本文選題：鼻咽癌 + 氧化性DNA損傷��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 研究目的： 運用雙色免疫熒光組織化學(xué)方法以及酶聯(lián)免疫吸附試驗分別檢測鼻咽癌鼻咽組織及血清中氧化性DNA損傷的情況,并且運用熒光原位雜交技術(shù)檢測鼻咽癌組織中EB病毒感染的情況,初步探索鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展是否與氧化性DNA損傷有關(guān)及其損傷的可能原因和途徑,以期尋找出能夠輔助鼻咽癌診斷的生物標(biāo)志物。 方法： (1)選擇57例鼻咽癌患者和39例慢性鼻咽炎患者鼻咽部組織,采用雙色免疫熒光組織化學(xué)方法分別檢測8-硝基鳥嘌呤(8-nitroguanine, 8-NitroG),8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的免疫反應(yīng)。秩和檢驗統(tǒng)計學(xué)方法分析鼻咽癌和慢性鼻咽炎鼻咽組織之間8-NitroG、8-OHdG和iNOS免疫反應(yīng)強度的差異。 (2)從57例鼻咽癌中隨機選擇36例鼻咽癌患者和36例健康人血清標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測血清中8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的表達水平。采用成組t檢驗進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)分析。 (3)選擇57例鼻咽癌患者和39例慢性鼻咽炎患者鼻咽部組織,采用雙色免疫熒光組織化學(xué)方法分別檢測磷酸化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(phosphorylated signal transducers and activators of transcription, p-Stat3),表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)的免疫反應(yīng)。秩和檢驗統(tǒng)計學(xué)方法分析鼻咽癌和慢性咽炎鼻咽組織之間p-Stat3.EGFR免疫反應(yīng)強度的差異。 (4)選擇57例鼻咽癌患者和39例慢性鼻咽炎患者鼻咽部組織,采用雙色免疫熒光組織化學(xué)方法分別檢測鼻咽癌組織中巨噬細胞的表面抗原CD68及其表達產(chǎn)物IL-6的免疫反應(yīng)。秩和檢驗統(tǒng)計學(xué)方法分析鼻咽癌和慢性鼻咽炎鼻咽組織之間CD68、IL-6免疫反應(yīng)強度的差異。 (5)選擇57例鼻咽癌患者和39例慢性鼻咽炎患者鼻咽部組織,采用熒光原位雜交法(fluorescent in situ hybridization, FISH)檢測鼻咽癌組織中EB病毒轉(zhuǎn)錄的核內(nèi)小RNA(EBV encoded small RNAs, EBER)的免疫反應(yīng)。秩和檢驗統(tǒng)計學(xué)方法分析鼻咽癌和慢性鼻咽炎鼻咽組織之間EB病毒免疫反應(yīng)強度的差異。 結(jié)果： (1)在鼻咽癌患者鼻咽部組織中觀測到嚴重程度的DNA損傷。57例鼻咽癌組織細胞中8-NitroG、8-OHdG和iNOS均為強免疫反應(yīng),8-NitroG、8-OHdG陽性率100%,iNOS陽性率94.7%,與39例慢性鼻咽炎組織比較差異顯著(P＜0.05)。 (2)36例鼻咽癌患者血清中8-OHdG的平均水平為0.538±0.336ng/ml,而對照組中36例健康人的血清中8-OHdG的平均水平為0.069±0.059ng/ml,鼻咽癌患者血清中8-OHdG水平與健康人比較差異顯著(P＜0.05)。 (3)在鼻咽癌患者鼻咽部組織中觀測到p-Stat3及EGFR強烈的免疫反應(yīng)。鼻咽癌組織細胞中p-Stat3及EGFR觀察到強免疫反應(yīng),p-Stat3、EGFR陽性率均為94.7%,與39例慢性鼻咽炎組織比較差異顯著(P＜0.05)。 (4)在鼻咽癌患者鼻咽部組織中觀測到CD68、IL-6強烈的免疫反應(yīng)。57例鼻咽癌組織細胞中CD68、IL-6均為強免疫反應(yīng),CD68、IL-6陽性率100%,與39例慢性鼻咽炎組織比較差異顯著(P＜0.05)。 (5)在鼻咽癌患者鼻咽部組織中觀測到EBER強烈的反應(yīng)。57例鼻咽癌組織細胞中EBER陽性率100%,均為EB病毒陽性,與39例慢性鼻咽炎組織比較差異顯著(P＜0.05)。 結(jié)論： (1)鼻咽癌組織中有氧化性DNA損傷存在。 (2)氧化性DNA損傷與iNOS的高表達有關(guān)。 (3)鼻咽部組織中由于細菌、病毒及寄生蟲等引起的炎癥反應(yīng)等病理性刺激,可能會導(dǎo)致誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)催化產(chǎn)生一氧化氮(nitric oxide, NO),進而產(chǎn)生硝基化及氧化性DNA損傷,導(dǎo)致鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展。iNOS的高表達可能是由于EB病毒LMP1通過TRAFs上調(diào)EGFR表達,EGFR與特定配體EGF或TGF-a結(jié)合后,導(dǎo)致細胞內(nèi)受體區(qū)自我磷酸化,并利用其本身的酪氨酸激酶活性活化Stat3 (p-Stat3),從而促進iNOS基因表達。誘導(dǎo)iNOS高表達的另一通路還可能是由于EB病毒作為抗原存在于鼻咽上皮細胞,導(dǎo)致鼻咽部巨噬細胞、T和B淋巴細胞、血管平滑肌細胞和中性粒細胞的聚集并分泌炎性細胞因子如IL-6,通過IL-6/gp130/Jak途徑激活Stat3 (p-Stat3),p-Stat3促進iNOS基因表達。由于iNOS的高表達,細胞內(nèi)NO活性氧增加,通過NO引起DNA損傷,最后誘發(fā)癌變。 (4) 8-NitroG、8-OHdG有望成為輔助診斷鼻咽癌的一個生物標(biāo)志物。更好的理解鼻咽癌中氧化性DNA損傷的作用機制可以為通過分子水平調(diào)節(jié)炎癥的過程以達到癌癥預(yù)防的目的提供一個新的研究策略。
[Abstract]:Purpose of study :



Two - color immunofluorescence histochemistry and enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) were used to detect the oxidative DNA damage in nasopharyngeal tissues and serum of nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) .



Method :



( 1 ) The immune responses of 8 - nitroguanine ( 8 - Nitrophenyl , 8 - NitroG ) , 8 - hydroxydeoxyguanosine ( 8 - hydroxy - 2 ' - deoxycytidine , 8 - OHdG ) and inducible nitric oxide synthase ( iNOS ) were detected by two - color immunofluorescence histochemical method in 57 patients with nasopharyngeal carcinoma and 39 patients with chronic rhinopharyngitis .



( 2 ) The expression level of 8 - hydroxydeoxyguanosine ( 8 - OHdG ) in serum was determined by enzyme - linked immunosorbent assay ( ELISA ) from 57 patients with nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) and 36 healthy controls .



( 3 ) 57 patients with nasopharyngeal carcinoma and 39 patients with chronic rhinopharyngitis were selected to detect the phosphorylation signal transduction and transcription , p - Stat3 and epidermal growth factor receptor ( EGFR ) by two - color immunofluorescence histochemistry .



( 4 ) 57 patients with nasopharyngeal carcinoma and 39 patients with chronic rhinopharyngitis were selected , the surface antigen CD68 and its expression products IL - 6 were detected by two - color immunofluorescence histochemistry .



( 5 ) To investigate the immune response of EBV encoded small RNAs ( EBER ) and EBV encoded small RNAs ( EBER ) in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) by fluorescence in situ hybridization ( FISH ) in 57 patients with nasopharyngeal carcinoma and 39 patients with chronic rhinopharyngitis .



Results :



The expression of 8 - NitroG , 8 - OHdG and iNOS in 57 patients with NPC were strongly immune , 8 - NitroG , 8 - OHdG was 100 % , and the positive rate of iNOS was 94 . 7 % , which was significantly higher than that in 39 patients with chronic rhinopharyngitis ( P < 0.05 ) .



( 2 ) The average of 8 - OHdG in 36 patients with NPC was 0.538 鹵 0.336ng / ml , while the average of 8 - OHdG was 0.069 鹵 0.059ng / ml in 36 healthy controls .



( 3 ) p - Stat3 and EGFR were observed in the nasopharyngeal tissues of NPC patients . The positive rates of p - Stat3 and EGFR in NPC tissue cells were 94 . 7 % and 94 . 7 % respectively , compared with 39 patients with chronic rhinopharyngitis ( P < 0.05 ) .



( 4 ) CD68 and IL - 6 were observed in the nasopharyngeal tissues of NPC patients . The positive rates of CD68 and IL - 6 in 57 cases of NPC were strongly immune , and the positive rate of CD68 and IL - 6 was 100 % .



( 5 ) EBER was detected in the nasopharyngeal tissues of NPC patients . The positive rate of EBER in 57 cases of NPC was 100 % , which was EBV positive , which was significantly different from 39 cases of chronic rhinopharyngitis ( P < 0.05 ) .



Conclusion :



( 1 ) There is oxidative DNA damage in nasopharyngeal carcinoma .



( 2 ) Oxidative DNA damage is related to the high expression of iNOS .



( 3 ) The expression of inducible nitric oxide synthase ( iNOS ) in nasopharyngeal epithelial cells induced by bacteria , virus , parasite and so on may lead to nitric oxide ( NO ) induced by inducible nitric oxide synthase ( iNOS ) .



( 4 ) 8 - NitroG , 8 - OHdG is expected to be a biomarker for the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma .

【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

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本文編號：1756275