本文選題：角膜上皮 + 煙曲霉菌��； 參考：《青島大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：研究表面活性蛋白A、D(surfactant protein A and D,SP-A、SP-D)在煙曲霉菌(Aspergil lus fumigatus,A. fumigatus,AF)性角膜炎早期固有免疫應(yīng)答階段的表達變化和AF感染永生化人角膜上皮細胞(tolerated human corneal epithelial, THCEs)炎癥反應(yīng)中SP-A、SP-D的作用。 方法：體外培養(yǎng)THCEs,自制煙曲霉菌孢子抗原刺激液,不同時間點0.5h、1h、2h、4h、6h和8h刺激各組THCEs(n=6)。以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reversed-transcript PCR, RT-PCR)檢測THCEs中SP-A、SP-D mRNA的表達；以ELISA檢測THCEs培養(yǎng)液上清中SP-A、SP-D的蛋白質(zhì)表達水平、NF-kB的活化情況及下游Thl型細胞因子TNF-a、IL-1β和Th2型細胞因子IL-8、IL-10的變化。免疫細胞化學(xué)法檢測THCEs中SP-A、SP-D的表達部位和表達強弱情況。 結(jié)果：正常THCEs中有SP-A、SP-D mRNA和蛋白質(zhì)的微量表達。煙曲霉菌孢子抗原以時間依賴方式促進THCEs中SP-A、SP-D的表達及細胞因子的分泌。(1)給予煙曲霉菌孢子抗原刺激0.5h后,SP-A、SP-D mRNA表達水平開始升高,分別為正常細胞組(對照組)的1.29倍和1.02倍(P0.01); SP-A、SP-D mRNA表達水平2h達最高峰,分別為對照組的3.00倍和1.57倍(P0.01)。(2)細胞上清SP-A、SP-D蛋白表達量在給予煙曲霉菌孢子抗原刺激0.5h后增多,分別為對照組的1.05倍和0.91倍(P0.01),2h表達量最多,分別為對照組的1.48倍和1.92倍(P0.01)。煙曲霉菌孢子抗原刺激后,NF-kB活化,并與SP-A、SP-D表達量呈負相關(guān)。煙曲霉菌孢子抗原刺激THCEs 1h組TNF-a、IL-1β表達開始增多,分別為對照組的1.82倍、1.43倍(P0.05),刺激2h組表達量達最高峰,分別為對照組的2.80倍、2.86倍(P0.01)。IL-8、IL-10在煙曲霉菌孢子抗原刺激1h組表達量開始升高,分別為對照組的1.12倍、1.28倍(P0.05),表達量呈時間依賴方式逐漸升高。(3)免疫細胞化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),正常THCEs胞漿中有SP-A、SP-D的弱陽性表達,給予煙曲霉菌孢子抗原刺激0.5h開始陽性表達呈時間依賴性逐漸增強。 結(jié)論：1、在煙曲霉菌感染早期階段,SP-A和SP-D參與了THCEs對煙曲霉菌孢子抗原的識別。2、SP-A、SP-D在真菌性角膜炎固有免疫早期階段發(fā)揮重要保護性作用,他們與炎性因子、免疫細胞共同構(gòu)成了角膜抵御真菌的免疫防線。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression of surface-active protein A and DX SP-AP-D in the early stage of innate immune response to Aspergil lus fumigatus. AFA) and the role of SP-AP-D in the inflammatory response of human corneal epithelial cells infected with AF to immortalized human corneal epithelial cells (human corneal epithelial, THCEs). Methods: the expression of SP-AP-D in the early stage of chronic keratitis induced by Aspergil lus fumigatusa (Afumigatusa) and the role of SP-AP-D in the inflammatory response of human corneal epithelial cells infected with AF were studied. Methods: THCs were cultured in vitro and stimulated by Aspergillus fumigatus spore antigen at different time points of 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h and 8 h, respectively. Reverse transcriptase chain reaction (RT PCR) was used to detect the expression of SP-An SP-D mRNA in THCEs, and ELISA was used to detect the protein expression level of SP-An SP-D in the supernatant of THCEs. The activation of NF-kB and the changes of the downstream Thl cytokines TNF-a IL-1 尾 and Th2 type IL-8 IL-10 were detected. Immunocytochemistry was used to detect the expression of SP-An SP-D in THCEs. Results: SP-An SP-D mRNA and protein were expressed in normal THCEs. Aspergillus fumigatus spore antigen promoted the expression of SP-An SP-D and cytokine secretion in THCEs in a time-dependent manner. The expression level of SP-An SP-D mRNA began to increase after stimulation with Aspergillus fumigatus spore antigen for 0.5 h. The expression level of SP-AP-D mRNA reached its highest level at 2h, which was 3.00 and 1.57 times of that of the control group, respectively. The expression of SP-AnSP-D protein in the supernatant of Aspergillus fumigatus was increased after 0.5 h of stimulation with Aspergillus fumigatus spores antigen, and the expression of SP-AmSP-D protein in the supernatant of the control group was 1.29 times and 1.02 times as much as that of the control group, respectively. It was 1.05 times and 0.91 times as much as that of the control group for 2 hours, and 1.48 times and 1.92 times of the control group, respectively, and the expression of P0.01C was 1.48 times and 1.92 times of that of the control group, respectively. The activation of NF-kB by Aspergillus fumigatus spore antigen was negatively correlated with the expression of SP-An SP-D. The expression of IL-1 尾 in THCEs treated with Aspergillus fumigatus spore antigen for 1 h began to increase, which was 1.82 times as much as that in control group (1.43 times, P 0.05), and reached the highest level in group 2 h. The expression of IL-10 began to increase in the group stimulated by Aspergillus fumigatus spore antigen for 1 h, 1.12 times and 1.28 times of the control group, respectively. The expression of IL-10 increased gradually in a time-dependent manner. The immunocytochemistry showed that the expression of IL-10 was increased gradually in a time-dependent manner. There was a weak positive expression of SP-An SP-D in the cytoplasm of normal THCEs, and the expression of SP-D was gradually increased in a time-dependent manner at 0.5 h after stimulation with Aspergillus fumigatus spores antigen. ConclusionSP-A and SP-D are involved in the early stage of aspergillus fumigatus infection. SP-A and SP-D play an important protective role in the early stage of innate immunity of fungal keratitis by THCEs recognition of Aspergillus fumigatus spore antigen. Immune cells together form the immune defense line against fungi in the cornea.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R772.21

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