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紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)治療兔真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間:2016-11-19 18:30

  本文關(guān)鍵詞:紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)治療兔真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《南昌大學(xué)》 2014年

紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)治療兔真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)研究

王若馨  

【摘要】:目的: 建立兔煙曲霉菌角膜炎動(dòng)物模型,觀察紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)(corneal collagen cross linking, CXL)治療兔真菌性角膜炎(fungal keratitis,F(xiàn)K)后角膜的病理變化,檢測(cè)兔FK角膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9(MMP-2、9)基因表達(dá)量和蛋白表達(dá)分布,探討角膜膠原交聯(lián)術(shù)對(duì)FK的治療效果及機(jī)制,為其應(yīng)用于真菌性角膜炎的治療提供理論依據(jù)。 方法: 44只健康日本長(zhǎng)耳兔,隨機(jī)分為4組,A組16只右眼接種煙曲霉菌,不行任何處理,,B組16只右眼接種煙曲霉菌,接種成功后當(dāng)天行CXL術(shù)1次,C組12只右眼接種煙曲霉菌,接種成功后于當(dāng)天及第3d各行CXL術(shù)1次,D組在所有兔中隨機(jī)取4眼健康角膜作為空白對(duì)照。FK建模成功后當(dāng)天及第1、4、7、14d對(duì)所有兔眼進(jìn)行臨床潰瘍?cè)u(píng)分,并于第1、4、7、14d不同時(shí)間點(diǎn)A、B組處死各4只動(dòng)物取其角膜組織,由于C組在第1d與B組同質(zhì),故C組在第1d不處死動(dòng)物,余處理同A、B組。以組織病理學(xué)方法觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度及真菌菌絲在角膜內(nèi)的侵入深度,免疫組織化學(xué)方法觀察MMP-2與MMP-9的分布及來源并對(duì)其表達(dá)進(jìn)行半定量分析,逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(Reversetranscriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)角膜組織中MMP-2與MMP-9的m-RNA含量。 結(jié)果: 1.所有接種兔眼均感染煙曲霉菌,接種成功當(dāng)天潰瘍?cè)u(píng)分組間差異無顯著性(P0.05);CXL干預(yù)組(B、C組)于第14d潰瘍?cè)u(píng)分明顯低于未處理組(A組)(P0.05),B、C組間潰瘍?cè)u(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但C組數(shù)值較B組有所降低;所有組潰瘍?cè)u(píng)分與空白對(duì)照組(D組)對(duì)比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.病理組織學(xué)檢查:(1)HE染色示真菌性角膜炎是以真菌菌絲侵入及中性粒細(xì)胞為主浸潤(rùn)角膜的化膿性炎癥,(2) B、C組炎癥浸潤(rùn)深度及壞死程度較A組降低,交聯(lián)后菌絲在角膜中的生長(zhǎng)減緩,侵入深度降低。 3.免疫組化示:(1)接種后真菌性角膜炎角膜組織中MMP-2、9均表達(dá)升高,主要位于上皮基底細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及炎癥細(xì)胞處,MMP-2于新生血管內(nèi)皮細(xì)胞亦表達(dá);周邊角膜表達(dá)強(qiáng)度均高于中央角膜;(2) A組角膜MMP-2在接種成功后第1d陽性表達(dá)最高,在第4天表達(dá)稍降,第7d略增高,在第14d表達(dá)最低;A組角膜MMP-9在接種成功后陽性表達(dá)逐漸增高,第4天后各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)持續(xù)較高;(3)在第1、4、7d,A、B、C三組間角膜組織中MMP-2免疫組化評(píng)分比較差異不顯著(P0.05),在第14d,B、C組MMP-2表達(dá)高于A組(P0.05),B、C組間各時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。交聯(lián)后B、C組MMP-9較A組降低,在第4、14d與A組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余時(shí)間點(diǎn)差異不顯著(P0.05)。B、C組各時(shí)間點(diǎn)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.RT-PCR結(jié)果顯示:(1) A組在接種真菌后MMP-2表達(dá)在第4d較第1d降低,之后逐漸增高; MMP-9表達(dá)逐漸增高,在第14d表達(dá)最強(qiáng)。(2) A組與B組的MMP-2含量于第14d時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在第1、4、14d,A組與C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在第1、4、7d,B組與C組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),余組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在第14d時(shí),隨著潰瘍的愈合,B、C組MMP-2表達(dá)量明顯高于A組(P0.05);B、C組MMP-9表達(dá)量較A組明顯降低,在第4、7、14d與A組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),B組與C組比較所有時(shí)間點(diǎn)MMP-9表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論: 1.紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)可降低真菌性角膜炎的潰瘍?cè)u(píng)分和炎癥壞死程度,可能減緩菌絲在活體角膜中的生長(zhǎng)速度,降低侵入深度。 2.紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)對(duì)真菌性角膜炎組織中的MMP-9有明顯抑制作用,從而減輕其對(duì)角膜基質(zhì)膠原組織的溶解破壞,可能是其治療感染性角膜炎的作用機(jī)制之一。 3.紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)對(duì)真菌性角膜炎組織中的MMP-2早期調(diào)節(jié)不明顯,甚至可能上調(diào)MMP-2的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號(hào)】:R772.21
【目錄】:

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4 馬慧;真菌性角膜炎致病與預(yù)后關(guān)系的分析[D];山東大學(xué);2010年

5 楊瀟遠(yuǎn);多重PCR體系檢測(cè)真菌性角膜炎的臨床應(yīng)用研究[D];鄭州大學(xué);2005年

6 張靜;真菌性角膜炎的菌種鑒定[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

7 楊子建;多重聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索[D];鄭州大學(xué);2006年

8 李淼;真菌性角膜炎角膜新生血管形成與預(yù)后的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2010年

9 胡穎峰;活化巨噬細(xì)胞對(duì)真菌性角膜炎細(xì)胞免疫狀態(tài)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

10 孫遠(yuǎn);共聚焦顯微鏡在真菌性角膜炎診斷及治療中的應(yīng)用分析[D];山東大學(xué);2013年


  本文關(guān)鍵詞:紫外線A核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)治療兔真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



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