌、淚腺多形性腺瘤和正常淚腺組織中的表達(dá)差異,探討其在淚腺腺樣囊性癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及與臨床預(yù)后之間的關(guān)系；探討中藥銀杏葉提取物對人淚腺腺樣囊性癌細(xì)胞株增殖、凋亡及Survivin、Livin和Survivin Caspase-3表達(dá)的影響,為明確淚腺腺樣囊性癌的發(fā)病機(jī)理及探索新的治療方向提供一定的理論基礎(chǔ)。 方法 1.采用RT-PCR、免疫印跡及免疫組化的方法檢測Survivin、Livin和Caspase-3在淚腺腺樣囊性癌、淚腺多形性腺瘤及正常淚腺組織中的表達(dá)情況,利用數(shù)學(xué)算法探討基因間表達(dá)的相關(guān)性。 2.通過體外培養(yǎng)人淚腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞株,應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞增殖,Annexin V/PI雙染色流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期；免疫印跡法檢測蛋白表達(dá)來分析銀杏葉提取物(EGB)對淚腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞增殖、凋亡及Survivin、Livin和Caspase-3蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果 1. Livin和Survivin在正常淚腺組織中低表達(dá)或者不表達(dá),在多形性腺瘤和淚腺腺樣囊性癌中高表達(dá),并且隨著腫瘤惡性程度的增加表達(dá)量不斷增加。Caspase-3在正常淚腺組織中高表達(dá),在淚腺多形性腺瘤和淚腺腺樣囊性癌中的表達(dá)量隨腫瘤惡性程度的增加而下降。 2. Livin和Survivin在淚腺腺樣囊性癌中的表達(dá)均與Caspase-3呈負(fù)相關(guān),但是二者之間沒有相關(guān)性。Caspase-3和Livin在淚腺腺樣囊性癌中的表達(dá)與其臨床分期、病理類型和轉(zhuǎn)移有關(guān)系,Survivin僅與腫瘤的大小及轉(zhuǎn)移有關(guān)系。 3.不同濃度的EGB對人淚腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞的體外增殖均有一定的抑制作用,并且隨著EGB濃度的升高,抑制作用增強(qiáng),量效關(guān)系顯著(P0.01)。EGB的加入能夠使ACC-2細(xì)胞Go-G1期逐漸增加,G2-M期和S期逐漸減少,并且隨著劑量的增加,ACC-2細(xì)胞凋亡率明顯增加。EGB不同濃度對ACC-2細(xì)胞Livin和Survivin基因均有一定的抑制作用,并且隨著EGB濃度的升高,抑制作用增強(qiáng)。與之相反,Caspase-3基因的相對含量則隨著EGB給藥劑量的加大而逐漸增高。 結(jié)論 1.淚腺腺樣囊性癌的發(fā)病可能與Livin和Survivin基因的表達(dá)異常上調(diào)及Caspase-3基因的表達(dá)下調(diào)有關(guān)。Caspase-3、Livin的表達(dá)與淚腺腺樣囊性癌的臨床分期、病理類型和轉(zhuǎn)移有關(guān),Survivin與腫瘤大小及是否轉(zhuǎn)移有關(guān)。 2. Livin和Survivin在淚腺腺樣囊性癌中的表達(dá)均與Caspase-3呈負(fù)相關(guān),但是二者之間沒有相關(guān)性。 3.銀杏葉提取物能夠抑制人腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞的體外增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡,對Caspase-3基因的表達(dá)有一定的促進(jìn)作用,而對Livin和Survivin基因的表達(dá)有一定的抑制作用,并且隨劑量的增加,其促進(jìn)或抑制效應(yīng)增強(qiáng)。
[Abstract]:background
Adenoid cystic carcinoma (ACC) is a malignant tumor originating from the gland and occurring most frequently in the salivary glands of the face, followed by the lacrimal gland. The pathogenesis of adenoid cystic carcinoma of the lacrimal gland is unknown, and there is no effective treatment except surgery. To explore the mechanism of the occurrence of adenoid cystic carcinoma of the lacrimal gland from the level of gene and protein, and to find the biological markers related to the occurrence of adenoid cystic carcinoma of the lacrimal gland has become a hot research topic. A complex genetic disease characterized by abnormal expression of certain genes in the cells leading to uncontrolled cell growth, lack of differentiation and dysplasia. Modern medicine considers that the expression of characteristic genes associated with tumors is different in different tissues (such as cancer, tumor, normal tissue) during the development of tumors. Survivn and Livin are two of the most specific inhibitors of apoptosis in IAPs family, which can directly or indirectly inhibit caspase-3 apoptosis signal transduction. In addition, in modern anti-tumor drugs, traditional Chinese medicine occupies an important position, Ginkgo biloba extract has obvious anti-tumor activity and adjuvant chemotherapy effect, which can inhibit the proliferation of tumor cells and accelerate apoptosis by regulating the expression of apoptotic genes, and is harmful to normal tissue cells. However, the expression of Survivin, Livin and Caspase-3 in lacrimal adenoid cystic carcinoma and the role of Ginkgo biloba extract in the development of lacrimal adenoid cystic carcinoma are rarely reported.
objective
To compare the expression of Survivin, Livin and Caspase-3 in adenoid cystic carcinoma of lacrimal gland, pleomorphic adenoma of lacrimal gland and normal lacrimal gland tissues, and to explore the role of Survivin, Livin and Caspase-3 in the occurrence, development and clinical prognosis of adenoid cystic carcinoma of lacrimal gland. And the effects of Survivin, Livin and Survivin Caspase-3 expression on lacrimal adenoid cystic carcinoma provide a theoretical basis for clarifying the pathogenesis of lacrimal adenoid cystic carcinoma and exploring new therapeutic directions.
Method
1. The expressions of Survivin, Livin and Caspase-3 in lacrimal adenoid cystic carcinoma, pleomorphic adenoma and normal lacrimal gland tissues were detected by RT-PCR, Western blotting and immunohistochemistry. The correlation of gene expression was studied by mathematical algorithm.
2. Human lacrimal adenoid cystic carcinoma ACC-2 cell line was cultured in vitro, cell proliferation was detected by MTT method, cell apoptosis and cell cycle were detected by Annexin V/PI double staining flow cytometry, and the proliferation, apoptosis and Survivin, Livin and Casp of lacrimal adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells were analyzed by immunoblotting. The effect of ase-3 protein expression.
Result
1. Livin and Survivin were low or non-expressed in normal lacrimal gland tissues, high expression in pleomorphic adenoma and lacrimal adenoid cystic carcinoma, and increased with the increase of malignancy. Caspase-3 was high expression in normal lacrimal gland tissues and high expression in pleomorphic adenoma and lacrimal adenoid cystic carcinoma. The degree of malignancy increases and decreases.
2. The expression of Livin and Survivin in lacrimal adenoid cystic carcinoma was negatively correlated with Caspase-3, but there was no correlation between them.
3. Different concentrations of EGB inhibited the proliferation of ACC-2 cells in vitro, and with the increase of EGB concentration, the inhibition was enhanced. The dose-effect relationship was significant (P 0.01). The addition of EGB could gradually increase the Go-G1 phase of ACC-2 cells, decrease the G2-M phase and S phase, and with the increase of dose, ACC-2 cells withered. Different concentrations of EGB inhibited Livin and Survivin genes in ACC-2 cells, and the inhibition increased with the increase of EGB concentration. On the contrary, the relative content of Caspase-3 gene increased gradually with the increase of EGB dosage.
conclusion
1. The pathogenesis of lacrimal adenoid cystic carcinoma may be related to the abnormal expression of Livin and Survivin genes and the down-regulation of Caspase-3 genes. The expression of Caspase-3 and Livin is related to the clinical stage, pathological type and metastasis of lacrimal adenoid cystic carcinoma. Survivin is related to tumor size and metastasis.
2. The expression of Livin and Survivin in lacrimal adenoid cystic carcinoma was negatively correlated with Caspase-3, but there was no correlation between them.
3. Ginkgo biloba extract can inhibit the proliferation of human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells in vitro, promote cell apoptosis, promote the expression of Caspase-3 gene to a certain extent, but inhibit the expression of Livin and Survivin gene to a certain extent, and with the increase of dosage, its promotion or inhibition effect is enhanced.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.7;R285

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本文編號：2204517