本文選題：角膜移植　切入點(diǎn)：抗原　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景 目前研究認(rèn)為角膜移植免疫排斥反應(yīng)主要是T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng),是多種免疫細(xì)胞和分子共同參與、相互調(diào)節(jié)的復(fù)雜過程。T細(xì)胞活化需要兩個信號的參與,即MHC-抗原肽信號和共刺激信號。如缺乏共刺激分子提供的共刺激信號,T細(xì)胞便不能活化而處于無能狀態(tài)。在T細(xì)胞活化的不同階段,多種共刺激分子發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。 移植術(shù)后,角膜植片朝哪個方向發(fā)展是由多種因素所決定的,其中共刺激分子起到了相當(dāng)重要的作用,決定著T細(xì)胞活化后的反應(yīng)方向。正性共刺激分子可以促進(jìn)T細(xì)胞的增殖,促進(jìn)植片排斥反應(yīng)的發(fā)生；負(fù)性共刺激分子可以抑制T細(xì)胞的活化,促進(jìn)免疫赦免,移植片的存活。B7家族與TIM家族是共刺激分子中非常重要的兩類共刺激分子,在啟動、維持移植免疫和決定免疫發(fā)展方向上起到相當(dāng)關(guān)鍵的作用。其中共刺激分子B7-H3與TIM-1是最近發(fā)現(xiàn)的參與T細(xì)胞活化的重要共刺激分子。 共刺激通路在多種器官移植免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,通過對該通路的干預(yù)可有效調(diào)節(jié)免疫排斥反應(yīng),并可從中探索防治免疫排斥反應(yīng)的策略和手段。同種異體角膜移植是目前治療角膜盲最為有效的方法,但移植術(shù)后排斥反應(yīng)仍是導(dǎo)致手術(shù)失敗的主要原因。不斷提高角膜移植的成功率是臨床亟待解決的問題。因此加強(qiáng)對角膜移植免疫排斥反應(yīng)機(jī)理的研究,以及從多種途徑積極探索良好的抗排斥反應(yīng)手段具有非常重要的理論與現(xiàn)實意義。 第一部分B7-H3在小鼠角膜移植免疫赦免中的作用探討 目的 探討共刺激分子B7-H3在小鼠角膜中的表達(dá)情況以及在角膜移植免疫赦免中的作用。 方法 實驗研究。以C57BL/6小鼠為供體、BALB/c小鼠為受體建立角膜移植實驗?zāi)Ｐ?采用簡單隨機(jī)抽樣方法設(shè)計方案,取8只未行角膜移植的BALB/c小鼠作為正常對照組,另取8只BALB/c小鼠作為自體角膜移植組,最后30只BALB/c小鼠進(jìn)行同種異體角膜移植；按Sonoda法觀察小鼠角膜移植后的存活率,8周內(nèi)植片混濁評分≥12分判定為排斥組,8周時未達(dá)到2分的認(rèn)為是存活組；各組各取3只眼球,HE染色后行組織病理學(xué)觀察并行B7-H3分子的免疫組織化學(xué)檢測；各組各取5只眼角膜,行熒光定量PCR檢測B7-H3分子mRNA的表達(dá)情況。各組角膜組織中的B7-H3mRNA表達(dá)差異倍數(shù)比較采用設(shè)計單因素的方差分析,組間的多重比較采用LSD-t檢驗。 結(jié)果 同種異體角膜移植組并未完全排斥,30只小鼠中有9只存活,21只排斥,移植存活率為30%；自體角膜移植組移植存活率為100%；免疫組化表明B7-H3分子在正常對照組和自體角膜移植組的角膜上皮、內(nèi)皮細(xì)胞和虹膜睫狀體中均有表達(dá),在存活組中的表達(dá)明顯增加,而在排斥組中的表達(dá)明顯減少；qPCR檢測在正常對照組(4.30±0.023)和自體角膜移植組(4.33±0.031)中均可以檢測出B7-H3分子mRNA的表達(dá)；同種異體角膜移植排斥組(3.89±0.037)B7-H3分子的mRNA表達(dá)程度明顯下降；但在同種異體角膜移植存活組(5.04±0.058)中B7-H3分子的mRNA表達(dá)明顯增加；將各組B7-H3mRNA的表達(dá)差異進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,先進(jìn)行方差齊性檢驗(F=429.546),再采用LSD法進(jìn)行兩兩比較,除了正常對照組與自體角膜移植組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義之外(P=0.387),其余各組之間均有統(tǒng)計學(xué)意義,C組與A組之間P=0.001,C組與R組之間P=0.003(P0.01)。 結(jié)論 B7-H3分子在促進(jìn)角膜移植的免疫赦免中發(fā)揮一定的作用,可能是維持移植角膜免疫耐受狀態(tài)的重要因子之一。 第二部分Tim-1共刺激分子參與大鼠角膜移植排斥反應(yīng)中的研究· 目的 共刺激分子Tim-1在大鼠角膜中的表達(dá)情況以及在角膜移植排斥反應(yīng)中的作用。 方法 以SD大鼠為供體,Wistar大鼠為受體建立角膜移植實驗?zāi)Ｐ汀２捎猛耆S機(jī)分組設(shè)計方案,將40只大鼠分為三組,C組為正常對照組(8只),Ⅰ組為Wistar自體角移組(16只),A組(各16只)為SD-Wistar同種異體角膜移植組。根據(jù)排斥反應(yīng)評分系統(tǒng),判斷術(shù)后植片排斥情況。觀察各組角膜植片的平均存活時間和植片存活率。術(shù)后7、14天三組各取3只大鼠眼球進(jìn)行組織病理切片,以及免疫組化檢測共刺激分子Tim-1在各組中表達(dá)情況,術(shù)后7、14天各組取5只大鼠角膜,采用熒光定量PCR檢測共刺激分子Tim-1mRNA表達(dá)變化。 結(jié)果 自體角膜移植(Ⅰ)組移植存活率為100%,同種異體角膜移植(A)組100%排斥；術(shù)后7d免疫組化表明Tim-1分子在正常組(C組)中少量表達(dá),在自體角膜移植組(Ⅰ組)和同種異體角膜移植(A)組的角膜上皮、基質(zhì)、內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)均明顯增強(qiáng)；術(shù)后14d,免疫組化觀察到Tim-1在Ⅰ組中的表達(dá)明顯減少,而在A組中仍然呈高表達(dá)；qPCR檢測術(shù)后7d,正常C組中Tim-1mRNA少量表達(dá),在自體角膜移植組(Ⅰ組)和同種異體角膜移植(A)組中Tim-1mRNA表達(dá)均明顯增加,A組增高更明顯；術(shù)后14d,qPCR檢測到Ⅰ組中Tim-1mRNA量明顯下降,而A組中Tim-1mRNA仍然持續(xù)的高表達(dá)。 結(jié)論 共刺激分子Tim-1可能在引發(fā)創(chuàng)傷炎癥反應(yīng)早期中起到重要作用,而且可能介導(dǎo)了角膜移植術(shù)后的排斥反應(yīng)。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R779.65

【參考文獻(xiàn)】

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1 董瑩,黃一飛,王麗強(qiáng),陳兵;雷帕霉素抑制大鼠角膜移植免疫排斥反應(yīng)的實驗研究[J];中華眼科雜志;2005年10期

2 楊培增,龔向明,周紅顏,趙敏,黃祥坤,謝楚芳,曹心，

本文編號：1690806