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色素上皮衍生因子對(duì)氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡及Bcl-2表達(dá)的影響

發(fā)布時(shí)間:2018-05-19 07:40

  本文選題:氧誘導(dǎo)缺血性視網(wǎng)膜病變 + 色素上皮衍生因子; 參考:《眼科新進(jìn)展》2014年06期


【摘要】:目的探討色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)對(duì)氧誘導(dǎo)缺血性視網(wǎng)膜病變(oxygen-induced ischemic retinopathy,OIR)小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡的抑制作用及其可能的機(jī)制。方法選擇7 d齡C57BL/6J小鼠140只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、OIR模型組、PBS治療對(duì)照組和PEDF藥物治療組。選擇右眼為實(shí)驗(yàn)眼,將除正常對(duì)照組外的所有小鼠建立OIR模型。PEDF藥物治療組分別于小鼠12 d齡和14 d齡給予兩次玻璃體內(nèi)注射PEDF(2μg·μL-1)各1μL,PBS治療對(duì)照組玻璃體內(nèi)注射等量的PBS(10 mmol·L-1,pH 7.4)。于17 d齡處死小鼠,各組隨機(jī)抽取5只,摘除右眼球,采用TUNEL法檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況以及免疫熒光染色法檢測(cè)Bcl-2蛋白在小鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)情況;其余小鼠過(guò)量麻醉處死后取出視網(wǎng)膜,采用Western blot檢測(cè)Bcl-2蛋白以及Real-time RT-PCR檢測(cè)bcl-2 mRNA的表達(dá)。結(jié)果視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡主要在RGC層,OIR模型組小鼠RGC層細(xì)胞凋亡率為(55.044±14.538)%,明顯高于正常對(duì)照組的(3.317±1.657)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);PBS治療對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為(55.852±4.490)%,明顯高于PEDF藥物治療組的(5.897±2.079)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);正常對(duì)照組與PEDF藥物治療組細(xì)胞凋亡率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫熒光顯示,OIR模型組與PBS治療對(duì)照組Bcl-2蛋白陽(yáng)性染色較正常對(duì)照組明顯減少,PEDF藥物治療組陽(yáng)性染色較PBS治療對(duì)照組增多。Western blot以及RT-PCR結(jié)果顯示,OIR模型組Bcl-2蛋白和mRNA的表達(dá)量顯著下降,分別為0.386 9±0.071 3和0.694 2±0.235 2,與正常對(duì)照組的0.778 7±0.097 4和1.000 0比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05);PEDF藥物治療組Bcl-2蛋白和mRNA的表達(dá)量分別為0.610 1±0.109 5和0.818 3±0.308 0,與PBS治療對(duì)照組的0.284 8±0.153 6和0.481 0±0.100 8比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05);PEDF藥物治療組Bcl-2蛋白和mRNA的表達(dá)量較正常對(duì)照組低,但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。結(jié)論 OIR可引起視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡,尤其RGC的凋亡;PEDF可抑制凋亡并誘導(dǎo)視網(wǎng)膜Bcl-2表達(dá)上調(diào),提示Bcl-2表達(dá)水平上調(diào)可能是PEDF發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of pigment epithelium-derived factor (PEDF) on oxygen-induced ischemic retinopathy (OIR) apoptosis in retinal ganglion cells (RGCs) of oxygen-induced ischemic retinopathy (OIR) mice and its possible mechanism. Methods one hundred and forty 7 day old C57BL/6J mice were randomly divided into two groups: the normal control group and the PEDF drug treatment group. All the mice except normal control group were treated with intravitreous injection of PEDF(2 渭 g 渭 L -1 at 12 d and 14 d, respectively. The control group was treated with intravitreous injection of PBS(10 mmol L 1 and pH 7.4. The mice were killed at the age of 17 days. Five mice were randomly selected from each group and the right eye ball was removed. The apoptosis of retinal cells was detected by TUNEL and the expression of Bcl-2 protein in the retina of mice was detected by immunofluorescence staining. The other mice were killed under excessive anesthesia. The Bcl-2 protein was detected by Western blot and the expression of bcl-2 mRNA was detected by Real-time RT-PCR. Results the apoptosis rate of retinal cells in the RGC layer OIR group was 55.044 鹵14.538, which was significantly higher than that in the normal control group (3.317 鹵1.657), and the difference was statistically significant (55.852 鹵4.490,55.852 鹵4.490,55.852 鹵4.490,55.852 鹵4.490,55.852 鹵4.490,55.852 鹵4.490,55.852 鹵4.490) respectively. The difference was statistically significant in the treatment group (5.897 鹵2.079g), and the apoptotic rate in the normal control group and the PEDF drug treatment group was higher than that in the control group. The difference was not statistically significant (P 0.05). The positive staining of Bcl-2 protein in the OIR model group and the PBS treatment control group was significantly lower than that in the normal control group. Western blot and RT-PCR showed that the Bcl-2 protein and protein in the PBS model group were significantly lower than those in the PBS control group. The expression of mRNA decreased significantly. They were 0.386 9 鹵0.071 3 and 0.694 2 鹵0.235 2, respectively, compared with 0.778 7 鹵0.097 4 and 1.000 0 in normal control group. The expression of Bcl-2 protein and mRNA were 0.610 1 鹵0.109 5 and 0.818 3 鹵0.308 0 in the drug treatment group, respectively, compared with 0.284 8 鹵0.153 6 and 0.481 0 鹵0.100 8 in the PBS control group. The expression of Bcl-2 protein and mRNA in P0.05PEDF treatment group was lower than that in normal control group, but there was no significant difference (P0.05P 0.05). Conclusion OIR can induce retinal cell apoptosis, especially the apoptosis of RGC can inhibit apoptosis and induce the up-regulation of Bcl-2 expression in retina, suggesting that the up-regulation of Bcl-2 expression may be one of the neuroprotective mechanisms of PEDF.
【作者單位】: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院眼科;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金資助(編號(hào):81170860) 上海市科委自然基金(編號(hào):112R1422000)~~
【分類(lèi)號(hào)】:R774.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):1909268

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