長時間甲醛固定的大鼠視網(wǎng)膜組織胰蛋白酶消化方法探討
發(fā)布時間:2018-03-28 10:56
本文選題:視網(wǎng)膜消化 切入點:視網(wǎng)膜血管 出處:《中國藥理學(xué)通報》2014年12期
【摘要】:目的探討長期甲醛固定的大鼠視網(wǎng)膜胰蛋白酶消化的最佳消化時間和最佳胰蛋白酶濃度。方法健康♂SD大鼠,頸椎脫臼處死,摘取眼球,放入4%甲醛固定液,固定時間為2 d、2周、4周、3月、5月、7月。分離固定不同時間的視網(wǎng)膜,放入3%、6%、9%胰蛋白酶消化,37℃恒溫箱孵育。分別記錄固定不同時間的視網(wǎng)膜在3%、6%、9%胰蛋白酶中消化完全所需時間。鋪片操作,行PAS染色。顯微鏡下記錄視網(wǎng)膜消化情況。結(jié)果新鮮眼球常規(guī)固定48 h,3%胰蛋白酶37℃消化3.5 h,視網(wǎng)膜消化完全。對于甲醛固定2周及1月的大鼠眼球,采用常規(guī)胰蛋白酶濃度(3%),僅延長胰蛋白酶的消化時間至9 h及14 h,可以達(dá)到常規(guī)固定組織的消化效果。對于固定3月的大鼠眼球,采用常規(guī)濃度的胰蛋白酶僅延長消化時間至22 h,同樣可以得到完整的視網(wǎng)膜血管鋪片,且提高胰蛋白酶濃度對于縮短視網(wǎng)膜消化時間的影響不大。而對于固定5~7月的大鼠眼球,6%和9%濃度的胰蛋白酶可以在一定程度上縮短視網(wǎng)膜消化的時間至22 h和28 h,有利于得到相對完整的視網(wǎng)膜血管。結(jié)論固定時間短于3月的眼球組織,采用3%胰蛋白酶消化,延長消化時間可達(dá)到最佳消化效果。對于固定5~7月的視網(wǎng)膜組織,不僅需要延長消化時間,還需要通過提高胰蛋白酶濃度至6%,才可以獲得最佳消化效果的視網(wǎng)膜血管。
[Abstract]:Objective to study the optimal digestion time and concentration of trypsin in retina of rats fixed with formaldehyde for a long time. 鈾係prague-Dawley rats were killed by cervical dislocation, eyeballs were removed, and 4% formaldehyde fixative solution was put into the eyes. The fixation time was 2 days, 2 weeks, 4 weeks, 3 months, 5 months and 7 months. The retina was incubated in a incubator at 37 鈩,
本文編號:1676027
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