本文選題：IGF + EGF�。� 參考：《中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)》2014年11期

【摘要】：共培養(yǎng)體系及添加外源性生長(zhǎng)因子是誘導(dǎo)干細(xì)胞向內(nèi)耳樣細(xì)胞分化研究中的常用手段。為了將兩種方法結(jié)合用于研究,該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了一種可同時(shí)表達(dá)三種活化型生長(zhǎng)因子的慢病毒載體�；罨捅砥どL(zhǎng)因子(epidermal growth factor,EGF)編碼序列采用RT-PCR方法從SW620人大腸癌細(xì)胞中克隆,活化型胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2(fi broblast growth factor 2,FGF2)編碼序列為人工合成。用PCR方法分別從p Sec Tag2A和p IRES2-EGFP質(zhì)粒中克隆出引導(dǎo)分泌的免疫球蛋白Igκ鏈信號(hào)肽編碼序列和引導(dǎo)翻譯的內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)序列。將Igκ鏈信號(hào)肽和三種因子的編碼序列分別融合、由IRES間隔并克隆到帶綠熒光蛋白報(bào)告基因的慢病毒表達(dá)質(zhì)粒p LVX-IRES-Zs Green1上并包裝獲得慢病毒。將慢病毒感染HEK293T細(xì)胞,通過(guò)有限稀釋法篩選出穩(wěn)定表達(dá)綠熒光蛋白的單細(xì)胞克隆。用Western blot檢測(cè)單細(xì)胞克隆的IGF1、EGF和FGF2的表達(dá),并通過(guò)促進(jìn)肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了分泌的生長(zhǎng)因子的活性。該研究成功構(gòu)建了導(dǎo)入細(xì)胞后可同時(shí)表達(dá)活化型IGF1、EGF和FGF2的慢病毒載體,為今后設(shè)計(jì)可表達(dá)這三種因子的共培養(yǎng)工程細(xì)胞用于干細(xì)胞誘導(dǎo)分化提供了有力的工具。
[Abstract]:Co-culture system and the addition of exogenous growth factor are common methods in inducing stem cells to differentiate into inner ear like cells. In order to combine the two methods, a lentivirus vector was designed to express three active growth factors simultaneously. The coding sequence of activated epidermal growth factor-1 (EGF1) was cloned from SW620 human colorectal cancer cells by RT-PCR method. The encoding sequence of activated insulin-like growth factor (1(insulin-like growth factor _ 1) and fibroblast growth factor (2(fi broblast growth factor _ (2) FGF2) was artificially synthesized. The coding sequence of Ig 魏 chain signal peptide guided by immunoglobulin was cloned from p Sec Tag2A and p IRES2-EGFP plasmids by PCR method, and the internal ribosome entry site IRESs sequence of internal ribosome entry site guided translation was cloned, respectively. The signal peptide of Ig 魏 chain and the coding sequence of the three factors were fused, and the lentivirus was isolated from IRES and cloned into the lentivirus expression plasmid p LVX-IRES-Zs Green1 with green fluorescent protein reporter gene and packaged to obtain lentivirus. HEK293T cells were infected with lentivirus and single cell clones expressing green fluorescent protein were screened by limited dilution method. The expression of IGF1EGF and FGF2 was detected by Western blot, and the activity of secreted growth factor was verified by promoting the growth of lung cancer A549 cells. In this study, a lentivirus vector expressing both activated IGF1EGF and FGF2 was successfully constructed, which provides a powerful tool for the design of co-cultured engineering cells expressing these three factors for stem cell induction and differentiation.
【作者單位】： 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院耳鼻咽喉科;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院臨床研究中心;
【基金】：浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目(批準(zhǔn)號(hào):2011ZDA012)資助的課題~~
【分類號(hào)】：R764.43

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 賈振宇,伏曉敏,金愛華,曹江;人Leptin基因的cDNA的克隆和表達(dá)[J];生物工程學(xué)報(bào);2003年04期

2 周淑萍;王清明;吳祖澤;;有效引導(dǎo)肝細(xì)胞生成素分泌的外源信號(hào)肽的確定[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年07期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王法祥;彭國(guó)光;王加才;王少君;何卿瑋;;優(yōu)化hα-syn基因疫苗預(yù)防注射對(duì)MPTP急性帕金森病小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年18期

2 葛麗特;盧明;;嗅黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞在神經(jīng)修復(fù)中的研究進(jìn)展[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2014年01期

3 劉建忠;敖敬;田為宇;周衛(wèi);魯禮林;張曉龍;;人肥胖基因大腸桿菌表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)表達(dá)[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

4 彭靜;黃聰;蔣思文;;誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞(iPSCs)的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];科學(xué)通報(bào);2014年09期

5 李鵬;孫鵬;;良性前列腺增生中Caspase的研究進(jìn)展[J];泌尿外科雜志(電子版);2013年02期

6 王弘;梁艷;楊金易;劉細(xì)霞;張宏斌;雷紅濤;沈玉棟;孫遠(yuǎn)明;;抗克倫特羅單鏈抗體表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];生物工程學(xué)報(bào);2008年08期

7 劉蕾,尉亞輝,張儒,荊西剛,郭芝光,朱劍光;花生白藜蘆醇合酶基因cDNA的克隆及植物表達(dá)載體的構(gòu)建[J];生物技術(shù);2005年02期

8 劉佳;李張宇;金思岑;邱曉麗;;人瘦素基因在畢赤酵母中的分泌表達(dá)[J];青島科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年03期

9 Francisco Santaolalla;Carlos Salvador;Agustín Martínez;Jose María Sánchez;Ana Sánchez del Rey;;Inner ear hair cell regeneration A look from the past to the future[J];Neural Regeneration Research;2013年24期

10 張瑩瑩;梁耕田;劉莉;盧嶺;劉金炎;;骨髓神經(jīng)組織定向干細(xì)胞移植修復(fù)聽神經(jīng)損傷模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[J];山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào);2013年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 吳麗紅;范沛;顧為望;施振旦;;瘦素及其受體重組融合蛋白的應(yīng)用概述[A];第九屆中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)年會(huì)（2010新疆）論文集[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 袁雅生;神經(jīng)干細(xì)胞和新生大鼠Corti氏器組織聯(lián)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

2 林穎;體外共培養(yǎng)誘導(dǎo)嗅球神經(jīng)前體細(xì)胞分化為功能性外周神經(jīng)元[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

3 王法祥;優(yōu)化人α-突觸核蛋白核酸疫苗免疫M(jìn)PTP帕金森病小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

4 王鴻涵;非綜合征型遺傳性耳聾家系致病基因定位及鑒定研究[D];中南大學(xué);2013年

5 王恬;Wnt信號(hào)通路在小鼠內(nèi)耳中的表達(dá)及對(duì)具有干/祖細(xì)胞樣細(xì)胞特性的Wnt反應(yīng)細(xì)胞的調(diào)控[D];中南大學(xué);2011年

6 單昕吉;胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和聽囊細(xì)胞體外分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

7 何光耀;樹，

本文編號(hào)：1918235