【摘要】：目的應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制人鼻咽低分化鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞株CNE-2中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá),研究阻斷VEGF基因表達(dá)對鼻咽癌細(xì)胞放射敏感度的影響及機(jī)制。方法構(gòu)建針對VEGF的siRNA真核表達(dá)載體pU-VEGF-siRNA(CNE-2組)、1個陰性對照質(zhì)粒(CNE-2/Neg-siRNA組)、經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至CNE-2細(xì)胞(CNE-2/VEGF-siRNA組),用平板克隆形成實驗檢測在6MV-X線0、2、4、6、8、10 Gy照射后克隆形成能力及通過單擊多靶模型、線性二次模型擬合放射生物學(xué)參數(shù),流式細(xì)胞檢測分析細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的變化,用RT-PCR定量分析三組細(xì)胞中Cyclin D1、Cyclin E、P16和P53的mRNA表達(dá)。結(jié)果經(jīng)6MV-X線0、2、4、6、8、10 Gy照射后細(xì)胞存活率顯著下降,CNE-2/VEGF-siRNA組細(xì)胞經(jīng)D0和2 Gy照射后的存活分?jǐn)?shù)明顯低于CNE-2組、CNE-2/Neg-siRNA組;CNE-2/VEGF-siRNA組中G1/S期細(xì)胞周期阻滯更為明顯。在Cyclin D1、Cyclin E、p16和p53基因中,Cyclin D1mRNA表達(dá)在放療后6、12和24 h進(jìn)行性升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,而其他基因變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義,Western blot檢測顯示Cyclin D1蛋白表達(dá)在放療后24 h明顯升高。結(jié)論下調(diào)VEGF表達(dá)可增加鼻咽癌細(xì)胞的放射敏感度,其機(jī)制可能是通過Cyclin D1信號通路途徑使細(xì)胞周期發(fā)生G1/S期阻滯。
[Abstract]:Objective to inhibit the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in human nasopharyngeal poorly differentiated squamous cell carcinoma cell line CNE-2 by RNA interference, and to study the effect of blocking VEGF gene expression on the radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma cells and its mechanism. Methods the eukaryotic expression vector pU-VEGF-siRNA for VEGF (CNE-2 group) and a negative control plasmid (CNE-2 / Neg-siRNA group) were constructed and transfected into CNE-2 cells (CNE-2 / VEGF-siRNA group) by liposome. The cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry, and the mRNA expression of Cyclin D _ 1 Cyclin E _ (16) and P _ (53) were quantitatively analyzed by RT-PCR. Results the survival rate of CNE-2 / VEGF-siRNA group was significantly lower than that of CNE-2 / Neg-siRNA group after irradiation with D0 and 2 Gy, and the cell cycle arrest of G _ 1 / S phase in CNE-2 / VEGF-siRNA group was significantly lower than that in CNE-2 / Neg-siRNA group. The expression of Cyclin D1 mRNA in the p16 and p53 genes of Cyclin D1 gene increased progressively at 12 and 24 hours after radiotherapy, but there was no significant difference in other gene changes. Western blot analysis showed that the expression of Cyclin D1 protein increased significantly at 24 hours after radiotherapy. Conclusion down-regulation of VEGF expression can increase the radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma cells, and the mechanism may be that the cell cycle is blocked by Cyclin D1 signaling pathway in G _ 1 / S phase.
【作者單位】： 宜昌市第二人民醫(yī)院·腫瘤醫(yī)院;
【分類號】：R739.63

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本文編號：2125741