本文選題：極重度感音神經(jīng)性聾　切入點(diǎn)：術(shù)前全面評(píng)估　出處：《中南大學(xué)》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分極重度感音神經(jīng)性聾兒童的人工耳蝸植入術(shù)前評(píng)估及致聾危險(xiǎn)因素分析 研究目的：對(duì)極重度感音神經(jīng)性聾患兒進(jìn)行術(shù)前全面評(píng)估以確保人工耳蝸植入適應(yīng)證的正確選擇及其術(shù)后康復(fù)效果；了解環(huán)境和遺傳因素在我國(guó)接受人工耳蝸植入群體中的比例。初步探討湖南地區(qū)極重度感音神經(jīng)性聾患兒的病因,為制定耳聾的預(yù)防計(jì)劃提供理論依據(jù)。 研究方法：本研究對(duì)2005年11月至2011年4月到我院及湖南郴州湘南學(xué)院申請(qǐng)行人工耳蝸植入的386例極重度感音神經(jīng)性耳聾患者進(jìn)行了回顧性調(diào)查,并進(jìn)行系統(tǒng)的全身體格檢查,聽(tīng)力學(xué)檢查及影像學(xué)檢查等,進(jìn)行術(shù)前全面評(píng)估。對(duì)已知的耳聾的危險(xiǎn)因素在聾兒的分布情況進(jìn)行初步的探討,并對(duì)較常見(jiàn)的一些因素進(jìn)行多因素分析。 研究結(jié)果：1、我們的研究對(duì)象確診時(shí)間較晚,聾兒的平均疑診時(shí)間接近2歲左右,確診時(shí)間接近3歲。本研究中,386例耳聾兒童均存在言語(yǔ)障礙,僅有1例為語(yǔ)后聾。經(jīng)聽(tīng)力篩查發(fā)現(xiàn)僅43例,因家人發(fā)現(xiàn)小兒聽(tīng)力差而就診343例,說(shuō)明尚有較多小兒未接受聽(tīng)力篩查。在接受人工耳蝸植入術(shù)前,386例聾兒中有231例驗(yàn)配助聽(tīng)器。2、386例聾兒含已知的危險(xiǎn)因素共162人次,涉及114個(gè)聾兒,272人未查及已知的危險(xiǎn)因素,占70.5%：有耳聾家族史21人次；圍產(chǎn)期危險(xiǎn)因素共88人次；產(chǎn)前危險(xiǎn)因素共11人次；產(chǎn)后獲得性危險(xiǎn)因素共45人次。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知耳毒性藥物、家族史、缺氧、發(fā)育畸形、發(fā)熱抽搐及中耳炎可能引起和促進(jìn)極重度感音神經(jīng)性耳聾的發(fā)生。而對(duì)危險(xiǎn)因素的多因素分析表明,內(nèi)耳畸形(大前庭水管綜合癥,Mondini畸形,小耳蝸畸形及共同腔畸形)是最主要的危險(xiǎn)因素。 結(jié)論：1、在整個(gè)人工耳蝸植入過(guò)程中,術(shù)前患者的綜合評(píng)估是至關(guān)重要和必不可少的環(huán)節(jié),其主要目的是從醫(yī)學(xué)、聽(tīng)力學(xué)等多方面綜合評(píng)價(jià)和決定患者是否適合實(shí)施人工耳蝸植入手術(shù)。2、本研究證實(shí)了遺傳因素為極重度感音神經(jīng)性聾兒的主要危險(xiǎn)因素。對(duì)廣大人群普及自我保健及防聾治聾知識(shí),加強(qiáng)孕前、產(chǎn)前致畸因素的預(yù)防,預(yù)防及早期根治嬰幼兒期的中耳炎及發(fā)熱疾��；盡可能排除存在基因突變的遺傳學(xué)因素。進(jìn)行新生兒或兒童高危因素登記,對(duì)高危人群進(jìn)行聽(tīng)力學(xué)篩查和隨診,并盡早干預(yù),規(guī)范藥物使用,將有助于減少極重度耳聾的發(fā)生。 研究目的：對(duì)我國(guó)接受人工耳蝸植入群體進(jìn)行分子病因?qū)W研究；重點(diǎn)探討在接受人工耳蝸植入的病人中,GJB2, SLC26A4、線粒體12S rRNA基因突變發(fā)生的概率、突變形式和突變熱點(diǎn),探討適合中國(guó)人極重度感音神經(jīng)性聾的基因診斷策略。研究大前庭水管綜合征(Enlarged vestibular aqueduct syndrome, EVAS)在中國(guó)人極重度感音神經(jīng)性聾患者中的基因型和分子流行病學(xué)特點(diǎn)。比較基因芯片法和傳統(tǒng)測(cè)序法在基因診斷中的優(yōu)勢(shì)及差異。 研究方法：采集236名接受和申請(qǐng)人工耳蝸植入的重度及極重度感音神經(jīng)性耳聾患者,30例EVAS患者和100例聽(tīng)力檢測(cè)正常者的外周血。提取基因組DNA,用耳聾基因芯片檢測(cè)四個(gè)國(guó)人中常見(jiàn)的耳聾相關(guān)基因中的9個(gè)熱點(diǎn)突變,包括GJB2(35delG,176del16bp,235delC及299delAT),GJB3(538C＞T),SLC26A4(IVS7-2AG、2168AG)和線粒體12S rRNA(1494CT及1555AG)。然后用傳統(tǒng)測(cè)序法對(duì)基因芯片檢測(cè)結(jié)果行驗(yàn)證,即對(duì)GJB2的編碼區(qū),DNA12S rRNA (1494C＞T及1555AG)和SLC26A4基因的第7和8外顯子,19號(hào)外顯子進(jìn)行測(cè)序。SLC26A4基因有21個(gè)外顯子,完全檢測(cè)較困難。為了進(jìn)一步明確致聾原因,我們對(duì)基因芯片檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)突變或發(fā)現(xiàn)單雜合突變的大前庭水管綜合征患者進(jìn)一步行SLC26A4基因的DNA測(cè)序,先篩查第10、17、15、3外顯子,然后篩查剩余外顯子,直至發(fā)現(xiàn)另一個(gè)突變或篩查完全部SLC26A4外顯子。 研究結(jié)果：經(jīng)測(cè)序,發(fā)現(xiàn)236例患者中93例攜帶有GJB2基因突變,發(fā)生率約35.36%。除3例純合235deIC被判讀為雜合外,測(cè)序方法同應(yīng)用基因芯片檢測(cè)的結(jié)果的結(jié)果一致,基因芯片的陽(yáng)性突變檢出率為21.19%(50例)。兩種方法在陽(yáng)性病人檢出率間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而兩種方法對(duì)GJB2基因相關(guān)性耳聾(純合或復(fù)合雜合)的確診率為23.31%(55/236)和16.10%(38/236),也有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。236例患者GJB2致病等位基因頻率合計(jì)為31.36%(148/472),共發(fā)現(xiàn)15種突變類型：5種常見(jiàn)多態(tài)性；8種已報(bào)道的致病突變；和2種新突變類型。而其中235delC是最常見(jiàn)的致病突變類型,等位基因頻率為15.5%(75/472),其次為109GA,等位基因頻率為10.8%(51/475)。新突變52AC,511-512insAACGC,各有一例以復(fù)合雜合的形式出現(xiàn)。在非綜合癥耳聾患者檢出一例223CT——之前被認(rèn)為引起綜合癥性耳聾的突變。非綜合征型耳聾組40.55%(88/217)患者發(fā)現(xiàn)GJB2基因致病突變。而內(nèi)耳畸形組的GJB2基因等位基因突變率13.16%(5/38),與正常聽(tīng)力對(duì)照無(wú)顯著差異,說(shuō)明GJB2基因突變不是內(nèi)耳畸形的主要病因,但也可能是重要致病影響因素,對(duì)其他的致病基因產(chǎn)生協(xié)同或疊加的作用。本研究發(fā)現(xiàn)236例患者12S rRNA致病基因1494CT及1555AG檢出率為分別為0.4%(1/236)及3.0%(7/236)。未發(fā)現(xiàn)GJB3(538CT)患者。而在236名極重度感音神經(jīng)性聾患者中,有21例(8.9%)檢測(cè)出SLC26A4基因異常,其基因型包括IVS7-2AG純合1例,IVS7-2AG/2168AG (H723R)復(fù)合雜合4例,IVS7-2AG單純雜合16例。30例EVAS患者組中,基因芯片方法共檢出SLC26A4基因突變25例,檢出率為83.33%。而傳統(tǒng)測(cè)序法中有28例患者檢測(cè)出了SLC26A4基因突變,檢出率為93.33%,與基因芯片法比較,檢出率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在本實(shí)驗(yàn)中(包括CI組及EVAS組),我們共發(fā)現(xiàn)了16種突變類型,其中5種為新的突變類型(A227P, G368X, IVS8-1G T, IVS13+9C＞T和Q696X)。在所有的突變中,IVS7-2AG突變的發(fā)生率最高,其次為H723R和T410M。 結(jié)論：耳聾基因芯片對(duì)GJB2(35delG,176del16bp,235delC及299delAT) SLC26A4(IVS7-2AG、2168AG)和線粒體12S rRNA1555AG檢出率高,能夠適用于一般的基因篩查。但對(duì)12S rRNA1494C＞T,GJB3(538C＞T)檢出率低,與適用人群有關(guān)。根據(jù)基因芯片快速檢測(cè)后結(jié)果,并結(jié)合患者的臨床資料,并對(duì)相應(yīng)基因進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證或全序列分析才能很好地將基因芯片的快速、經(jīng)濟(jì)、高通量的優(yōu)勢(shì)與測(cè)序的高準(zhǔn)確性和高檢出率的優(yōu)勢(shì)相結(jié)合。 第三部分湖南苗族、土家族和漢族常見(jiàn)致聾基因的遺傳流行病學(xué)調(diào)查 研究目的：遺傳性耳聾具有高度的遺傳異質(zhì)性,不同的地區(qū)和人群中耳聾基因的突變頻率、突變方式和突變熱點(diǎn)有很大的差異。目前GJB2基因、SLC26A4基因、線粒體DNA12SrRNA基因等常見(jiàn)耳聾基因在我國(guó)人群中的流行分布情況被廣泛研究,并取得了很大進(jìn)展,研究主要在漢族人群中進(jìn)行的,在少數(shù)民族耳聾人群中的耳聾基因分子流行病學(xué)研究較少。在本研究中,我們對(duì)湖南湘西少數(shù)民族地區(qū)的三個(gè)民族進(jìn)行常見(jiàn)耳聾基因的分子流行病學(xué)研究,以了解耳聾基因在我國(guó)少數(shù)民族地區(qū)和少數(shù)民族人群的流行分布情況,明確相應(yīng)突變譜和熱點(diǎn)突變,為聾病基因的大規(guī)模篩查提供依據(jù)。 研究方法：本研究用基因芯片與傳統(tǒng)測(cè)序方法聯(lián)合,在湖南湘西自治區(qū)漢族、苗族和土家族141例感音神經(jīng)性耳聾患者中進(jìn)行GJB2基因,線粒體DNA12S rRNA A1555G和SLC26A4基因突變分子流行病學(xué)調(diào)查,主要研究三個(gè)常見(jiàn)致聾突變?cè)诓煌褡逯袛y帶率的差異。 研究結(jié)果：在湖南地區(qū)正常聽(tīng)力人群中檢測(cè)表明,苗族,土家族及漢族的GIB2基因突變等位基因頻率為苗族最高,漢族最低,土家族與漢族、苗族與漢族均具有顯著差別。三個(gè)民族間GJB2基因突變攜帶率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三個(gè)民族的GJB2基因突變均以V37I,235de1C為主。未檢測(cè)出35de1G。提示湖南土家族和苗族的GJB2基因多態(tài)性分布與我國(guó)漢族相似,再次證實(shí)了三個(gè)民族有共同的人類種族起源。但在苗族和土家族正常聽(tīng)力人群中V37I突變的等位基因頻率與攜帶率均較235de1C高,與漢族正好相反。GJB2基因突變?cè)诟髅褡宥@患者中有較高的攜帶率,土家族GIB2基因突變攜帶率及等位基因突變頻率均顯著性低于漢族患者。235de1C突變是每個(gè)民族最常見(jiàn)的突變方式,其次為V37I。235de1C與V37I突變攜帶率及等位基因突變頻率在土家族最低,但三民族間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在土家族患者中檢測(cè)到三種新的突變類型223C＞(R75W),257C＞G(T86R)及475GA(D159N)。223C＞T (R75W)雖被the connexin deafness homepage網(wǎng)站收錄,但在本研究中被認(rèn)為引起非綜合癥性耳聾而不是綜合性耳聾,因此也歸為新的遺傳突變。線粒體DNA12S rRNA A1555G突變是該地區(qū)苗族和土家族人群常見(jiàn)的耳聾致病基因,均高于文獻(xiàn)報(bào)道的漢族中的A1555G突變率。這種現(xiàn)象主要與環(huán)境因素有關(guān),特別是與湘西地區(qū)對(duì)氨基糖苷類抗生素的大量使用有關(guān)。苗族、土家族和漢族耳聾患者的SLC26A4IVS7-2AG,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。未檢測(cè)出2168AG (H723R)突變�？梢�(jiàn)IVS7-2AG也是湘西苗族,土家族耳聾患者常見(jiàn)的SLC26A4基因致病突變。 結(jié)論：GJB2基因突變?cè)诓煌巳旱姆植枷嗨菩约案甙l(fā)突變類型及攜帶率的差異性,既反映了湖南地區(qū)三個(gè)少數(shù)民族人群的遺傳同源性也顯示了種族的遺傳異質(zhì)性,與其起源和歷史原因等導(dǎo)致的長(zhǎng)期人群聚集通婚及種族間的交流有關(guān)。 研究目的：有研究者發(fā)現(xiàn)存在核遺傳背景可能影響A1555G突變相關(guān)聽(tīng)力喪失能否發(fā)生。而A1555G點(diǎn)突變的耳聾患者中,GJB2基因突變的攜帶率較高。在本研究中我們就核基因GJB2是否與藥毒性耳聾相關(guān),與A1555G是否存在關(guān)聯(lián)性,其表達(dá)是否會(huì)受到氨基糖苷類抗生素的影響進(jìn)行初步的探討,為藥物中毒性耳聾機(jī)制的探索以及防治尋求一個(gè)新的方向。 研究方法：1、我們?cè)跀y帶mtDNA12S rRNA1555AG點(diǎn)突變的21例散發(fā)個(gè)家系中檢測(cè)GJB2基因突變的攜帶率,以明確GJB2突變與該類患者表型的關(guān)系。2、我們應(yīng)用免疫組化染色、western blot和real-time PCR的方法觀察單次大劑量的慶大霉素注射的大鼠耳蝸外側(cè)壁不同時(shí)段Cx26表達(dá)的影響以及藥物中毒性聾大鼠耳蝸外側(cè)壁Cx26的表達(dá),從而從分子水平探討藥毒性耳聾的發(fā)病機(jī)制。 研究結(jié)果:1、我們?cè)跀y帶mtDNA12S rRNA1555AG點(diǎn)突變的多個(gè)家系中檢測(cè)GJB2基因突變的攜帶率,檢測(cè)到兩種GJB2基因突變109GA及79GA+341AG,其攜帶率較聽(tīng)力正常并攜帶1555AG的對(duì)照組家系成員高。同時(shí)攜帶GJB2突變及1555AG突變的先證者其耳聾程度較無(wú)GJB2突變嚴(yán)重,這意味著雜合的GJB2突變可能促使1555AG突變攜帶者其耳聾的發(fā)生。2、單次大劑量的靜脈注射慶大霉素可以快速的影響Cx26蛋白的表達(dá)和分布。但是CX26蛋白水平的增加是一過(guò)性,而且與mRNA水平變化不一致。慶大霉素也引起Cx26mRNA增加,但是增加的nRNA不能成功的翻譯成蛋白質(zhì)。 結(jié)論：在1555AG攜帶者中GJB2基因突變攜帶率高,且攜帶GJB2突變及1555AG突變的患者耳聾程度較重,GJB2基因也可能是氨基糖苷類抗生素的促進(jìn)因素。Cx26是慶大霉素作用后,尚未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)和耳蝸功能改變前最先發(fā)生改變的生物標(biāo)志物。在耳毒性聾的急性階段,Cx26的在耳蝸的重新分布和高表達(dá)可能增加內(nèi)淋巴鉀離子濃度及提高EP,很可能發(fā)揮了重要的拮抗機(jī)制,從而發(fā)揮一定的保護(hù)作用。本研究為氨基糖苷類抗生素引起的耳毒性聾的病理機(jī)制的研究和預(yù)防提供了一個(gè)新的方向。氨基糖苷類如何調(diào)節(jié)Cx26基因轉(zhuǎn)錄和翻譯尚待研究,本研究是Cx26在氨基糖苷類抗生素的耳毒性作用機(jī)制中所發(fā)揮作用的初步探討,還需要更深入的調(diào)查研究和實(shí)驗(yàn)證明。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R764

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 于飛;非綜合征型耳聾患者GJB2基因突變篩查和全頻譜突變圖譜繪制[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

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本文編號(hào)：1634579