本文選題：人角膜內(nèi)皮細(xì)胞系　切入點：轉(zhuǎn)化生長因子β2　出處：《中國海洋大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 角膜內(nèi)皮細(xì)胞是存在于角膜靠近于房水面的六角形鑲嵌排列的單層細(xì)胞,對維持角膜的透明有著關(guān)鍵作用。成年人角膜內(nèi)皮細(xì)胞(HCEC)缺乏增殖能力,局部細(xì)胞受到損傷后,只能通過鄰近細(xì)胞體積的增大和移行來填補缺損區(qū),所以六角形HCEC的數(shù)量逐年減少,角膜透明度逐漸降低。現(xiàn)有研究結(jié)果表明,HCEC停留在細(xì)胞周期的早G1期,仍然保持有增殖的潛能。但關(guān)于HCEC停留在G1期的具體的細(xì)胞與分子機制,至今仍不清楚。 轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)屬于TGF-β超家族的成員,具有調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及組織的損傷后修復(fù)等作用。TGF-β2是存在于人房水中的主要的TGF-β類型,可促進(jìn)小鼠角膜上皮層和基質(zhì)層的正常發(fā)育及內(nèi)皮層的形成,抑制體外培養(yǎng)的大鼠、兔和牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、調(diào)控牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的合成以及角膜內(nèi)皮細(xì)胞的損傷后修復(fù)。有關(guān)TGF-β2對HCEC增殖活性和形態(tài)的影響及相關(guān)的分子機理,至今還未見到相關(guān)的報道。 為了探明TGF-β2對HCEC增殖活性的影響及相關(guān)的細(xì)胞和分子機理,本文利用體外培養(yǎng)的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞系,使用不同濃度的TGF-β2在含10%FBS的DMEM/F12的培養(yǎng)條件下處理HCEC,發(fā)現(xiàn)1-15ng/mL的TGF-β2對HCEC的增殖均有抑制作用,在1～9ng/mL的濃度范圍內(nèi),TGF-β2對HCEC增殖的抑制作用具有濃度依賴性,其中9ng/mL為TGF-β2對HCEC增殖的峰值抑制濃度；9ng/mL的TGF-β2處理HCEC的細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示,TGF-β2處理12h即可抑制HCEC的增殖,抑制作用具有時間依賴性；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,9ng/mL TGF-β2處理后,處于G1/G0期HCE細(xì)胞的數(shù)量顯著增加(P0.05),并具有時間依賴性。熒光定量PCR結(jié)果顯示,9ng/mLTGF-β2處理24 h后,HCEC對p27kip1的表達(dá)量顯著增加,48 h后P27kip1和p21cip1的表達(dá)量均顯著增加,也具有時間依賴性。以上結(jié)果說明,TGF-β2對HCEC具有顯著的增殖抑制作用,并具有濃度和時間依賴性,其抑制作用機理很可能是通過先后誘導(dǎo)p27kip1和p21cip1表達(dá)量的增加進(jìn)而將細(xì)胞拘留在G1/G0期來實現(xiàn)的。 為了探明TGF-β2對HCEC形態(tài)的影響及相關(guān)的分子機理,本文首先采用1～15ng/mL的TGF-β2在含10%FBS的DMEM/F12的培養(yǎng)條件下處理HCEC,光學(xué)顯微鏡下觀察的結(jié)果顯示,3～15ng/mL的TGF-β2處理72h可明顯增加細(xì)胞的貼瓶面積,在3-9 ng/mL的濃度范圍內(nèi),TGF-β2對HCEC形態(tài)改變具有濃度依賴性,其中9ng/mL為TGF-β2對HCEC形態(tài)的峰值改變濃度；9ng/mL的TGF-β2處理HCEC的光鏡觀察結(jié)果顯示,TGF-β2處理HCEC 24h即可增加單個細(xì)胞的鋪展面積,促進(jìn)細(xì)胞由上皮細(xì)胞樣變?yōu)槌衫w維細(xì)胞樣,形態(tài)的改變具有時間依賴性；細(xì)胞貼附實驗表明,9ng/mL TGF-β2處理24h-72h均可明顯的增強HCEC貼附能力(P0.05)。熒光雙染色結(jié)果顯示,9ng/mL TGF-β2處理24h,可增加HCEC胞質(zhì)中F-肌動蛋白絲和微管的長度,降低細(xì)胞中心體區(qū)域的熒光強度；處理72h則明顯增加HCEC胞質(zhì)中微絲束的數(shù)量和長度,并促進(jìn)微管遍布于整個胞質(zhì)空間；HCECⅠ型和Ⅳ型膠原的免疫熒光染色的結(jié)果顯示,9ng/mL TGF-β2處理72h,可明顯增加HCEC單個細(xì)胞胞外Ⅳ型膠原的鋪展面積,降低其熒光強度；Western blot結(jié)果顯示,9ng/mL TGF-β2處理24h和72h對HCEC I型膠原和Ⅳ型膠原的表達(dá)量均沒有顯著的影響。以上結(jié)果說明,TGF-β2通過增加平行于細(xì)胞長軸方向的F-肌動蛋白絲的數(shù)量、延長F-肌動蛋白絲和微管的長度以及增加Ⅳ型膠原的鋪展面積,從而促進(jìn)HCEC由上皮細(xì)胞樣向成纖維細(xì)胞樣的轉(zhuǎn)變、增大單個細(xì)胞的鋪展面積和增強細(xì)胞的貼附能力。 本文研究了TGF-β2對體外培養(yǎng)的人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖活性和形態(tài)影響作用,旨在探明TGF-β2在人角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和形態(tài)改變中的作用及其相關(guān)的細(xì)胞和分子機理,為深入研究人角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖調(diào)控的機理提供重要的理論支持,對了解TGF-β2在角膜內(nèi)皮細(xì)胞的損傷修復(fù)過程中的作用具有重要的理論意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R772.21

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 樊廷俊;趙君;李凌;楊秀霞;于苗苗;王晶;;人角膜內(nèi)皮細(xì)胞體外氧化損傷及黃酮抗氧化保護作用的機制[J];國際眼科雜志;2008年08期

2 李雪;徐錦堂;崔浩;胡琦;;大鼠角膜堿、酸、熱燒傷后房水中TGF-β_2的變化研究[J];國際眼科雜志;2008年09期

3 陸秀蘭;張明昌;;TGF-β_2體外抑制牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖的研究[J];國際眼科雜志;2009年06期

4 劉純杰,張兆山;轉(zhuǎn)化生長因子β的生物學(xué)特性、功能及其臨床應(yīng)用前景[J];生物技術(shù)通訊;2001年04期

5 徐新保,何振平;TGF-β,Smad家族與器官移植免疫和器官纖維化[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2001年05期

6 葉向_g,盛耀華;TGF-β與角膜內(nèi)皮[J];眼科新進(jìn)展;2005年02期

7 嚴(yán)浩;胡燕華;徐惠民;;轉(zhuǎn)化生長因子β_1對牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響[J];眼科新進(jìn)展;2006年08期

8 趙靖,謝立信,史偉云,牛曉光;表皮生長因子促進(jìn)貓角膜內(nèi)皮損傷修復(fù)[J];眼科研究;2003年04期

9 楊蕊,郭絨霞,孫乃學(xué),王美納;表皮生長因子對家兔角膜內(nèi)皮損傷修復(fù)作用的實驗研究[J];眼科研究;1999年04期

10 牛秀瓏,王越,梁國慶;轉(zhuǎn)化生長因子β的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年04期

，

本文編號：1632944