本文選題：β-防御素 + 分泌性中耳炎　； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 第一部分β-防御素在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室的表達(dá) 目的 檢測rBD-1、rBD-2 mRNA在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室粘膜中的表達(dá),初步探討β-防御素在分泌性中耳炎發(fā)病機制中的作用。 方法 排除中耳感染的清潔級SD大鼠48只,隨機分為4組,每組12只。前3組36只行頸部切口經(jīng)右側(cè)聽泡注入脂多糖溶液(lmg/ml)30μL,造模后分別于1、3、7天斷頭取咽鼓管鼓室粘膜；對照組12只大鼠右側(cè)聽泡注入生理鹽水30μL,左側(cè)聽泡作為空白對照組,與造模3天組同時取咽鼓管鼓室粘膜。 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測咽鼓管鼓室粘膜rBD-1、rBD-2在mRNA水平的表達(dá),Image J軟件分析電泳圖并進(jìn)行半定量。 結(jié)果 正常SD大鼠咽鼓管鼓室粘膜存在rBD-1、rBD-2 mRNA的表達(dá),rBD-1 mRNA的相對表達(dá)量較rBD-2 mRNA強(P0.01)。造模后1、3、7天,rBD-1 mRNA表達(dá)變化不明顯,rBD-2 mRNA表達(dá)在造模后1、3天增加明顯(P0.01),第7天漸回復(fù)到正常水平。 結(jié)論 在SD大鼠,rBD-1可能參與正常咽鼓管鼓室的防御功能,造模后rBD-2的表達(dá)增加可能與病原體入侵后的清除相關(guān)。 第二部分TLR-2、TLR-4在分泌性中耳炎小鼠咽鼓管鼓室的表達(dá) 目的 用PAF誘導(dǎo)BALB/c小鼠分泌性中耳炎模型,檢測造模前后TLR-2、TLR-4在咽鼓管鼓室粘膜的表達(dá),探討PAF、TLR與分泌性中耳炎發(fā)病之間的關(guān)系。 方法 SPF級BALB/c小鼠50只,排除中耳感染,隨機分為5組,每組10只。前4組經(jīng)雙側(cè)鼓膜注入PAF 5μL(1μg)制作分泌性中耳炎小鼠模型,造模組8只小鼠分別于1、3、7、10天斷頭取咽鼓管鼓室粘膜；對照組8只小鼠右側(cè)聽泡注入生理鹽水5μL,左側(cè)聽泡作為正常對照組,與造模7天組同時取咽鼓管鼓室粘膜。每組另2只小鼠取聽泡固定并脫鈣后制作冰凍切片,行HE染色觀察造模后組織學(xué)變化。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),蛋白質(zhì)印跡(western-blot)檢測小鼠咽鼓管鼓室粘膜TLR-2、TLR-4的表達(dá)；免疫熒光(冰凍切片)確認(rèn)TLR-2、TLR-4表達(dá)的具體部位。 結(jié)果 PAF 1μg經(jīng)鼓膜注射誘導(dǎo)的BALB/c小鼠分泌性中耳炎,炎癥可持續(xù)10天。正常BALB/c小鼠咽鼓管鼓室粘膜存在TLR-2、TLR-4 mRNA的表達(dá),兩者相對表達(dá)量比較差異不顯著；PAF誘導(dǎo)后兩者表達(dá)均增強,造模前后的表達(dá)差異有顯著性(P0.01);western-blot證實炎癥粘膜中TLR-2、TLR-4在蛋白水平的表達(dá)高于正常粘膜(P0.01)；免疫熒光顯示TLR-2、TLR-4廣泛表達(dá)于鼓室粘膜,在炎癥鼓室粘膜中表達(dá)有增強(P0.01),咽鼓管粘膜中主要為TLR-2綠色熒光,鼓膜及中耳腔炎癥細(xì)胞表面主要為TLR-4紅色熒光。 結(jié)論 PAF在中耳粘膜誘導(dǎo)TLR-2、TLR-4表達(dá)上調(diào),PAF誘導(dǎo)的分泌性中耳炎小鼠模型可用以進(jìn)一步研究PAF、TLR在分泌性中耳炎發(fā)病中的具體作用及相互聯(lián)系。
[Abstract]:Part I expression of 尾 -defensin in eustachian tympanum of rats with secretory otitis media Purpose To investigate the role of 尾 -defensin in the pathogenesis of secretory otitis media by detecting the expression of rBD-1rBD-2 mRNA in the tympanic mucosa of eustachian tube in rats with secretory otitis media. Method Forty-eight clean SD rats excluding middle ear infection were randomly divided into 4 groups with 12 rats in each group. In the first three groups, 36 rats were injected with lipopolysaccharide (LPS) solution through right auditory bubble through the neck incision, and 30 渭 L of lipopolysaccharide solution was injected into the right auditory bubble. The mucosa of eustachian tube tympanum was cut off at 1, 3 and 7 days after modeling, while the right auditory bubble of 12 rats in the control group was injected with normal saline 30 渭 L, and the left auditory bubble was taken as the blank control group. The mucosa of tympanic cavity of eustachian tube was taken at the same time as the model group for 3 days. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the expression of rBD-1 and rBD-2 in eustachian tube tympanic mucosa at mRNA level. Result The expression of rBD-1rBD-2 mRNA in eustachian tube tympanic mucosa of SD rats was stronger than that of rBD-2 mRNA. The expression of rBD-1 mRNA did not change significantly on the 7th day after modeling. The expression of rBD-2 mRNA increased significantly on the 1st and 3rd day after modeling, and gradually returned to the normal level on the 7th day. Conclusion In SD rats, rBD-1 may be involved in the defense function of normal eustachian tube tympanum, and the increased expression of rBD-2 after modeling may be related to the clearance of pathogens after invasion. Part II expression of TLR-2TLR-4 in eustachian tube tympanum of mice with secretory otitis media Purpose A model of secretory otitis media in BALB/c mice induced by PAF was used to detect the expression of TLR-2 and TLR-4 in the tympanic mucosa of eustachian tube before and after the establishment of the model, and to explore the relationship between the expression of TLR-4 and the pathogenesis of secretory otitis media. Method SPF grade BALB/c mice were randomly divided into 5 groups with 10 rats in each group. The model of secretory otitis media was established in the first four groups by injecting PAF 5 渭 L 1 渭 g through bilateral tympanic membrane. The mucous membrane of the tympanic cavity of the eustachian tube was taken from 8 mice in the model group after 10 days. 8 mice in the control group were injected with normal saline 5 渭 L on the right side, and the mucosa of the tympanic cavity of the eustachian tube was taken from the left auditory bubble as the control group and the model group for 7 days. The other 2 mice in each group were fixed with auditory vesicles and decalcified to make frozen sections. The histological changes were observed by HE staining. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot (Western blot) were used to detect the expression of TLR-2 and TLR-4 in mouse eustachian tube tympanic mucosa, and the specific site of TLR-2TLR-4 expression was confirmed by immunofluorescence (frozen section). Result PAF 1 渭 g was injected into tympanic membrane to induce secretory otitis media in BALB/c mice. The inflammation lasted for 10 days. The expression of TLR-2 and TLR-4 mRNA in eustachian tympanic mucosa of normal BALB/c mice was not significantly different. The expression of TLR-2 and TLR-4 in inflammatory mucosa was higher than that in normal mucosa (P 0.01), and immunofluorescence showed that TLR-2 and TLR-4 were widely expressed in tympanic mucosa. In the mucosa of the inflammatory tympanum, the expression of P0.01G was enhanced, the green fluorescence of TLR-2 was mainly found in the mucosa of eustachian tube, and the TLR-4 red fluorescence was mainly found on the surface of the tympanic membrane and middle ear cavity. Conclusion The mouse model of secretory otitis media induced by PAF up-regulated the expression of TLR-2 and TLR-4 in middle ear mucosa could be used to further study the specific role and relationship of PAF-TLR in the pathogenesis of secretory otitis media.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R764

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本文編號：1864541