本文選題：短發(fā)夾樣RNA + Survivin基因　； 參考：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2014年02期

【摘要】：為了構(gòu)建具有干擾效應(yīng)的靶向Survivin和CDK1基因及兩者串聯(lián)的短發(fā)夾樣RNA(short hairpin RNA,shRNA)表達(dá)載體,并研究其靶向干擾對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-2生物學(xué)行為的改變。本研究通過構(gòu)建pU6-SurvivinshRNA、pU6-CDK1shRNA和pU6-SurvivinshRNA-CDK1shRNA重組載體,用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000法將其轉(zhuǎn)染入CNE-2細(xì)胞株中,應(yīng)用RT-PCR方法初步篩選具有干擾效應(yīng)的重組載體,逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)Survivin、CDK1 mRNA的基因表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)Survivin和CDK1蛋白表達(dá)以及噻唑藍(lán)溴化四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)檢測(cè)癌細(xì)胞增殖活性的變化。結(jié)果表明:成功構(gòu)建具有干擾效應(yīng)的shRNAs表達(dá)載體;聯(lián)合或單基因Survivin、CDK1的shRNAs表達(dá)載體干擾CNE-2細(xì)胞后,其對(duì)應(yīng)的mRNA和目的蛋白表達(dá)均降低,CNE-2癌細(xì)胞增殖活性降低,聯(lián)合基因shRNAs表達(dá)載體具有一定程度的干擾增強(qiáng)作用。
[Abstract]:In order to construct the expression vector of targeted Survivin and CDK1 genes and short hairpin RNA-like shRNAs with interference effect, and to study the effect of targeting interference on the biological behavior of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE-2. In this study, pU6-survivin RNA-pU6-CDK1shRNA and pU6-SurvivinshRNA-CDK1shRNA recombinant vector were constructed and transfected into CNE-2 cell line by liposome Lipofectamine 2000 method. The interfering recombinant vector was screened by RT-PCR method. The expression level of survivin CDK1 mRNA gene was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of Survivin and CDK1 protein was detected by Western blot, and the proliferative activity of cancer cells was detected by methyl thiazolyl tetrazoliumium (MTT). The results showed that the shRNAs expression vector with interference effect was successfully constructed, and the expression of mRNA and target protein decreased after shRNAs expression vector combined with or single gene survivin CDK1 interfered with CNE-2 cells. The co-gene shRNAs expression vector has a certain degree of interference enhancement.
【作者單位】： 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院;南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心;海南省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81060223)資助
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張帥;肖健云;謝常寧;劉勇;王承龍;田勇泉;;Survivin基因沉默對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞株惡性表型的影響[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2011年06期

2 蔡明;王國(guó)斌;陶凱雄;蔡昌學(xué);;Livin基因和Survivin基因聯(lián)合靶向siRNA抑制大腸癌細(xì)胞增殖的作用[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2009年07期

3 劉黎明;陳昌杰;陳正徐;胡博;段光軍;胡華成;;可溶性FasL聯(lián)合survivin RNA干擾誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡[J];腫瘤;2007年08期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 沈晗;吳少波;張百芳;彭芳芳;武棟成;;Cdk5及p35在NGF撤退誘導(dǎo)的已分化PC12細(xì)胞凋亡中的作用研究[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2012年04期

2 王棟;錢有輝;;凋亡抑制蛋白livin的研究進(jìn)展[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2011年11期

3 陳斌;顧蔚卿;倪健;;雷帕霉素聯(lián)合缺氧誘導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制[J];腫瘤;2010年04期

4 黃新義;鄭家法;;凋亡抑制蛋白survivin和livin在頭頸腫瘤中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2013年04期

5 何清泉;張冬林;吳肖仙;張建國(guó);;Survivin、Bcl-2、Pml的基因表達(dá)及其與鼻咽癌臨床分期及預(yù)后的關(guān)系[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2013年16期

6 李倩倩;李友;趙斌;;去整合素-金屬蛋白酶17與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中華腦科疾病與康復(fù)雜志(電子版);2013年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 王書俠;分化抑制因子3對(duì)順鉑耐藥株A549/DDP細(xì)胞凋亡和順鉑敏感性影響的研究[D];江蘇大學(xué);2009年

2 楊敬敬;RNA干擾抑制Survivin基因?qū)θ烁伟〩epG2細(xì)胞增殖的影響[D];青島大學(xué);2009年

3 孫瑤;RNA干擾survivin基因?qū)epG2細(xì)胞凋亡及化療的影響[D];青島大學(xué);2010年

4 黃新義;siRNA沉默Survivin對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2的影響[D];南華大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 張帥;肖健云;趙素萍;田勇泉;邱元正;王承龍;;紫杉醇對(duì)低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2生長(zhǎng)凋亡的影響及Survivin mRNA的表達(dá)變化[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

2 謝彤;李力;茅乃權(quán);黎丹戎;劉德森;左傳田;黃鼎銘;;人肺腺癌A549細(xì)胞系SP細(xì)胞亞群生物學(xué)特性的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];中華腫瘤防治雜志;2010年10期

3 張帥,肖健云,田勇泉,趙素萍,邱元正,王承龍;凋亡抑制基因Survivin mRNA在鼻咽癌中的表達(dá)及其臨床意義[J];中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志;2004年01期

4 張帥,肖健云,田勇泉,趙素萍,邱元正,王承龍;凋亡抑制基因Survivin與鼻咽癌預(yù)后關(guān)系的研究[J];中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志;2004年04期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 閔玲,周克元,張?jiān)嘛w,梁統(tǒng);鼻咽癌細(xì)胞中Survivin基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[J];腫瘤防治雜志;2003年07期

2 吳冬梅;楊榮寧;;莪術(shù)油對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的凋亡及放療增敏機(jī)制的影響[J];腫瘤防治研究;2008年11期

3 李福年,袁繼炎,秦憲斌,傅廷亮,王興華;神經(jīng)母細(xì)胞瘤Survivin基因表達(dá)和細(xì)胞凋亡的研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2002年04期

4 姚峰,陶琳,陳倩,黎輝,劉銘球;凋亡抑制基因Survivin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與Caspase-3、Bcl-2蛋白表達(dá)的關(guān)系[J];中國(guó)癌癥雜志;2004年02期

5 高大新,張海燕,呂剛,黃濤,孟輝,楊向紅;骨肉瘤組織中survivin與VEGF的表達(dá)及相關(guān)關(guān)系的研究(英文)[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2005年02期

6 項(xiàng)丞,劉偉松,賈深汕;Survivin基因在喉癌中的表達(dá)及意義[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2005年03期

7 李平,李兆申,張z，

本文編號(hào)：1858093