本文選題：環(huán)氧化酶-2 + 塞來昔布�。� 參考：《山東大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景：喉癌在頭頸部是一種比較常見的惡性腫瘤,近十年來其發(fā)病率有逐年升高的趨勢。其傳統(tǒng)治療方法是手術(shù)切除,并根據(jù)患者情況輔助放療或化療。根據(jù)臨床分期及病理分級,采取手術(shù)和(或)化療及化療聯(lián)合放療的綜合治療,被認(rèn)為是喉癌治療的理想方案。合理的化療和(或)化療聯(lián)合放療對于晚期及復(fù)發(fā)型喉癌病人總生存率、器官保留較傳統(tǒng)手術(shù)都有提高。選擇一種副作用小且有效的化療藥物在喉癌綜合治療中有重要作用。近十年來環(huán)氧化酶-2(COX-2)作為新的腫瘤治療靶點(diǎn)成為腫瘤研究的熱點(diǎn),塞來昔布作為其特異性抑制劑,最初被美國FDA批準(zhǔn)治療疼痛,近年來發(fā)現(xiàn)其可以誘導(dǎo)包括消化道腫瘤在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,抑制腫瘤生長,但塞來昔布在喉癌的臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究報(bào)道均較少。本研究,針對環(huán)氧化酶-2在人喉癌細(xì)胞系Hep-2細(xì)胞中的表達(dá),及塞來昔布誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯進(jìn)行初步研究,為探討喉癌化療敏感性提供理論依據(jù)。 目的： 1.探討COX-2在喉癌Hep-2細(xì)胞系中的表達(dá)及塞來昔布對COX-2表達(dá)的影響； 2.初步探討塞來昔布誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞凋亡及可能的機(jī)制。 3.初步探討塞來昔布誘導(dǎo)Hep-2細(xì)胞周期阻滯及可能的機(jī)制。 方法： 以不同濃度的塞來昔布處理喉癌Hep-2細(xì)胞,以四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測對細(xì)胞增殖活力的影響；Hoechst33342對細(xì)胞進(jìn)行染色,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核的形態(tài)改變；Annexin V/PI雙染以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率；透射電鏡觀察塞來昔布處理后的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變；JC-1染色,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞線粒體膜電位的改變；Western blot檢測：Bcl-2、Bax及COX-2的表達(dá),細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子(cyclin-dependent-kinaseinhibitor;CKI) P16IM4a、P21waf/cip1、P27KIP的表達(dá),以及分析Caspase-3、PARP裂解和AIF從線粒體釋放到細(xì)胞核。 結(jié)果： 1.COX-2在喉癌Hep-2細(xì)胞系中存在表達(dá)且其表達(dá)受塞來昔布抑制。 2.MTT結(jié)果顯示塞來昔布在10-100μmol/L濃度范圍可抑制Hep-2細(xì)胞的增殖活力,并呈時(shí)間和濃度依賴性。Hoechst33342染色及電鏡結(jié)果可見鏡下典型凋亡的形態(tài)改變；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示Hep-2細(xì)胞凋亡率隨塞來昔布濃度增加而升高。 3.流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布可見細(xì)胞周期阻滯于G0/G,期。 4.JC-1染色可知,隨著塞來昔布處理時(shí)間的延長,線粒體膜電位逐漸下降。 5. western blot結(jié)果見：隨著塞來昔布濃度的升高,Bax/Bcl-2蛋白比值升高,P16INK4a、P27KIP表達(dá)增加,P21waf/cip1表達(dá)無明顯改變；隨著塞來昔布處理時(shí)間的延長,caspase-3蛋白、PARP蛋白逐漸出現(xiàn)裂解片斷,AIF蛋白逐漸從線粒體釋放移位到細(xì)胞核。 結(jié)論： 塞來昔布抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性機(jī)制可能與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯有關(guān)。塞來昔布抗腫瘤活性可能與COX-2途徑有部分聯(lián)系,是一種有前景的喉癌化療藥物。
[Abstract]:Background: laryngeal carcinoma is a common malignant tumor in head and neck. The traditional treatment is surgical resection and adjuvant radiotherapy or chemotherapy according to the patient's condition. According to the clinical stage and pathological grade, it is considered to be an ideal treatment for laryngeal cancer to take the combined treatment of surgery and / or chemotherapy and chemotherapy combined with radiotherapy. Reasonable chemotherapy and / or chemotherapy combined with radiotherapy can improve the overall survival rate and organ preservation in patients with advanced and recurrent laryngeal cancer. It is important to select a chemotherapeutic agent with small side effects in the treatment of laryngeal cancer. In recent ten years, cyclooxygenase-2 (COX-2) as a new target of tumor therapy has become a hot topic in cancer research. Celecoxib, as a specific inhibitor of cyclooxygenase-2, was initially approved by the United States FDA for the treatment of pain. In recent years, it has been found that celecoxib can induce apoptosis of many kinds of tumor cells, including digestive tract tumors, and inhibit tumor growth. However, there are few reports on the clinical application and basic research of celecoxib in laryngeal carcinoma. In this study, the expression of cyclooxygenase-2 in human laryngeal carcinoma cell line Hep-2, celecoxib induced apoptosis and cell cycle arrest of Hep-2 cells were studied. Objective: 1. To investigate the expression of COX-2 in Hep-2 cell line of laryngeal carcinoma and the effect of celecoxib on COX-2 expression. 2. To explore the possible mechanism of celecoxib induced apoptosis in Hep-2 cells. 3. To explore the mechanism of cell cycle arrest induced by celecoxib in Hep-2 cells. Methods: Laryngeal cancer Hep-2 cells were treated with celecoxib at different concentrations. Nuclear morphological changes were observed under fluorescence microscope Annexin V/PI double staining was used to detect cell apoptosis rate by flow cytometry, and ultrastructural changes of cells treated with celecoxib were observed by transmission electron microscope (TEM), and JC-1 staining was observed after celecoxib treatment. The changes of mitochondrial membrane potential were observed under fluorescence microscope. The expression of Bcl-2P Bax and COX-2 was detected by blot, and the expression of cyclin -dependent kinase inhibitor (CKI) P16IM4acip1wafP21waf1 / p27KIP was analyzed. The cleavage of Caspase-3PARP and the release of AIF from mitochondria into nucleus were analyzed. Results: 1.COX-2 was expressed in Hep-2 cell line of laryngeal carcinoma and its expression was inhibited by celecoxib. The results of 2.MTT showed that celecoxib could inhibit the proliferation of Hep-2 cells in the concentration range of 10-100 渭 mol/L, and the morphological changes of apoptosis were observed in a time-and concentration-dependent manner. Flow cytometry showed that the apoptosis rate of Hep-2 cells increased with the increase of celecoxib concentration. 3. Flow cytometry analysis of cell cycle distribution showed that cell cycle arrest at G _ 0 / G, phase. 4.JC-1 staining showed that mitochondrial membrane potential decreased with the prolongation of celecoxib treatment time. 5. The results of western blot showed that with the increase of celecoxib concentration, the expression of P16INK4aP27KIP was increased with the increase of Bax-Bcl-2 protein ratio. With the prolongation of caspase-3 protein and PARP protein of celecoxib, the cleavage fragment of AIF protein was gradually released and translocated from mitochondria to nucleus. Conclusion: The mechanism of celecoxib inhibiting tumor cell proliferation may be related to apoptosis and cell cycle arrest induced by celecoxib. Celecoxib may be a promising chemotherapeutic agent for laryngeal cancer due to its partial association with COX-2 pathway.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.65

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本文編號(hào)：1799383