本文選題：鼻咽癌　切入點(diǎn)：表皮生長(zhǎng)因子受體　出處：《中南大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： 鼻咽癌是我國(guó)南方常見(jiàn)的一種上皮性惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率均居世界首位,嚴(yán)重危害國(guó)人的生命和健康,表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一種重要的癌基因,其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在鼻咽癌發(fā)病中具有重要作用。為篩選鼻咽癌EGFR信號(hào)通路中磷酸化激活的信號(hào)分子,揭示EGFR在鼻咽癌發(fā)病中的作用機(jī)制,我們進(jìn)行鼻咽癌EGFR信號(hào)通路的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 一、鼻咽癌表皮生長(zhǎng)因子受體的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究 應(yīng)用EGFR配體TGF-α刺激EGFR過(guò)表達(dá)鼻咽癌CNE2細(xì)胞系,對(duì)照組CNE2細(xì)胞不作TGF-α處理,采用磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)方法(2-DE結(jié)合2-D Western blotting)鑒定差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)：即2-DE分離TGF-a刺激和對(duì)照組CNE2細(xì)胞系的總蛋白質(zhì),抗酪氨酸磷酸化抗體2-D Western blotting識(shí)別差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),質(zhì)譜鑒定差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),NetPhos軟件預(yù)測(cè)差異蛋白質(zhì)的酪氨酸磷酸化位點(diǎn),Pathway Studio 5.0軟件構(gòu)建差異磷酸化蛋白質(zhì)的信號(hào)網(wǎng)絡(luò),免疫沉淀結(jié)合Western blotting驗(yàn)證3個(gè)EGFR信號(hào)通路蛋白(ANXA3、KRT8和KRT18)的差異酪氨酸磷酸化水平。結(jié)果如下： 1、在鼻咽癌CNE2細(xì)胞中鑒定了16個(gè)EGFR活化相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)。2、發(fā)現(xiàn)并證實(shí)ANXA3、KRT8和KRT18為EGFR信號(hào)通路相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)。3、基于鑒定的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),構(gòu)建了鼻咽癌細(xì)胞EGFR相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)的信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)。 二、鼻咽癌表皮生長(zhǎng)因子受體的磷酸化定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究 應(yīng)用TGF-α和／或EGFR抑制劑PD153035處理CNE2細(xì)胞,模擬EGFR信號(hào)通路活化和抑制的狀態(tài)。采用磷酸化定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定差異磷酸化蛋白質(zhì)：即通過(guò)磷酸鹽金屬親和色譜(Phosphate Metal Affinity Chromatography, PMAC)富集磷酸化蛋白質(zhì),采用2-D DIGE識(shí)別差異磷酸化蛋白質(zhì)點(diǎn),質(zhì)譜鑒定差異磷酸化蛋白質(zhì),磷酸化修飾位點(diǎn)分析軟件預(yù)測(cè)磷酸化位點(diǎn),DIGE凝膠磷酸化蛋白質(zhì)特異性染色對(duì)差異磷酸化蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證�；阼b定的EGFR信號(hào)通路磷酸化蛋白質(zhì),采用Pathway Studio軟件建立EGFR信號(hào)通路磷酸化信號(hào)網(wǎng)絡(luò),采用免疫沉淀結(jié)合Western blotting對(duì)2個(gè)差異磷酸化蛋白質(zhì)(GSTP1和GRB2)作為EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的信號(hào)分子進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果如下： 1、利用磷酸基團(tuán)金屬親和純化技術(shù)(PMAC)、2-D DIGE、磷酸化蛋白特異性熒光染色和磷酸化修飾位點(diǎn)分析軟件預(yù)測(cè)等方法鑒定了32個(gè)鼻咽癌細(xì)胞EGFR信號(hào)通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)。 2、發(fā)現(xiàn)了27個(gè)新的EGFR信號(hào)通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)。 3、基于鑒定的EGFR信號(hào)通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì),建立EGFR信號(hào)通路相關(guān)磷酸化蛋白質(zhì)的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)。 本研究鑒定了16個(gè)鼻咽癌細(xì)胞EGFR信號(hào)通路相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)以及32個(gè)鼻咽癌EGFR信號(hào)通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)；建立EGFR信號(hào)通路相關(guān)酪氨酸磷酸化和總磷酸化蛋白質(zhì)的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)。研究結(jié)果不僅豐富了EGFR信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò),而且為揭示EGFR在鼻咽癌研究發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供了新的依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

【引證文獻(xiàn)】

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1 王賞初;草魚(yú)Aminopeptidase N基因的克隆與表達(dá)研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1669077