【摘要】：研究背景:視網(wǎng)膜新生血管(retinal neovascularization, RNV)是一系列缺血缺氧性視網(wǎng)膜疾病的共同病理表現(xiàn),包括:糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)、視網(wǎng)膜靜脈阻塞(retinal vein occlusion, RVO)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(retinopathy of prematurity, ROP)等。由于視網(wǎng)膜缺氧,造成促血管生長(zhǎng)因子如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor , VEGF)表達(dá)量增加,從而促進(jìn)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增生,形成新生血管。目前,對(duì)于此類疾病的藥物治療主要是抑制VEGF從而抑制新生血管的生長(zhǎng),然而促血管生長(zhǎng)因子種類繁多只針對(duì)VEGF的治療效果并不理想。因此非常有必要在促血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的上游尋找更有效的方法來治療視網(wǎng)膜新生血管疾病。 脯氨酸羥化酶2(proline hydroxylase 2, PHD2)是缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factor, HIF)-1a的降解酶,而HIF-1a可以調(diào)節(jié)VEGF、EPO等多種因子的表達(dá)[1,2]。近年來,對(duì)于PHD2的新認(rèn)識(shí)表明抑制其表達(dá)后具有促進(jìn)腫瘤新生血管正�；淖饔肹3,4]。那么其對(duì)于眼部新生血管是否具有抑制作用尚未見報(bào)道。因此,本研究擬通過抑制PHD2,以觀察其對(duì)視網(wǎng)膜新生血管的治療效果。 目的:PHD2對(duì)氧致小鼠視網(wǎng)膜病變(OIR)動(dòng)物模型新生血管形成的影響。 方法:40只7d齡的C57BL/6J幼鼠隨機(jī)分為4組,正常對(duì)照組、高氧組及300mg/kg、500mg/kg PHD2抑制劑處理組。后3組放入動(dòng)物氧艙,在(75±2) %的高氧環(huán)境中連續(xù)飼養(yǎng)5d,正常對(duì)照組于正�？諝猸h(huán)境中飼養(yǎng)。處理組在結(jié)束高濃度給氧后,立即給予腹腔注射不同劑量的PHD2抑制劑(黃芩素),每天1次,連續(xù)5d,高氧組和正常對(duì)照組給予生理鹽水腹腔注射。于出生第17d時(shí)處死小鼠,行Western blot和視網(wǎng)膜鋪片, H-E染色后計(jì)數(shù)突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目,免疫組化檢測(cè)視網(wǎng)膜a-SMA和VEGF蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:Western blot顯示視網(wǎng)膜存在PHD2表達(dá),且高氧組蛋白表達(dá)量明顯高于正常對(duì)照組(P0.05)。視網(wǎng)膜鋪片顯示高氧組中央部視網(wǎng)膜有毛細(xì)血管無灌注區(qū),視網(wǎng)膜新生血管形成,動(dòng)靜脈均迂曲、擴(kuò)張; 300mg/kg及500mg/kg PHD2抑制劑處理組較高氧組明顯改善。突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目,正常對(duì)照組、高氧組、300mg/kg和500mg/kgPHD2處理組分別為0.6±0.84、39.4±5.17、15.8±1.93和6.3±1.57個(gè),組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高氧組最多,正常對(duì)照組最少。免疫組化顯示300mg/kg和500mg/kgPHD2抑制劑處理組a-SMA表達(dá)較高氧組明顯增加;高氧組、300mg/kg及500mg/kgPHD2抑制劑處理組的VEGF表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng), 300mg/kg和500mg/kgPHD2抑制劑處理組與高氧組比較,VEGF表達(dá)量無明顯降低。 結(jié)論:視視網(wǎng)膜存在PHD2表達(dá),抑制其表達(dá)后能有效改善缺氧所致小鼠視網(wǎng)膜血管異常,提示PHD2可能在其發(fā)病機(jī)制中具有一定的作用。
[Abstract]:Background: retinal neovascularization (retinal neovascularization, RNV) is a common pathological feature of a series of ischemic and hypoxic retinopathy, including diabetic retinopathy (diabetic retinopathy, DR), retinal vein occlusion (diabetic retinopathy, DR), retinal vein occlusion (retinal vein occlusion, RVO), retinopathy (retinopathy of prematurity, ROP) in premature infants and so on. Because of retinal hypoxia, the expression of vascular growth factors such as vascular endothelial growth factor (vascular endothelial growth factor, VEGF) is increased, thus promoting the division, proliferation and angiogenesis of retinal vascular endothelial cells. At present, the main drug therapy for these diseases is to inhibit the growth of new blood vessels by inhibiting VEGF. However, the therapeutic effect of many kinds of promoting factors for VEGF is not ideal. Therefore, it is necessary to find a more effective way to treat retinal neovascularization disease upstream of vascular endothelial growth factor. Proline hydroxylase 2 (PHD2) is an anoxic inducible factor (hypoxia-inducible factor, HIF) 1a) degrading enzyme, while HIF-1a can regulate the expression of many factors such as VEGF PHD2. In recent years, new knowledge of PHD2 has shown that inhibiting its expression can promote the normalization of tumor neovascularization. Whether it has inhibitory effect on ocular neovascularization has not been reported. Therefore, the aim of this study was to observe the therapeutic effect of PHD 2 on retinal neovascularization. Objective to investigate the effect of 1: PHD 2 on angiogenesis in (OIR) animal model induced by oxygen. Methods 40 7 day old C57BL/6J rats were randomly divided into 4 groups: normal control group, hyperoxia group and 300mg / kg / kg PHD2 inhibitor group. The latter three groups were fed in (75 鹵2)% hyperoxia environment for 5 days, while the control group was fed in normal air environment. The treatment group was treated with different doses of PHD2 inhibitor (baicalein) once a day for 5 days. The hyperoxia group and the normal control group were intraperitoneally injected with normal saline. On the 17th day of birth, the mice were killed, Western blot and retina preparation were performed, the number of endothelial nuclei breaking through the inner boundary membrane was counted after H-E staining, and the expression of a-SMA and VEGF protein in retina was detected by immunohistochemistry. Results blot showed that there was PHD2 expression in the retina, and the expression of hyperoxia histone was significantly higher than that in the normal control group (P0.05). Retinal smears showed that there was no capillary perfusion area in the central retina of hyperoxia group, retinal neovascularization, arteriovenous detour and dilatation, and 300mg/kg and 500mg/kg PHD2 inhibitor treatment group were significantly improved compared with hyperoxia group. The number of endothelial nuclei breaking through the inner membrane of retina was 0.6 鹵0.84g / kg in normal control group, 39.4 鹵5.17g / kg in hyperoxia group and 6.3 鹵1.57 in 500mg/kgPHD2 treatment group, respectively. There was significant difference between the two groups (P0.05), the hyperoxia group was the most, and the normal control group was the least. Immunohistochemistry showed that a-SMA expression in 300mg/kg and 500mg/kgPHD2 inhibitor groups was significantly higher than that in hyperoxia group. The expression of VEGF in the hyperoxia group (300mg / kg) and in the 500mg/kgPHD2 inhibitor group was significantly higher than that in the normal control group. The expression of VEGF in the 300mg/kg and 500mg/kgPHD2 inhibitor groups was not significantly lower than that in the hyperoxia group. Conclusion: there is PHD2 expression in the retina, which can effectively ameliorate the retinal vascular abnormalities induced by hypoxia, suggesting that PHD2 may play a role in the pathogenesis of retinopathy.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R774.1

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