本文選題：黑色素瘤抗原A + 真核載體�。� 參考：《中國(guó)免疫學(xué)雜志》2014年11期

【摘要】：目的:建立pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質(zhì)粒在小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)的腫瘤細(xì)胞模型。方法:將喉癌來源的黑色素瘤抗原A3(Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3)構(gòu)建成真核質(zhì)粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3,脂質(zhì)體法將pIRES2-EGFP/MAGE-A3轉(zhuǎn)染小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞,G418篩選陽(yáng)性克隆,熒光顯微鏡檢測(cè)陽(yáng)性克隆中增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表達(dá),熒光定量PCR(qRT-PCR)檢查MAGE-A3在B16細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄。結(jié)果:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞后篩選得到陽(yáng)性克隆,可見融合蛋白表達(dá)產(chǎn)生明亮的綠色熒光,qRT-PCR可檢測(cè)到MAGE-A3 mRNA的轉(zhuǎn)錄。結(jié)論:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核質(zhì)粒通過脂質(zhì)體法能有效轉(zhuǎn)染,并在B16穩(wěn)定表達(dá),成功建立了MAGE-A3腫瘤細(xì)胞模型。
[Abstract]:Aim: to establish a tumor cell model with stable expression of pIRES2-EGFP / MAGE-A3 eukaryotic plasmid in murine melanoma B16 cells. Methods: Melanoma-associated antigen A3 (MAGE-A3) was constructed into eukaryotic plasmid pIRES2-EGFPP-MAGE-A3. PIRES2-EGFP / MAGE-A3 was transfected into mouse melanoma B16 cells by liposome method. The expression of enhanced green fluorescent protein (EGFP) in positive clones was detected by fluorescence microscopy, and the transcription of MAGE-A3 in B16 cells was detected by fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR). Results the positive clones were obtained after transfection of the eukaryotic plasmid: pIRES2-EGFP / MAGE-A3 into B16 cells. It was found that the expression of fusion protein produced bright green fluorescence qRT-PCR and the transcription of MAGE-A3 mRNA could be detected by RT-PCR. Conclusion the Eukaryotic plasmid of 1: pIRES2-EGFP / MAGE-A3 can be transfected effectively by liposome method and expressed stably in B16. The MAGE-A3 tumor cell model was successfully established.
【作者單位】： 廣州市第一人民醫(yī)院耳鼻咽喉科;廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究中心;
【基金】：廣州市科技和信息化局社會(huì)發(fā)展應(yīng)用基礎(chǔ)研究專項(xiàng)(No.2013J4100024) 廣東省科技廳產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究與開發(fā)資金計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012B031800340)資助
【分類號(hào)】：R739.65

【參考文獻(xiàn)】

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