本文選題：Waardengurg綜合征　切入點：MITF　出處：《中華耳科學(xué)雜志》2014年01期

【摘要】：目的通過構(gòu)建基因MITF及其突變體表達質(zhì)粒初步研究其外源性表達和定位表達,為研究Waardenburg綜合征(Waardenburg syndrome,WS)發(fā)病機制提供一定的實驗依據(jù)和基礎(chǔ)。方法通過分子克隆技術(shù)雙酶切pCMV-MITF和pCMV-Flag后連接構(gòu)建MITF基因重組真核細(xì)胞表達質(zhì)粒pCMV-MITF-Flag,以其為模板分別構(gòu)建MITF基因新發(fā)突變R217I和T192fs表達質(zhì)粒pCMV-R217I-Flag和pCMV-T192fs-Flag,DNA測序鑒定。MITF、R217I和T192fs表達質(zhì)粒分別瞬時轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞或黑色素瘤UACC903細(xì)胞,Western blot和細(xì)胞免疫熒光分別檢測和觀察野生MITF蛋白和突變R217I、T192fs蛋白的表達和分布。結(jié)果 MITF及其突變體R217I和T192fs表達質(zhì)粒經(jīng)DNA測序鑒定序列正確,三者在黑色素瘤UACC903細(xì)胞中正確表達,MITF和R217I僅在細(xì)胞核中分布,而T192fs僅在細(xì)胞質(zhì)分布。結(jié)論成功構(gòu)建了MITF基因及其突變體真核細(xì)胞表達質(zhì)粒,突變對MITF蛋白的亞細(xì)胞定位產(chǎn)生影響,為在體外實驗進一步研究國人MITF基因突變致WS發(fā)病的分子機制奠定了實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to study the exogenous expression and localization expression of MITF gene and its mutant expression plasmid. Methods the recombinant eukaryotic cell expression plasmid pCMV-MITF-Flagar of MITF gene was constructed by double enzyme digestion of pCMV-MITF and pCMV-Flag by molecular cloning technique, which provided a basis for studying the pathogenesis of Waardenburg syndrome.Methods the recombinant eukaryotic cell expression plasmid pCMV-MITF-Flagagwas constructed using molecular cloning technique as the template for the construction of the recombinant eukaryotic cell plasmid pCMV-MITF-Flag. Sequencing of pCMV-R217I-Flag and pCMV-T19fs-Flag#en0# expression plasmids R217I and T192fs expression plasmids of MITF Gene. Transient transfection of NIH3T3 cells or melanoma UACC903 cells with blot and Cellular Immunofluorescence Detection and observation of Wild MITF protein and Mutant R217IT19fs. Results MITF and its mutants R217I and T192fs were sequenced by DNA sequencing. The correct expression of MITF and R217I in melanoma UACC903 cells was found only in the nucleus, but only in the cytoplasm. Conclusion the eukaryotic expression plasmids of MITF gene and its mutant were successfully constructed. The mutation has an effect on the subcellular localization of MITF protein, which provides an experimental basis for further study on the molecular mechanism of WS induced by MITF gene mutation in Chinese in vitro.
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;中南大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國家重點實驗室;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81260160,81170923)資助
【分類號】：R764

【共引文獻】

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2 張華;馮永;;PAX3基因?qū)ι窠?jīng)嵴發(fā)育的調(diào)控及其在Waardenburg綜合征發(fā)病中的作用研究[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2014年02期

3 張華;李家大;羅渾金;陳紅勝;梅凌云;賀楚峰;馮永;;PAX3基因重組真核細(xì)胞表達質(zhì)粒的構(gòu)建、表達及意義[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2014年01期

4 陳志強;韓新煥;曹新;;Sonic Hedgehog信號通路與內(nèi)耳發(fā)育調(diào)控[J];遺傳;2013年09期

5 葉子;李朝輝;;先天性小眼球合并白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)相關(guān)研究進展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年23期

6 袁永一;戴樸;;耳聾基因診斷——轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)推動耳科學(xué)發(fā)展的范例[J];中華耳科學(xué)雜志;2014年01期

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4 吳荒;宋躍;;PAX-6基因突變與無虹膜癥[J];中國眼耳鼻喉科雜志;1999年04期

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8 蔣璐;馮永;陳紅勝;賀楚峰;梅凌云;;中國湖南地區(qū)非綜合征性聾患者SLC26A4基因突變研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2010年13期

9 熊世紅,趙堪興,王立;視網(wǎng)膜色素變性分子遺傳學(xué)研究現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊;2000年02期

10 蘇穎;王峰;王繼群;山艷春;劉平;陳劍;;原發(fā)性開角型青光眼患者TIGR基因突變篩選、序列分析[J];中國臨床康復(fù);2006年28期

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5 李慶忠;王秋菊;遲放魯;李麗娜;趙亞麗;袁虎;韓東一;;散發(fā)耳聾人群中連接蛋白基因突變分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2007年

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8 周偉;陳桂文;陳洪;張咸寧;郁芮;;單純性晶狀體異位—家系FBN1基因突變的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

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1 實習(xí)生　劉霞;基因突變導(dǎo)致遺傳性視網(wǎng)膜病變[N];科技日報;2007年

2 李天舒;我國繪制出耳聾基因突變譜[N];健康報;2008年

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4 小于;慢性竇炎與基因突變有關(guān)[N];山西科技報;2000年

5 江瑋;DNA分析：藍(lán)眼睛是一萬年前基因突變的結(jié)果[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

6 衣曉峰 李華虹 喬蕤琳;先天性白內(nèi)障致病新位點被發(fā)現(xiàn)[N];健康報;2006年

7 衣曉峰 聶松義 李華虹;哈醫(yī)大二院發(fā)現(xiàn)先天性白內(nèi)障新致病位點[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 衣曉峰 本報記者　 李華虹 喬蕤琳;專家研究發(fā)現(xiàn)先天性白內(nèi)障新致病位點[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

9 李琦 戴樸;突破聲音障礙的曙光——耳聾基因診斷[N];健康報;2006年

10 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院 肖自安 副教授 謝鼎華 教授;警惕遺傳性聾的危害[N];湖南科技報;2007年

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1 張華;MITF、PAX3和SOX10基因突變致Waardenburg綜合征發(fā)病的分子機制研究[D];中南大學(xué);2012年

2 嚴(yán)旭坤;兩個中國遺傳性聾家系的致病基因研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

3 田強;原發(fā)開角型青光眼家系一新的TIGR基因突變[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

4 陳仁武;鼻咽癌抑癌基因p53的突變和表達[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1994年

5 張成鋒;色素上皮衍生因子對黑素細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

6 柯鐵;眼科遺傳疾病的分子遺傳學(xué)分析[D];華中科技大學(xué);2006年

7 張?zhí)鞎?兩種遺傳性眼病致病基因的定位與突變研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

8 馮湘玲;鼻咽癌中抑瘤基因DLC-1的表達及其失活機制和功能研究[D];中南大學(xué);2009年

9 李茅;中國漢族人群原發(fā)性先天性青光眼CYP1B1基因突變研究[D];四川大學(xué);2006年

10 朱慶文;部分變性高效液相色譜技術(shù)篩查中國重—極重度耳聾患者SLC26A4基因突變方法的建立及應(yīng)用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2007年

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1 藺云霞;激素性高眼壓與TIGR/MYOC基因突變關(guān)系的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

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5 趙貴陽;先天性視網(wǎng)膜劈裂癥基因突變篩選[D];大連醫(yī)科大學(xué);2004年

6 張東紅;新生兒聾病基因（GJB2、SLC26A4、線粒體12SrRNA）的分子流行病學(xué)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

7 馬建鸝;中國西北地區(qū)回族非綜合征型耳聾患者常見聾病基因突變的特征分析[D];蘭州大學(xué);2013年

8 王立華;先天性視網(wǎng)膜劈裂癥基因突變分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

9 沈浩;先天性小耳畸形患者骨形態(tài)發(fā)生蛋白-5成熟肽基因突變研究[D];東南大學(xué);2005年

10 鄭紅;鼻咽癌中DNA聚合酶β基因突變及與EB病毒相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2004年

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本文編號：1692121