本文選題：短發(fā)夾樣RNA + Survivin基因　； 參考：《基因組學與應用生物學》2014年02期

【摘要】：為了構建具有干擾效應的靶向Survivin和CDK1基因及兩者串聯(lián)的短發(fā)夾樣RNA(short hairpin RNA,shRNA)表達載體,并研究其靶向干擾對鼻咽癌細胞CNE-2生物學行為的改變。本研究通過構建pU6-SurvivinshRNA、pU6-CDK1shRNA和pU6-SurvivinshRNA-CDK1shRNA重組載體,用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000法將其轉染入CNE-2細胞株中,應用RT-PCR方法初步篩選具有干擾效應的重組載體,逆轉錄實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測Survivin、CDK1 mRNA的基因表達水平,Western blot檢測Survivin和CDK1蛋白表達以及噻唑藍溴化四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)檢測癌細胞增殖活性的變化。結果表明:成功構建具有干擾效應的shRNAs表達載體;聯(lián)合或單基因Survivin、CDK1的shRNAs表達載體干擾CNE-2細胞后,其對應的mRNA和目的蛋白表達均降低,CNE-2癌細胞增殖活性降低,聯(lián)合基因shRNAs表達載體具有一定程度的干擾增強作用。
[Abstract]:In order to construct the expression vector of targeted Survivin and CDK1 genes and short hairpin RNA-like shRNAs with interference effect, and to study the effect of targeting interference on the biological behavior of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE-2. In this study, pU6-survivin RNA-pU6-CDK1shRNA and pU6-SurvivinshRNA-CDK1shRNA recombinant vector were constructed and transfected into CNE-2 cell line by liposome Lipofectamine 2000 method. The interfering recombinant vector was screened by RT-PCR method. The expression level of survivin CDK1 mRNA gene was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of Survivin and CDK1 protein was detected by Western blot, and the proliferative activity of cancer cells was detected by methyl thiazolyl tetrazoliumium (MTT). The results showed that the shRNAs expression vector with interference effect was successfully constructed, and the expression of mRNA and target protein decreased after shRNAs expression vector combined with or single gene survivin CDK1 interfered with CNE-2 cells. The co-gene shRNAs expression vector has a certain degree of interference enhancement.
【作者單位】： 海南大學農(nóng)學院;南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院醫(yī)學檢驗中心;海南省人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗中心;
【基金】：國家自然科學基金項目(81060223)資助
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

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本文編號：1858093