本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)自體免疫性葡萄膜炎眼部Th17細(xì)胞的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2012年

間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)自體免疫性葡萄膜炎眼部Th17細(xì)胞的作用研究

袁立飛  

【摘要】：目的葡萄膜炎是眼科常見(jiàn)的自體免疫性疾病,Th17細(xì)胞是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群,在包括葡萄膜炎在內(nèi)的多種自體免疫性疾病(autoimmune disease, AID)中發(fā)揮重要作用。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一種具有免疫抑制特性的多能成體干細(xì)胞,在體內(nèi)外可抑制多種免疫細(xì)胞的增殖和功能。本研究通過(guò)建立實(shí)驗(yàn)性自體免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis, EAU)模型,觀察MSCs對(duì)EAU免疫調(diào)節(jié)作用,檢測(cè)Thl7細(xì)胞及其分泌的主要炎性因子IL-17在眼部的動(dòng)態(tài)變化,以闡明MSCs對(duì)EAU的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制,為臨床治療葡萄膜炎提供新的方法和理論基礎(chǔ)。 方法 1.MSCs培養(yǎng)：分離培養(yǎng)Wistar大鼠骨髓MSCs,流式細(xì)胞儀檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的表型。 2.EAU模型制作：Lewis大鼠75只,隨機(jī)實(shí)驗(yàn)組70只,空白對(duì)照組5只。光感受器間維生素A類(lèi)結(jié)合蛋白((interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)R16片段與含有結(jié)核桿菌素HR37a2.5g/L的弗氏完全佐劑(CFA)等體積混合充分乳化,單后足墊皮下注射免疫實(shí)驗(yàn)組大鼠建立EAU動(dòng)物模型。 3. MSCs治療：EAU造模后隨機(jī)分為模型對(duì)照組和MSCs治療組各35只。MSCs治療組分別于免疫的同時(shí)和EAU發(fā)病高峰期行MSCs尾靜脈注射治療,連續(xù)三天,模型對(duì)照組注射等體積PBS。 4.臨床觀察：免疫后第4天,每日在裂隙燈顯微鏡下觀察大鼠眼部炎癥反應(yīng),并根據(jù)Caspi臨床分級(jí)進(jìn)行評(píng)分。 5.組織病理學(xué)觀察：免疫同時(shí)治療組及模型對(duì)照組分別于免疫后第6,9,12,15,20天；EAU高峰期治療組分別于免疫后第15,20天,處死大鼠并摘除單側(cè)眼球制備視網(wǎng)膜組織切片,HE染色后行組織病理學(xué)觀察,參照Caspi組織學(xué)分級(jí)法進(jìn)行評(píng)。 6.免疫組織化學(xué)染色：取制備好的視網(wǎng)膜切片,免疫組化SP法檢測(cè)各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜組織中IL-17的表達(dá)。 7.房水采集及檢測(cè)：大鼠麻醉后,30G針頭行雙眼前房穿刺取房水,ELISA法檢測(cè)房水中IL-17的表達(dá)。 8.眼部浸潤(rùn)細(xì)胞提取及Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞檢測(cè)：大鼠麻醉后,行冷PBS心臟灌注,摘除各組大鼠單側(cè)眼球,分離眼部細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+IL-17+細(xì)胞和CD4+CD25+foxp3+細(xì)胞比例。 結(jié)果 1.成功分離并鑒定MSC。 2.成功建立EAU動(dòng)物模型。 3.與對(duì)照組相比,免疫同時(shí)(0天)和免疫后12天行MSCs治療,大鼠眼部臨床表現(xiàn)均顯著減輕(P0.05)；視網(wǎng)膜組織病理學(xué)改變與臨床表現(xiàn)變化一致,MSCs治療后視網(wǎng)膜炎細(xì)胞浸潤(rùn)和組織結(jié)構(gòu)破壞明顯減輕,各時(shí)間點(diǎn)組織病理學(xué)均顯著低于模型對(duì)照組(P0.05)。 4.免疫組織化學(xué)染色顯示,0天MSCs治療組于免疫后6,9,12,15,20天,12天MSCs治療組于免疫后15,20天,大鼠眼視網(wǎng)膜IL-17蛋白陽(yáng)性表達(dá)的平均A值均顯著低于相應(yīng)模型對(duì)照組(P0.05)。 5.房水IL-17ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：與相應(yīng)模型對(duì)照組相比,0天和12天MSCs治療組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)房水中IL-17表達(dá)量均明顯降低(P0.05)。 6.眼部浸潤(rùn)細(xì)胞流式檢測(cè)顯示,與相應(yīng)模型對(duì)照組相比,0天和12天MSCs治療組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)眼部Th17細(xì)胞比例均顯著降低(P0.05),Treg細(xì)胞比例顯著升高(P0.05)。 結(jié)論EAU的發(fā)生發(fā)展與Th17細(xì)胞及其因子IL-17在眼部的動(dòng)態(tài)變化密切相關(guān)；MSCs可以有效抑制EAU的發(fā)生發(fā)展；MSCs治療后視網(wǎng)膜組織和房水中IL-17的表達(dá)降低,Th17細(xì)胞在眼部浸潤(rùn)減少,Treg細(xì)胞浸潤(rùn)增加。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R773.9
【目錄】：

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本文編號(hào)：182812