本文選題：阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 + 動物模型��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的:通過建立阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome, OSAHS)新西蘭兔模型,研究OSAHS對兔血漿NO(nitric oxide, NO)及肺小動脈的影響,探討下頜前移矯治器(Mandibular advancement device, MAD)治療OSAHS后二者的改變,為臨床治療OSAHS及預(yù)防其可能引發(fā)的肺小動脈改變提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法:將30只雄性6月齡體重3~3.5kg新西蘭兔隨機(jī)分為三組,分別為OSAHS組、MAD組和對照組。OSAHS組和MAD組實驗動物均行1%戊巴比妥鈉全身麻醉。于軟腭中間距軟硬腭交界0.5cm處,粘膜下肌層注射聚丙烯酰胺水凝膠1~2ml,直至動物出現(xiàn)響亮鼾聲及呼吸暫停時停止。仰臥位頭顱側(cè)位片顯示注射后軟腭后緣1/4點1/2點3/4點處上氣道寬度較對照組明顯狹窄,動脈血氣分析發(fā)現(xiàn)注射后動物睡眠發(fā)生呼吸暫停時血氧飽和度較對照組降低了22%。以上說明OSAHS動物模型建立成功。MAD組配帶下頜前移矯治器引導(dǎo)下頜向前。 MAD組佩戴矯治器兩天后,三組動物以5~6ml/kg的劑量經(jīng)口灌注10%水合氯醛催眠動物,使之仰臥位睡眠,4~6小時/天,持續(xù)8周。首次睡眠過程中分別對三組動物上氣道間隙再次進(jìn)行測量。同時,在睡眠呼吸暫停發(fā)生時分別抽取三組動物的耳緣動脈血1ml進(jìn)行血氧飽和度氧分壓二氧化碳分壓和pH值測定。 8周后,1%戊巴比妥鈉麻醉狀態(tài)下自耳緣靜脈取血2ml ,肝素抗凝,立即離心10分鐘(4℃, 3000r/min),分離并收集血漿,用硝酸還原酶法測量血漿中NO的含量。 在同一麻醉狀態(tài)下,開胸取出肺組織后3. 3 mol/L中性甲醛緩沖液灌注固定肺組織10分鐘,結(jié)扎氣管后放于同種固定液中48小時以上。沿肺門水平橫斷取材,梯度酒精順序脫水,二甲苯透明后石蠟包埋,切片,HE常規(guī)染色及EVG(Elastic Van Gieson, EVG)彈力纖維染色,Nikon ECLIPSE 80i顯微鏡觀察肺小動脈(直徑≤150μm)的變化,應(yīng)用Motic Digilab version1.2自動圖像分析系統(tǒng)對肌性肺動脈相對中膜厚度(percentage wall thickness, WT%)及肺微動脈百分比進(jìn)行測定。同時,取下腭咽部凝膠注射部位組織,固定于中性甲醛緩沖液中,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色,觀察其組織學(xué)結(jié)構(gòu)。 實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分別進(jìn)行統(tǒng)計分析,以α0.05作為顯著性檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果: 1一般情況:OSAHS組鼾聲響亮,不均勻,睡眠過程中伴數(shù)次驚醒及肢體癥狀; MAD組呼吸聲音稍粗重,較平穩(wěn);正常組睡眠過程中呼吸均勻、平穩(wěn)、有規(guī)律。 2仰臥位上氣道寬度分析:OSAHS組軟腭1/4點1/2點和3/4點的上氣道間隙分別為2.66±1.04mm、2.26±0.79mm、2.29±0.73mm,明顯小于MAD組和對照組,有顯著性差異(P0.05);而MAD組較對照組減小但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3血氣分析:OSAHS組血氧飽和度動脈氧分壓和pH值分別為69.43±1.66%、72.40±2.53mmHg、7.25±0.13,較MAD組、對照組顯著降低,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。二氧化碳分壓為53.32±2.57 mmHg,明顯高于MAD組、對照組,差別有顯著性(P0.05)。MAD組和對照組以上各項均無顯著性差異(P0.05)。 4注射部位組織學(xué)觀察:大體觀察軟腭中間后緣處有白色隆起,外有一層薄而透明的包膜包裹,界限清楚,質(zhì)地較韌且富有彈性。光鏡下觀察凝膠被染成藍(lán)紫色,成交聯(lián)狀,表面有一層由彈性纖維和膠原纖維形成的膜包繞,與周圍組織界限清楚,沒有炎癥反應(yīng)及向周圍組織擴(kuò)散的現(xiàn)象。 5血漿中NO的測定:OSAHS組、MAD組及對照組的NO含量分別為52.28±0.38μmol/L、65.16±0.53μmol/L、66.17±0.60μmol/L。OSAHS組NO含量明顯低于MAD組和對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);MAD組低于對照組,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 6肺小動脈組織學(xué)觀察: 6.1肌性肺動脈(40μm≤d≤150μm)的組織學(xué)觀察:HE染色鏡下觀察OSAHS組管壁增厚,管腔狹窄,呈現(xiàn)肺血管重建的現(xiàn)象;MAD組動脈管壁輕微增厚;對照組肌性肺動脈管壁較薄,管腔較大。EVG彈力纖維染色鏡下觀察發(fā)現(xiàn)OSAHS組中膜明顯增厚;MAD組中膜略有增厚,但與對照組相比變化并不明顯;對照組中膜很薄。 6.2肺微動脈(d≤40μm)的組織學(xué)觀察:HE染色較難辨別三組間差別。EVG彈力纖維染色鏡下觀察發(fā)現(xiàn)OSAHS組出現(xiàn)較多的肌性動脈,即肺微動脈有內(nèi)外兩層彈力膜,其間有平滑肌細(xì)胞環(huán)繞;MAD組大部分肺微動脈僅有一層彈力膜包繞,類似于對照組。 7肌性肺動脈相對中膜厚度的測定:OSAHS組、MAD組及對照組的WT%分別為13.07±0.56%、9.05±0.36%、8.62±0.46%。OSAHS組WT%顯著高于MAD組及對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);MAD組WT%較對照組略有增大,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 8肺微動脈百分比的測定: OSAHS組、MAD組及對照組肌性動脈和部分肌性動脈占肺微動脈的百分比分別為22.56%、8.75%、7.64%。OSAHS組明顯高于MAD組及對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);MAD組及對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論:OSAHS可引起兔血漿NO及肺小動脈結(jié)構(gòu)的改變,MAD對OSAHS引起的肺血管結(jié)構(gòu)改變具有預(yù)防作用。
[Abstract]:Objective : To study the effect of obstructive sleep apnea - syndrome ( Obstructive sleep apnea - syndrome ) New Zealand rabbits model on nitric oxide ( NO ) and pulmonary arterioles in rabbits .


Methods : 30 male 6 - month - old New Zealand rabbits were randomly divided into three groups , the group of obstructive sleep apnea - palate was 1 - 2 ml in the soft palate , and 1 - 2 ml of polyacrylamide hydrogel was injected into the submucous membrane until the animal appeared loud snoring and apnea .


After two days in MAD group , three groups of animals were perfused with 10 % water chloral hypnotic animal at a dose of 5 - 6 ml / kg for 8 weeks . The air gap of three groups of animals was measured again during the first sleep . At the same time , the blood oxygen saturation , oxygen partial pressure , carbon dioxide partial pressure and pH value were measured in 1 ml of blood oxygen saturation of three groups of animals during the first sleep .


After 8 weeks , 2 ml of blood were collected from the auricular vein in 1 % sodium opental anesthesia . The heparin anticoagulant was centrifuged immediately for 10 minutes ( 4 鈩，

本文編號：1758777