本文選題：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤 + 免疫組織化學(xué)　； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：背景：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(retinoblastoma, Rb)是嬰幼兒中最常見的眼內(nèi)惡性腫瘤,雖然目前化學(xué)縮瘤輔助局部治療(經(jīng)瞳孔溫?zé)岑煼═TT、冷凍治療,結(jié)膜下注射卡鉑SCC,表層鞏膜敷貼放療等)的綜合治療方法不僅可以挽救患兒生命,甚至能保留一部分有用視力。但是,仍然存在部分患者接受治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā),甚至轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。一方面,化療耐藥現(xiàn)象仍是困擾眼科醫(yī)生的棘手課題：研究提示Rb內(nèi)部的缺氧現(xiàn)象可能是Rb化療耐藥的原因之一,這些缺氧區(qū)中的腫瘤細(xì)胞由于主要通過糖酵解途徑獲取能量,使它們對普通的化療藥物不敏感,成為化療耐藥和復(fù)發(fā)的潛在原因。另一方面,由于Rb各種治療方法均具有自身的特性,使瘤體不同部位在接受治療的方式和程度上有所不同,故可能出現(xiàn)容易被忽略的治療盲點(diǎn),最終導(dǎo)致復(fù)發(fā)和耐藥現(xiàn)象。因此,通過對腫瘤內(nèi)不同區(qū)域缺氧現(xiàn)象研究,不僅有利于研究Rb耐藥的可能機(jī)制,也有助于揭示綜合治療后局部復(fù)發(fā)的原因,進(jìn)而探索一種綜合治療的最佳模式,達(dá)到優(yōu)化互補(bǔ)、取長補(bǔ)短的目的,并最終提高療效,改善患兒預(yù)后。 第一部分HIF-1α在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的區(qū)域性表達(dá)及其與VEGF、Bax、Ki-67的關(guān)系 目的通過研究缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)在Rb的表達(dá)及分布,以及其與VEGF、Ki-67、Bax的關(guān)系,從而探討Rb中的缺氧現(xiàn)象及特點(diǎn),并嘗試尋找局部治療后仍導(dǎo)致復(fù)發(fā)的潛在原因,為最終指導(dǎo)臨床治療提供理論依據(jù)。 方法采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測HIF-1α、VEGF、Bax、Ki-67在39例(39只眼)Rb石蠟標(biāo)本中的表達(dá)。按照腫瘤區(qū)域分為表面區(qū)、中央?yún)^(qū)、基地部、脈絡(luò)膜區(qū)及子瘤五個區(qū)域,分析以上指標(biāo)的表達(dá)及分布差異。 結(jié)果39例Rb標(biāo)本中,HIF-1α陽性者29例,占74.4%,其中,按整體表達(dá)強(qiáng)度計算,表達(dá)(-)有10例(25.6%),(+)有17例(43.6%),(++)有12例(30.8%)；按區(qū)域計算,表面區(qū)、中央?yún)^(qū)、基地部、脈絡(luò)膜區(qū)及子瘤區(qū)染色陽性者分別占71.0%,36.8%,84.2%,45.4%,82.1%,其分布具有明顯差異(P0.001),在表面區(qū)、基底部及子瘤區(qū)HIF-1α表達(dá)陽性率較高。VEGF、Bax和Ki-67表達(dá)陽性者分別占53.8%,66.7%,59.0%,其中,VEGF和Bax在不同區(qū)域內(nèi)表達(dá)有差異(均為P0.001),Ki-67的陽性率無明顯分布差異(P=0.976)。 整體上,HTF-1α的表達(dá)與VEGF和Bax的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.51,P=0.001和rs=0.32,P=0.046),而與Ki-67的表達(dá)無明顯相關(guān)(P=0.441)。在不同區(qū)域,VEGF和Bax的表達(dá)均與HIF-1α有較好的一致性,而Ki-67與HIF-1α的表達(dá)在不同區(qū)域分布無明顯一致性。 結(jié)論缺氧現(xiàn)象多分布在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤瘤體的邊緣地帶,這可能與腫瘤形成過程中邊緣相對缺乏血管分布有關(guān),這提示化療藥物應(yīng)當(dāng)有足夠的穿透力或者更具靶向性才能徹底殺滅這些細(xì)胞：另一方面,缺氧可能通過誘導(dǎo)凋亡增加,新生血管生成增加,進(jìn)一步耐受缺氧環(huán)境,達(dá)到逃脫化療藥物殺傷的目的,這將對理解并解決視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的耐藥現(xiàn)象有重要的指導(dǎo)意義。 第二部分刀切實(shí)驗排除邊緣效應(yīng) 目的通過刀切實(shí)驗,排除邊緣效應(yīng)及其他人為因素造成的結(jié)果偏差。 方法根據(jù)第一部分結(jié)果,選取HIF-1α染色陽性的標(biāo)本5例(表面區(qū)染色較中央?yún)^(qū)染色深)各三張,其中一張用尖手術(shù)刀片刮除腫瘤游離緣約0.5mm區(qū)域,稱作刀切組；一張不做刀切處理,稱未刀切實(shí)驗組；余下一張作空白對照。在相同條件下重復(fù)HIF-1α染色,觀察結(jié)果 結(jié)果通過刀切實(shí)驗,刀切組新的表面區(qū)與未處理組的腫瘤表面區(qū)相比,HIF-1α的染色在后者明顯比前者更深,且刀切組新的表面區(qū)與二者腫瘤中央?yún)^(qū)的HIF-1α染色結(jié)果基本一致。 結(jié)論通過刀切實(shí)驗、操作中鋪平抗體液、防止干片、隨機(jī)閱片等操作,避免了實(shí)驗過程中邊緣效應(yīng)及其他人為因素造成的結(jié)果偏差,因此該課題結(jié)果的可靠性得到驗證：即在Rb中缺氧現(xiàn)象的分布特征不是實(shí)驗和人為因素造成的,而是由瘤體自身特點(diǎn)決定的。
[Abstract]:Background: retinoblastoma (Rb) is the most common intraocular malignant tumor in infants and children. Although the combined therapy of chemical contraction assisted local treatment (TTT, cryotherapy, subconjunctival injection of carboplatin SCC, surface scleral compress and radiotherapy) can not only save the life of the children, but can even preserve it. There are some useful eyesight. However, there is still a recurrence and even metastasis of some patients after treatment. On the one hand, the phenomenon of chemotherapeutic resistance is still a difficult problem for ophthalmologists: the study suggests that the hypoxia in Rb may be one of the reasons for the resistance of Rb to chemotherapy, and the tumor cells in these anoxic areas are mainly passed through Glycolysis, which makes them insensitive to common chemotherapeutic drugs, is a potential cause of chemotherapeutic resistance and relapse. On the other hand, because Rb has its own characteristics, different parts of the tumor are different in the manner and degree of treatment, so it may be easily ignored in the treatment of blind spots. Therefore, the study of hypoxia in different regions of the tumor is not only conducive to the study of the possible mechanism of Rb resistance, but also helps to reveal the causes of local recurrence after comprehensive treatment, and then explore the best mode of comprehensive treatment to optimize the complementarity, make up for short, and ultimately improve the curative effect. The prognosis of good children.
The first part is the regional expression of HIF-1 alpha in retinoblastoma and its relationship with VEGF, Bax and Ki-67.
Objective to study the expression and distribution of hypoxia inducible factor -1 alpha (hypoxia inducible factor-1 a (HIF-1 a), HIF-1 alpha) in Rb, as well as its relationship with VEGF, Ki-67, Bax, and to explore the phenomenon and characteristics of hypoxia in Rb, and try to find the potential cause of recurrence after local treatment, and provide a theoretical basis for guiding clinical treatment.
Methods immunohistochemical EnVision method was used to detect the expression of HIF-1 alpha, VEGF, Bax, Ki-67 in 39 cases (39 eyes) of Rb paraffin specimens. According to the tumor area, the expression and distribution of the above indexes were analyzed in five regions, central region, base, choroidal area and subtumor.
Results of the 39 Rb specimens, 29 cases were positive for HIF-1 alpha, accounting for 74.4%. Among them, 10 cases (25.6%) were expressed (25.6%), 17 (43.6%) and 12 (30.8%) were expressed (+) in the total expression intensity (+ +). According to the region, the positive staining in the surface area, central area, base, choroidal area and subtumor area accounted for 71%, 36.8%, 84.2%, 45.4%, 82.1%, respectively. The positive rate of HIF-1 alpha expression in the surface area, the basal part and the subtumor region was higher than that of.VEGF, and the positive rates of Bax and Ki-67 were 53.8%, 66.7%, 59% respectively in the surface area, and the positive rates of VEGF and Bax were different in different regions (P0.001), and the positive rate of Ki-67 was not significantly different (P=0.976).
On the whole, the expression of HTF-1 alpha was positively correlated with the expression of VEGF and Bax (rs=0.51, P=0.001 and rs=0.32, P=0.046), but there was no significant correlation with Ki-67 expression (P=0.441). In different regions, the expression of VEGF and Bax was in good agreement with HIF-1 alpha, but there was no obvious consistency in the distribution of the tables in different regions.
Conclusions hypoxia is mostly distributed in the marginal zone of the retinoblastoma, which may be related to the relative lack of blood vessel distribution during the formation of the tumor. This suggests that the chemotherapeutic drugs should have sufficient penetration or more targeted to kill these cells. On the other hand, hypoxia may increase apoptosis by inducing apoptosis. It is important to understand and solve the drug resistance of retinoblastoma by increasing the angiogenesis and further tolerance to the anoxic environment.
The second part cutting experiment excludes the edge effect
Objective to eliminate the margin of effect and other factors caused by other factors through knife cut experiments.
Methods according to the results of the first part, 5 specimens of positive HIF-1 alpha staining were selected (the surface area staining was compared with the deep staining of the central region) in three pieces, one of which was used to scrape the tumor free margin about 0.5mm area, called the knife cutting group, and the other was called the non knife test group, and the remaining one was a blank control. Under the same condition, the rest was weighed under the same condition. Complex HIF-1 alpha staining, observation results
Results compared with the tumor surface area in the untreated group, the new surface area of the knife cut group was much deeper than the former in the tumor surface area of the untreated group. The new surface area of the knife cut group was basically the same as the results of the HIF-1 alpha staining in the two central region of the tumor.
Conclusion through the knife cutting experiment, the antibody liquid was paved in the operation to prevent the dry slice and the random reading of the film. The results were proved to be reliable, that is, the distribution characteristics of the anoxia phenomenon in Rb were not caused by the experiment and human factors, but by the tumor. The character of the body is determined by its own characteristics.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.7

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本文編號：1949857