發(fā)布時間：2018-08-16 17:32

【摘要】：目的:探討二亞硝基哌嗪(dinitrosopiperazine,DNP)通過調(diào)控?zé)嵝菘说鞍?0-2(heat shock protein70-2,HSP70-2)表達(dá)參與鼻咽癌轉(zhuǎn)移的分子作用機(jī)制。方法:以具有低轉(zhuǎn)移潛能的鼻咽癌細(xì)胞6-10B作為研究材料,應(yīng)用MTT法檢測DNP對6-10B細(xì)胞的非毒性濃度;分別采用間接免疫熒光法、蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時熒光定量-PCR法檢測DNP對6-10B細(xì)胞中HSP70-2表達(dá)的影響;采用特異性針對HSP70-2基因的小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)-HSP70-2沉默HSP70-2的表達(dá),并用Transwell小室法檢測DNP對細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。結(jié)果:DNP對6-10B細(xì)胞的非毒性濃度為0~100μmol/L:DNP(100μmol/L)處理6-10B細(xì)胞后,HSP70-2蛋白表達(dá)明顯上調(diào),且以在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)為主;不同濃度DNP(50和100μmol/L)處理6-10B細(xì)胞后,HSP70-2蛋白的表達(dá)水平呈濃度依賴性(P0.05);DNP(50和100μmol/L)處理組中HSP70-2 mRNA的相對表達(dá)量分別為0.81±0.14和0.81±0.26,同空白對照組的1.04±0.33比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。siRNA-HSP70-2沉默6-10B細(xì)胞中HSP70-2蛋白的表達(dá)可抑制DNP誘導(dǎo)的6-10B細(xì)胞的侵襲及遷移能力。結(jié)論:DNP可能通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制上調(diào)HSP70-2表達(dá),參與鼻咽癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:Aim: to investigate the molecular mechanism of dinitro-opiperazine (DNPs) involved in the metastasis of nasopharyngeal carcinoma (NPC) by regulating the expression of heat shock protein 70-2 (HSP70-2). Methods: the nontoxic concentration of DNP on 6-10B cells was detected by MTT assay, and the indirect immunofluorescence assay was used to detect the nontoxic concentration of 6-10B cells with low metastatic potential. The effect of DNP on the expression of HSP70-2 in 6-10B cells was detected by Western blot and real-time fluorescence quantification-PCR, the expression of HSP70-2 was silenced by small interfering RNA (small interfering RNA-siRNA targeting HSP70-2 gene) -HSP70-2, and the effect of DNP on the invasion and migration of 6-10B cells was detected by Transwell chamber assay. Results the expression of HSP70-2 protein was up-regulated in 6-10B cells treated with 0 渭 mol/L:DNP (100 渭 mol/L) of 0 渭 mol/L, and the expression of HSP70-2 protein was mainly in the cytoplasm of 6-10B cells. The expression level of HSP70-2 protein in 6-10B cells treated with different concentrations of DNP (50 渭 mol/L and 100 渭 mol/L) was in a dose-dependent manner (P0.05). The relative expression of HSP70-2 mRNA was 0.81 鹵0.14 and 0.81 鹵0.26 in the treatment group of 50 渭 mol/L and 100 渭 mol/L, respectively, compared with 1.04 鹵0.33 in the blank control group. There was no significant difference (P0.05). SiRNA-HSP70-2 silenced the expression of HSP70-2 protein in 6-10B cells, which inhibited the invasion and migration of 6-10B cells induced by DNP. Conclusion the expression of HSP70-2 in nasopharyngeal carcinoma cells may be involved in the invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells through the mechanism of posttranscriptional regulation.
【作者單位】： 暨南大學(xué)附屬珠海醫(yī)院;珠海市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:30973400,81071718,81372282) 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(編號:NCET-06-0685)
【分類號】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

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7 田

本文編號：2186685