本文選題：TLRs + TLR2��； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2014年博士論文

【摘要】：研究背景：葡萄膜炎是一類常見又重要的致盲性眼病，在我國約有300-500萬患者，其中有相當一部分為不可治盲。臨床上多發(fā)于青壯年，多反復發(fā)作、治療棘手，常伴有全身自身免疫性疾病或者炎癥性疾病，被認為是眼科的頑疾，但該類疾病發(fā)病機制復雜，尚未得到充分闡明。TLR家族屬于能識別病原體引發(fā)的大分子的模式識別受體，在固有免疫中起關(guān)鍵性的作用。不同種類的淋巴細胞及其它一些細胞可以表達TLR，這些受體位于細胞表面或細胞壁內(nèi)。目前的研究發(fā)現(xiàn)人類有10種不同類型的TLR（TLR1-TLR10）,這些受體能分別被它們對應的配體識別并激活。研究發(fā)現(xiàn)TLR2,4,7,8,9通過不同的通路參與了一些自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展的過程。也有文獻報道了發(fā)現(xiàn)TLR基因多態(tài)或拷貝數(shù)變異和一些自身免疫性疾病的易感性之間存在聯(lián)系。基于以上研究發(fā)現(xiàn)的TLR在多種自身免疫性疾病發(fā)生過程中所起的重要作用這一背景，我們進行了以下兩個方面的研究：1.探討Toll樣受體的基因多態(tài)與中國漢族的葡萄膜炎疾�。ò˙eh et病、VKH綜合征、急性前葡萄膜炎伴或不伴強直性脊柱炎）是否存在聯(lián)系。2.探討Toll樣受體的拷貝數(shù)變異與中國漢族的葡萄膜炎疾病（包括Beh et病、VKH綜合征、急性前葡萄膜炎伴或不伴強直性脊柱炎）是否存在聯(lián)系。通過這些研究，以期對這些葡萄膜炎的發(fā)病基因易感性有更深入的認識，并為防治提供新研究靶點和策略。 第一部分Toll樣受體（TLR）基因多態(tài)與葡萄膜炎遺傳易感性研究 目的：TLR2，TLR4，TLR8和TLR9被報道和好幾個自身免疫性疾病有關(guān)系。本實驗探討了這些TLR基因多態(tài)和中國漢族人群Beh et病、VKH綜合征及急性前葡萄膜炎伴或不伴強直性脊柱炎（AAU+AS±）遺傳易感性是否有相關(guān)性。 方法：基因分型采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法。第一階段包括眼部Beh et病患者400例、VKH綜合征400例、AAU+AS±400例和健康對照600例。第二階段包括438例眼部Beh et病患者和1000例正常人對照。使用卡方檢驗比較患者和對照組的等位基因和基因型的頻率。利用實時熒光定量PCR從正常人外周血單核細胞（PBMC）中檢測mRNA的表達。并利用ELISA檢測正常人外周血單核細胞培養(yǎng)上清中TNF-α,IL-6,IL-10,和IL-1β的水平。 結(jié)果：在第一階段，僅有rs2289318/TLR2的CC基因型和C等位基因及rs3804099/TLR2的CT基因型頻率，在眼部Beh et病患者和對照組之間存在統(tǒng)計學差異（分別為Pc=0.048,Pc=0.008和Pc=0.005）。在第二階段和兩階段總計階段確認了這一聯(lián)系（分別為Pc=0.001，Pc=6.89E-06，，Pc=2.426E-06）。攜帶rs2289318的CC型及rs3804099的 TT型的正常人，其PBMC經(jīng)肽聚糖（PGN）刺激后，TLR2的mRNA表達分別高于該單核苷酸多態(tài)性位點（SNP）其它的基因型（分別為Pc=0.028，Pc=0.004）。TLR2的這兩個SNP的不同基因型在培養(yǎng)上清中TNF-α,IL-6,IL-10,和IL-1β的表達水平方面沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：本研究提供了證據(jù)證明TLR2基因多態(tài)與眼部Beh et病的發(fā)病風險顯著相關(guān)。 第二部分Toll樣受體基因拷貝數(shù)變異與葡萄膜炎遺傳易感性研究 目的：TLR被報道參與了多個自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。本研究探討了在患Beh et病、VKH綜合征及急性前葡萄膜炎伴或不伴強直性脊柱炎（AAU+AS±）中國漢族人群中，TLR1-10的基因拷貝數(shù)變異是否與遺傳易感性有關(guān)系。 方法：利用實時熒光定量PCR檢測TLR的基因拷貝數(shù)。實驗分成2個階段，第一階段包括眼部Beh et病患者400例、VKH綜合征400例、AAU+AS±400例和健康對照600例。第二階段包括眼部Beh et病578例和正常人對照1000例。使用卡方檢驗比較患者和對照組的拷貝數(shù)頻率。利用實時熒光定量PCR，檢測TLR7不同拷貝數(shù)的正常人外周血單核細胞（PBMC）中mRNA的表達。利用ELISA檢測TLR7不同拷貝數(shù)的正常人外周血單核細胞培養(yǎng)上清中TNF-α, IL-6,和IL-1β的水平。 結(jié)果：在第一階段，發(fā)現(xiàn)TLR7的基因拷貝數(shù)頻率，在拷貝數(shù)大于1的眼部Beh et病男性患者和男性對照組之間存在統(tǒng)計學差異,拷貝數(shù)大于2的眼部Beh et病女性患者和女性對照組之間也存在統(tǒng)計學差異（分別為Pc=0.021, OR=2.452,95%CI=1.440to4.176; Pc=0.048,OR=2.620,95%CI=1.406to4.882）。在第二階段和兩階段混合后均確認了這一聯(lián)系（分別為pc=1.14E-06, OR=2.324,95%CI1.680to3.215;Pc=9.12E-05, OR=2.492,95%CI=1.603to3.873）。攜帶拷貝數(shù)大于1的正常男性或大于2的正常女性，其PBMC經(jīng)TLR7特異性配體R848刺激后，TLR7的mRNA表達分別高于其它拷貝數(shù)的正常男性或女性（分別為Pc=0.021，Pc=0.006）。無論男性或女性TLR7的不同拷貝數(shù)在培養(yǎng)上清中TNF-α,IL-6,和IL-1β的水平方面沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：本研究提供了證據(jù)證明TLR7基因拷貝數(shù)變異與眼部Beh et病的發(fā)病風險顯著相關(guān)。
[Abstract]:TLR2 , 4 , 7 , 8 and 9 have been implicated in the pathogenesis of autoimmune diseases .

Study on the Genetic Susceptibility of Toll - like Receptor ( TLR ) Gene in the First Part

Objective : TLR2 , TLR8 and TLR9 were reported to be related to several autoimmune diseases . These TLR polymorphisms and Beh et ' s disease , VKH syndrome ( VKH ) syndrome and acute preveitis with or without ankylosing spondylitis ( AAU + AS 鹵 ) were investigated .

Methods : Polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism ( PCR - RFLP ) method was used in the first stage , including 400 patients with Beh et ' s disease , 400 cases of VKH syndrome , AAU + AS 鹵 400 cases and healthy control 600 cases . The second stage consisted of 438 cases of ocular Beh et patients and 1000 healthy controls .

Results : In the first stage , only rs2289318 / TLR2 CC genotype and genotype C allele and rs3804099 / TLR2 were significantly different ( Pc = 0.048 , Pc = 0.008 and Pc = 0.005 , respectively ) . This contact ( Pc = 0.001 , Pc = 6.89E - 06 , Pc = 2.426E - 06 , respectively ) was confirmed during the second and two - stage totals . CC type with rs2289318 and rs3804099

After stimulated with peptidoglycan ( PGN ) , the mRNA expression of TLR2 was higher than that of the single nucleotide polymorphism site ( SNP ) ( Pc = 0.028 , Pc = 0.004 ) . There was no statistically significant difference in the levels of TNF - . alpha . , IL - 6 , IL - 10 , and IL - 1尾 in the culture supernatant of the two SNPs of TLR2 .

Conclusion : This study provides evidence that TLR2 gene polymorphism is significantly associated with the onset of ocular Beh et disease .

Study on the copy number variation of Toll - like receptor gene in the second part and the genetic susceptibility of diveitis

Objective : TLR was reported to be involved in the development and development of multiple autoimmune diseases . The genetic copy number variation of TLR1 - 10 in Chinese Han population with Beh et ' s disease , VKH syndrome and acute preveitis with or without ankylosing spondylitis ( AAU + AS 鹵 ) was investigated .

Methods : The gene copy number of TLR was detected by real - time fluorescence quantitative PCR . The experiment was divided into 2 stages . The first stage consisted of 400 cases of Beh et ' s disease in eyes , 400 cases of VKH syndrome , AAU + AS 鹵 400 cases and healthy control 600 cases . The second stage consisted of 578 cases of Beh et ' s disease and 1000 healthy controls . The expression of mRNA in peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) was detected by means of real - time fluorescence quantitative PCR . The levels of TNF - 偽 , IL - 6 , and IL - 1尾 in peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) were detected by ELISA .

Results : In the first stage , the gene copy number frequency of TLR7 was found , there was statistical difference between the male patients with Beh et disease and the male control group with the copy number greater than 1 . There was also statistical difference between the female patients with Beh et ' s disease and the female control group ( Pc = 0.021 , OR = 2.452 , 95 % CI = 1.4404.176 ; Pc = 0.048 , OR = 2.620 , 95 % CI = 1.406374.882 ) . This contact was confirmed after the second and two stages ( pc = 1.14e - 06 , OR = 2.324 , 95 % CI 1.680 to3.215 ; Pc = 9.12 - 05 , OR = 2.492 , 95 % CI = 1.603to3.873 ) . After stimulation with TLR7 specific ligand R848 , the mRNA expression of TLR7 was higher than that of normal male or female ( Pc = 0.021 , Pc = 0.006 ) . No statistical difference was found in the levels of TNF - . alpha . , IL - 6 , and IL - 1尾 in the culture supernatant , regardless of the number of copies of the male or female TLR7 .

Conclusion : This study provides evidence that the variation of TLR7 gene copy number is associated with the risk of ocular Beh et disease .

【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R773.9

【共引文獻】

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本文編號：1844100