本文選題：Waardengurg綜合征　切入點(diǎn)：MITF　出處：《中華耳科學(xué)雜志》2014年01期

【摘要】：目的通過(guò)構(gòu)建基因MITF及其突變體表達(dá)質(zhì)粒初步研究其外源性表達(dá)和定位表達(dá),為研究Waardenburg綜合征(Waardenburg syndrome,WS)發(fā)病機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和基礎(chǔ)。方法通過(guò)分子克隆技術(shù)雙酶切pCMV-MITF和pCMV-Flag后連接構(gòu)建MITF基因重組真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pCMV-MITF-Flag,以其為模板分別構(gòu)建MITF基因新發(fā)突變R217I和T192fs表達(dá)質(zhì)粒pCMV-R217I-Flag和pCMV-T192fs-Flag,DNA測(cè)序鑒定。MITF、R217I和T192fs表達(dá)質(zhì)粒分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞或黑色素瘤UACC903細(xì)胞,Western blot和細(xì)胞免疫熒光分別檢測(cè)和觀察野生MITF蛋白和突變R217I、T192fs蛋白的表達(dá)和分布。結(jié)果 MITF及其突變體R217I和T192fs表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)DNA測(cè)序鑒定序列正確,三者在黑色素瘤UACC903細(xì)胞中正確表達(dá),MITF和R217I僅在細(xì)胞核中分布,而T192fs僅在細(xì)胞質(zhì)分布。結(jié)論成功構(gòu)建了MITF基因及其突變體真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒,突變對(duì)MITF蛋白的亞細(xì)胞定位產(chǎn)生影響,為在體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究國(guó)人MITF基因突變致WS發(fā)病的分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to study the exogenous expression and localization expression of MITF gene and its mutant expression plasmid. Methods the recombinant eukaryotic cell expression plasmid pCMV-MITF-Flagar of MITF gene was constructed by double enzyme digestion of pCMV-MITF and pCMV-Flag by molecular cloning technique, which provided a basis for studying the pathogenesis of Waardenburg syndrome.Methods the recombinant eukaryotic cell expression plasmid pCMV-MITF-Flagagwas constructed using molecular cloning technique as the template for the construction of the recombinant eukaryotic cell plasmid pCMV-MITF-Flag. Sequencing of pCMV-R217I-Flag and pCMV-T19fs-Flag#en0# expression plasmids R217I and T192fs expression plasmids of MITF Gene. Transient transfection of NIH3T3 cells or melanoma UACC903 cells with blot and Cellular Immunofluorescence Detection and observation of Wild MITF protein and Mutant R217IT19fs. Results MITF and its mutants R217I and T192fs were sequenced by DNA sequencing. The correct expression of MITF and R217I in melanoma UACC903 cells was found only in the nucleus, but only in the cytoplasm. Conclusion the eukaryotic expression plasmids of MITF gene and its mutant were successfully constructed. The mutation has an effect on the subcellular localization of MITF protein, which provides an experimental basis for further study on the molecular mechanism of WS induced by MITF gene mutation in Chinese in vitro.
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;中南大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81260160,81170923)資助
【分類號(hào)】：R764

【共引文獻(xiàn)】

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8 衣曉峰 本報(bào)記者　 李華虹 喬蕤琳;專家研究發(fā)現(xiàn)先天性白內(nèi)障新致病位點(diǎn)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

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本文編號(hào)：1692121