本文選題：鼻咽癌　切入點：表皮生長因子受體　出處：《中南大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： 鼻咽癌是我國南方常見的一種上皮性惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率均居世界首位,嚴重危害國人的生命和健康,表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一種重要的癌基因,其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在鼻咽癌發(fā)病中具有重要作用。為篩選鼻咽癌EGFR信號通路中磷酸化激活的信號分子,揭示EGFR在鼻咽癌發(fā)病中的作用機制,我們進行鼻咽癌EGFR信號通路的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 一、鼻咽癌表皮生長因子受體的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究 應(yīng)用EGFR配體TGF-α刺激EGFR過表達鼻咽癌CNE2細胞系,對照組CNE2細胞不作TGF-α處理,采用磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)方法(2-DE結(jié)合2-D Western blotting)鑒定差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)：即2-DE分離TGF-a刺激和對照組CNE2細胞系的總蛋白質(zhì),抗酪氨酸磷酸化抗體2-D Western blotting識別差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),質(zhì)譜鑒定差異酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),NetPhos軟件預(yù)測差異蛋白質(zhì)的酪氨酸磷酸化位點,Pathway Studio 5.0軟件構(gòu)建差異磷酸化蛋白質(zhì)的信號網(wǎng)絡(luò),免疫沉淀結(jié)合Western blotting驗證3個EGFR信號通路蛋白(ANXA3、KRT8和KRT18)的差異酪氨酸磷酸化水平。結(jié)果如下： 1、在鼻咽癌CNE2細胞中鑒定了16個EGFR活化相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)。2、發(fā)現(xiàn)并證實ANXA3、KRT8和KRT18為EGFR信號通路相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)。3、基于鑒定的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì),構(gòu)建了鼻咽癌細胞EGFR相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)的信號通路網(wǎng)絡(luò)。 二、鼻咽癌表皮生長因子受體的磷酸化定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究 應(yīng)用TGF-α和／或EGFR抑制劑PD153035處理CNE2細胞,模擬EGFR信號通路活化和抑制的狀態(tài)。采用磷酸化定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定差異磷酸化蛋白質(zhì)：即通過磷酸鹽金屬親和色譜(Phosphate Metal Affinity Chromatography, PMAC)富集磷酸化蛋白質(zhì),采用2-D DIGE識別差異磷酸化蛋白質(zhì)點,質(zhì)譜鑒定差異磷酸化蛋白質(zhì),磷酸化修飾位點分析軟件預(yù)測磷酸化位點,DIGE凝膠磷酸化蛋白質(zhì)特異性染色對差異磷酸化蛋白質(zhì)進行驗證�；阼b定的EGFR信號通路磷酸化蛋白質(zhì),采用Pathway Studio軟件建立EGFR信號通路磷酸化信號網(wǎng)絡(luò),采用免疫沉淀結(jié)合Western blotting對2個差異磷酸化蛋白質(zhì)(GSTP1和GRB2)作為EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的信號分子進行了驗證。結(jié)果如下： 1、利用磷酸基團金屬親和純化技術(shù)(PMAC)、2-D DIGE、磷酸化蛋白特異性熒光染色和磷酸化修飾位點分析軟件預(yù)測等方法鑒定了32個鼻咽癌細胞EGFR信號通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)。 2、發(fā)現(xiàn)了27個新的EGFR信號通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)。 3、基于鑒定的EGFR信號通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì),建立EGFR信號通路相關(guān)磷酸化蛋白質(zhì)的信號網(wǎng)絡(luò)。 本研究鑒定了16個鼻咽癌細胞EGFR信號通路相關(guān)的酪氨酸磷酸化蛋白質(zhì)以及32個鼻咽癌EGFR信號通路相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)；建立EGFR信號通路相關(guān)酪氨酸磷酸化和總磷酸化蛋白質(zhì)的信號網(wǎng)絡(luò)。研究結(jié)果不僅豐富了EGFR信號通路網(wǎng)絡(luò),而且為揭示EGFR在鼻咽癌研究發(fā)生發(fā)展中的作用機制提供了新的依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R739.63

【引證文獻】

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1 王賞初;草魚Aminopeptidase N基因的克隆與表達研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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本文編號：1669077