本文選題：鼻咽癌 + GnT-V��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：一、研究背景 生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)絕大多數(shù)都是以糖蛋白的形式存在。位于高爾基體內(nèi)的N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶在糖蛋白的合成中起關(guān)鍵作用。N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶至少有6種,其中N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶-V(N-acetylglucosaminyltransferase V, GnT-V)是目前研究最多的。其主要功能是在核心五糖基礎(chǔ)上形成多分支結(jié)構(gòu),將供體底物UDP-N-乙酰氨基葡萄糖(UDP-GlcNAc)中的GlcNAc (Gn)糖基轉(zhuǎn)移至N-聚糖五糖核心的兩個(gè)甘露糖上,催化N-糖鏈的β1,6分支的形成。GnT-V影響腫瘤惡性生物學(xué)行為的機(jī)制有兩種：一是做為糖基轉(zhuǎn)移酶,其異常表達(dá)可引起細(xì)胞糖蛋白β1,6分支結(jié)構(gòu)的異常糖基化,從而影響著腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲能力。二是作為高爾基體酶,可分泌到血液循環(huán)中,這種分泌形式的GnT-V可引起腫瘤血管的生成。目前的研究表明在結(jié)腸癌和乳腺癌中,GnT-V的表達(dá)量和腫瘤的惡性生物學(xué)行為呈正相關(guān)；然而在非小細(xì)胞肺癌中,GnT-V的表達(dá)量越低,腫瘤的惡性程度反而越高。以上的研究表明在不同的腫瘤細(xì)胞中,GnT-V扮演著不同的角色。 鼻咽癌在我國(guó)南方地區(qū)的發(fā)病率極高,嚴(yán)重影響了我國(guó)南方地區(qū)人民的生活質(zhì)量。影響鼻咽癌惡性生物學(xué)行為的因素很多,包括EB病毒的感染,某些分子結(jié)構(gòu)的改變,例如：Bmi-1蛋白,基質(zhì)金屬蛋白酶-19等。約30%-40%的進(jìn)展期鼻咽癌病人會(huì)發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。鼻咽癌分為WHOⅠ,Ⅱ和Ⅲ型,其中97%的病例屬于WHOⅢ型,放射治療是Ⅲ型鼻咽癌的主要治療方式。但是由于個(gè)體差異,并不是所有鼻咽癌細(xì)胞都對(duì)放射治療敏感,有些鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性低,治療效果差。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的和鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性有關(guān)的預(yù)測(cè)分子有Raf激酶抑制蛋白,GRP78蛋白和p53基因等。但是目前為止尚未有一個(gè)公認(rèn)的標(biāo)志性分子能預(yù)測(cè)鼻咽癌細(xì)胞的放射敏感性。 雖然很多研究表明GnT-V和多種腫瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān),但是目前尚未有報(bào)導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞和GnT-V之間關(guān)系的研究。在本實(shí)驗(yàn)中,我們利用RNA干擾技術(shù),下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞CNE-2中GnT-V的表達(dá)量,得到了低表達(dá)GnT-V的細(xì)胞株CNE-2 GnT-V/2224;通過(guò)對(duì)比鼻咽癌細(xì)胞和低表達(dá)GnT-V的鼻咽癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為,研究GnT-V和鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲等生物學(xué)特征的關(guān)系。另外,我們還研究了GnT-V對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的影響,并對(duì)其可能內(nèi)在機(jī)制進(jìn)行了討論。 二、研究目的 利用RNA干擾技術(shù),下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞CNE-2中GnT-V的表達(dá)量,觀察GnT-V對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、放射敏感性的影響,為鼻咽癌分子靶向治療研究中新靶標(biāo)的確定提供客觀依據(jù)。 三、實(shí)驗(yàn)方法 1、pGPU6/GFP/Neo GnT-V shRNA質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定已由本課題組成員完成。pGPU6/GFP/Neo GnT-V/1564和pGPU6/GFP/Neo GnT-V/2224為靶向抑制GnT-V表達(dá)的質(zhì)粒；pGPU6/GFP/Neo GnT-V/NC為對(duì)照質(zhì)粒。 2、細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2在37℃5%C02條件下,培養(yǎng)于含10%新生牛血清的RPMI-1640中,每周傳代2-3次。細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,用脂質(zhì)體Lipofectamine2000TM將質(zhì)粒導(dǎo)入CNE-2細(xì)胞。利用G418篩選轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。 3、pGPU6/GFP/Neo GnT-V shRNA干擾效果檢測(cè) a.qRT-PCR測(cè)定GnT-V mRNA 用Trizol提取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞中總RNA,按實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR試劑盒說(shuō)明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。GnT-Ⅴ上游引物為5'GAGCAGATCCTGGACCTCAG 3',下游引物為5'GCTGTCATGACTCCAGCGTA 3'。β-actin作為內(nèi)參,上游引物為5'GAAACTACCTTCAACTCCATC 3'下游引物為5'CGAGGCCAGGATGGAGCCGCC 3'。合成cDNA的反應(yīng)條件為：15分鐘37℃,5秒85℃。PCR的反應(yīng)條件為：預(yù)變性95℃30秒,PCR反應(yīng)95℃5s,60℃20s(40個(gè)循環(huán)),溶解曲線分析95℃0秒,65℃15秒,95℃0秒。計(jì)算出2-ΔΔCt,代表每組mRNA的相對(duì)表達(dá)量。每組重復(fù)例數(shù)為3。 b.Western blot檢測(cè)GnT-Ⅴ蛋白表達(dá) 提取總蛋白,測(cè)定蛋白濃度,吸取總蛋白,去離子水補(bǔ)至20μL,加入上樣buffer煮沸5min,離心后吸取25μL上樣,經(jīng)不連續(xù)SDS-PAGE電泳分離后,用半干法電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,7%脫脂奶粉+3%的BSA在37℃封閉2h, TBST洗膜后用羊抗人GnT-Ⅴ蛋白多克隆抗體(1：200)、羊抗人GAPDH蛋白單克隆抗體(1：1000)4℃孵育過(guò)夜,洗膜后分別加入HRP標(biāo)記的兔抗羊IgG(1:4000),IgG(1: 6000),室溫下?lián)u動(dòng)1h,洗膜后用ECL化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)檢測(cè),暗室曝光x線片,沖洗膠片,UVI凝膠成像系統(tǒng)攝像,Quantity One軟件分析條帶灰度值,用GnT-Ⅴ/GAPDH代表GnT-Ⅴ蛋白的相對(duì)表達(dá)量。每組重復(fù)例數(shù)為3。 4、CCK-8檢測(cè)下調(diào)GnT-Ⅴ表達(dá)后對(duì)CNE-2細(xì)胞增殖能力的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的待測(cè)細(xì)胞,CCK-8法測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的OD450nm值(0h、24h、48h、72h、96h)。計(jì)算出細(xì)胞生長(zhǎng)分?jǐn)?shù),繪制生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)分為CNE-2組,CNE-2 GnT-Ⅴ/NC組,CNE-2 GnT-Ⅴ/2224組,每組重復(fù)例數(shù)為12。 5、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)GnT-Ⅴ表達(dá)后對(duì)CNE-2細(xì)胞遷移能力的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的待測(cè)細(xì)胞,接種于24孔板,培養(yǎng)至細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng)狀態(tài)。用100ul的槍頭分別在各組單細(xì)胞層上劃痕,用含10% FBS的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)以使劃痕愈合。分別于劃痕后0h、12h、24h拍照,觀察劃痕愈合能力,用愈合率代表愈合能力。愈合率=[(愈合前兩側(cè)細(xì)胞層距離-愈合后兩側(cè)細(xì)胞層距離)/愈合前兩側(cè)細(xì)胞層距離]×100%。實(shí)驗(yàn)分為CNE-2組, CNE-2 GnT-Ⅴ/NC組和CNE-2 GnT-Ⅴ/2224組,每組重復(fù)例數(shù)為3。 6、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)GnT-Ⅴ表達(dá)后對(duì)CNE-2細(xì)胞侵襲能力的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,用無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)過(guò)夜。通過(guò)24孔趨化小室和matrigel膠檢測(cè)細(xì)胞侵襲性。結(jié)果表示為同時(shí)穿過(guò)matrigel膠和聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù),顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)分為CNE-2組,CNE-2 GnT-Ⅴ/NC組和CNE-2 GnT-Ⅴ/2224組,每組重復(fù)例數(shù)為15。 7、異質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)GnT-Ⅴ表達(dá)后對(duì)CNE-2細(xì)胞異質(zhì)粘附能力的影響 以Matrigel膠模仿基底膜進(jìn)行異質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn),Matrigel膠4℃過(guò)夜融化,取96孔板,Matrigel膠50μL/孔鋪板,輕輕搖晃鋪平Marigel膠,37℃1Omin凝固。10g/L BSA (1×PBS配制)煮沸13min變性后,每孔加100μL,37℃封閉1h,封閉結(jié)束后用1×PBS沖洗2次。待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,用無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)過(guò)夜。收集細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5×104/孔,加入細(xì)胞懸液,5%CO2 37℃孵育1h。取出96孔板,1×PBS沖洗,每孔加入100μL RPMI1640和10μLCCK-8,37℃、5%CO2培養(yǎng)1h,測(cè)量?jī)山MOD450nm值。96孔板直接鋪10g/L BSA,不鋪Matrigel膠為對(duì)照組。粘附率=(實(shí)驗(yàn)組OD450nm/對(duì)照組OD450nm-1)%。實(shí)驗(yàn)分為CNE-2組,CNE-2 GnT-Ⅴ/NC組和CNE-2 GnT-Ⅴ/2224組,實(shí)驗(yàn)重復(fù)例數(shù)為16。 8、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察下調(diào)GnT-Ⅴ表達(dá)后對(duì)CNE-2細(xì)胞放射敏感性的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的待測(cè)細(xì)胞倍比稀釋,每個(gè)六孔板接種200個(gè)細(xì)胞,24小時(shí)細(xì)胞貼壁后接受X線照射(0,2,4,6,8Gy)。2周后計(jì)算形成的克隆數(shù),通過(guò)克隆數(shù)計(jì)算出細(xì)胞生存分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)分為CNE-2 GnT-Ⅴ/NC組和CNE-2 GnT-Ⅴ/2224組,每組重復(fù)例數(shù)為16。 9、平行板流動(dòng)腔檢測(cè)下調(diào)GnT-Ⅴ表達(dá)后對(duì)CNE-2與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附能力的影響 流動(dòng)腔的下表面為35mm的培養(yǎng)皿,上表面為聚甲基丙烯酸甲酯制成的平板,上下表面之間用0.2mm的硅膠墊隔開(kāi),形成一個(gè)20mm×2.5mm×0.2mm的腔。流動(dòng)腔還有一個(gè)進(jìn)口和出口,進(jìn)口連接的是裝著細(xì)胞的離心管,出口連接著一個(gè)輸液器泵,能維持穩(wěn)定的流體剪切力。待測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,用0.25%胰酶消化細(xì)胞,離心,重懸,接種于直徑為35mm的培養(yǎng)皿。待細(xì)胞鋪滿80%-90%進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用2%的BSA封閉血管內(nèi)皮細(xì)胞4小時(shí),取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的CNE-2 GnT-V/NC細(xì)胞和CNE-2 GnT-V/2224細(xì)胞,消化、重懸,調(diào)整細(xì)胞的濃度為106/ml。在0.25 dyn/cm2的流體剪切力下,腫瘤細(xì)胞通過(guò)流動(dòng)腔。5分鐘后記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。隨機(jī)挑選5個(gè)視野,計(jì)算和血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附的腫瘤細(xì)胞的數(shù)量。每組重復(fù)例數(shù)為15。 9、檢測(cè)沉默GnT-V表達(dá)后對(duì)CNE-2凋亡和周期的影響 細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后,常規(guī)胰酶消化,收集細(xì)胞。進(jìn)行石蠟包埋。按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行TUNEL實(shí)驗(yàn),檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。呈棕色的為凋亡細(xì)胞,隨機(jī)挑選5個(gè)視野計(jì)算細(xì)胞凋亡率。每組重復(fù)例數(shù)為3。 細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后,常規(guī)胰酶消化,用PBS洗滌細(xì)胞2次,收集105細(xì)胞。在50μL的Binding Buffer中加入5μL 7-AAD染液,混勻。收集細(xì)胞中加入上述7-AAD染液,混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min。反應(yīng)后再加入450μL的Binding Buffer混勻。加入1μLAnnexin V-PE混勻；室溫、避光、反應(yīng)10min。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。每組重復(fù)例數(shù)為3。 細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后,常規(guī)胰酶消化,PBS洗3次,制成單細(xì)胞懸液,并調(diào)整細(xì)胞濃度至106/ml。加入3ml預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞,800rpm×5min,吸凈上清。.加入500ul PBS,輕輕重懸細(xì)胞,使細(xì)胞分離為單個(gè),加入預(yù)冷的75%乙醇(-20℃)。.取出固定的樣品,800 rpm×5min,棄上清。加入3 ml預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞和PI工作液,4℃避光染色30分鐘。轉(zhuǎn)至流式檢測(cè)管,上機(jī)檢測(cè)細(xì)胞周期。每組重復(fù)例數(shù)為3。 10、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果均經(jīng)SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)。qRT-PCR、Western-Blot.侵襲實(shí)驗(yàn)、異質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果多組比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析,多重比較采用LSD法。平行板流動(dòng)腔實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期和凋亡實(shí)驗(yàn)采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),參數(shù)比較均先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),若方差不齊,用基于方差不齊的近似F檢驗(yàn)(Welch法)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)采用析因設(shè)計(jì)的方差分析。由于方差不齊,所以細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每組細(xì)胞內(nèi)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的多重比較采用Dunnett'sT3法；由于方差齊性,所以細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)每組細(xì)胞內(nèi)3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的多重比較和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)每組細(xì)胞內(nèi)多個(gè)劑量的多重比較均采用LSD法。P0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 四、結(jié)果 1、重組質(zhì)粒的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo中含有編碼GFP的基因,故轉(zhuǎn)染細(xì)胞在熒光顯微鏡下可激發(fā)出綠色熒光。在熒光顯微鏡下觀察,細(xì)胞均發(fā)熒光,說(shuō)明穩(wěn)定轉(zhuǎn)染成功。 2、干擾效果分析 通過(guò)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CNE-2,CNE-2 GnT-V/NC,CNE-2 GnT-V/1564和CNE-2 GnT-V/2224四組細(xì)胞株中GnT-VmRNA的表達(dá)量。CNE-2 GnT-V/1564的2-ΔΔCt值為(0.43±0.06),CNE-2 GnT-V/2224的2-ΔΔCt值為(0.33±0.03),表明CNE-2 GnT-V/2224中GnT-V mRNA的表達(dá)量較CNE-2GnT-V/1564少。Western blot結(jié)果也顯示CNE-2 GnT-V/2224中蛋白的表達(dá)量較CNE-2 GnT-V／1564少。選擇干擾效率較高的CNE-2 GnT-V/2224進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。CNE-2 GnT-V/NC中GnT-VmRNA和蛋白的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.GnT-V shRNA對(duì)細(xì)胞增殖的影響 通過(guò)Cck-8法檢測(cè)CNE-2,CNE-2 GnT-V/NC和CNE-2 GnT-V/2224三組細(xì)胞的增殖能力。以細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)(0h、24h、48h、72h、96h)的生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,并計(jì)算出CNE-2 GnT-V/2224的生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)�？梢�(jiàn)CNE-2 GnT-V/2224的生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)較CNE-2 GnT-V/NC低(P0.001)。說(shuō)明下調(diào)GnT-V的表達(dá)后,細(xì)胞的增殖能力明顯降低。 4.GnT-V shRNA對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響 下調(diào)GnT-V的表達(dá)延長(zhǎng)了細(xì)胞劃痕愈合時(shí)間,說(shuō)明下調(diào)GnT-V的表達(dá)后抑制了細(xì)胞的遷移能力。 5.GnT-V shRNA對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響 CNE-2 GnT-V/2224組和CNE-2GnT-V/NC組穿過(guò)Matrigel膠和聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)分別為(58.20±8.53)個(gè)和(127.47±9.22)個(gè)(t=21.361,P0.001)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,下調(diào)GnT-V表達(dá)可以抑制CNE-2細(xì)胞的侵襲能力。 6.GnT-V shRNA對(duì)CNE-2細(xì)胞異質(zhì)粘附能力的影響 CNE-2 GnT-V/2224組和CNE-2GnT-V/NC組的粘附率分別為(35.70±28.27)%和(70.10±14.82)%,說(shuō)明下調(diào)GnT-V表達(dá),可抑制CNE-2細(xì)胞的異質(zhì)粘附能力。 7.GnT-V shRNA對(duì)CNE-2與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附能力的影響 粘附于血管內(nèi)皮細(xì)胞的CNE-2 GnT-V/NC和CNE-2GnT-V/2224的細(xì)胞數(shù)分別為(240.80±29.50)和(57.60±12.85),兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明下調(diào)GnT-V的表達(dá)抑制鼻咽癌細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力。 8.GnT-V shRNA對(duì)CNE-2放射敏感性的影響 CNE-2 GnT-V/2224組的生存分?jǐn)?shù)較CNE-2GnT-V/NC組低,且放射增敏比為1.37,說(shuō)明下調(diào)GnT-V的表達(dá)后細(xì)胞的放射敏感性增高。 9.GnT-V shRNA對(duì)CNE-2細(xì)胞周期和凋亡的影響 利用TUNEL實(shí)驗(yàn)計(jì)算出CNE-2 GnT-V/2224和CNE-2 GnT-V/NC的細(xì)胞凋亡率分別為(35.31±2.61)%和(18.97±1.64)%。通過(guò)流式細(xì)胞儀得出CNE-2 GnT-V/2224和CNE-2 GnT-V/NC的細(xì)胞凋亡率分別為(26.11±2.43)%和(10.80±1.90)％.CNE-2 GnT-V/2224和CNE-2 GnT-V/NC S期比例的細(xì)胞分別為(28.40±0.27)%和(41.60±1.74)％。CNE-2 GnT-V/2224和CNE-2 GnT-V/NC G1期比例分別為(59.93±2.38)%和(43.43±2.90)%。下調(diào)GnT-V的表達(dá)后細(xì)胞的凋亡率增加,細(xì)胞周期從G1期到S期發(fā)生阻滯。 10.Western blot的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CNE-2 GnT-V/2224中bcl-2蛋白的表達(dá)量較CNE-2 GnT-V/NC降低(53.00±3.61)%。且CNE-2 GnT-V/2224和CNE-2 GnT-V/NC兩組細(xì)胞經(jīng)照射后再次檢測(cè)bcl-2蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)：經(jīng)過(guò)照射后CNE-2 GnT-V/2224中bcl-2蛋白的表達(dá)量較放射前降低了(25.33±9.07)%,而CNE-2 GnT-V/NC組中bcl-2蛋白相對(duì)于GAPDH的光密度值在放射前后分別為(80.67±2.52)%和(75.67±6.03)%,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.326,P=0.256)。 CNE-2 GnT-V/2224和CNE-2 GnT-V/NC兩組細(xì)胞中E鈣粘蛋白表達(dá)量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明下調(diào)GnT-V的表達(dá)對(duì)E鈣粘蛋白的表達(dá)量無(wú)影響。 五、結(jié)論 1、靶向GnT-V的shRNA真核表達(dá)質(zhì)�？梢韵抡{(diào)GnT-V的mRNA和蛋白表達(dá)。 2、下調(diào)GnT-V表達(dá)后,CNE-2細(xì)胞的體外增殖、遷移、侵襲能力受到抑制,細(xì)胞凋亡率增加,細(xì)胞周期發(fā)生阻滯。 3、下調(diào)GnT-V表達(dá)后細(xì)胞的放射敏感性增高,可能與bcl-2蛋白的改變有關(guān)。 4、下調(diào)GnT-V表達(dá)對(duì)E鈣粘蛋白的表達(dá)量無(wú)影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 賀富麗;馬強(qiáng);張健;;靶向糖基轉(zhuǎn)移酶shRNA表達(dá)質(zhì)粒對(duì)LoVo細(xì)胞侵襲和增殖能力的抑制作用[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2009年08期

2 王濤,張俊紅,周云峰;放療加誘導(dǎo)化療治療晚期鼻咽癌的臨床觀察[J];腫瘤防治研究;2001年02期

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本文編號(hào)：2000502