本文選題：角膜新生血管　切入點(diǎn)：腫瘤壞死因子α　出處：《蘇州大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 背景與目的 眼堿燒傷是臨床常見的眼外傷之一,是嚴(yán)重的致盲性眼病,堿燒傷后伴隨強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng),常合并角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)的形成。CNV可導(dǎo)致患者視力下降、改變角膜的“免疫赦免”狀態(tài),是角膜移植術(shù)后發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的高危因素。其病理過(guò)程復(fù)雜,涉及諸多因素,確切的發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明。CNV的治療方法較多,但目前的治療效果均不太理想,因此研究CNV發(fā)病機(jī)制和探討有效的治療措施,將對(duì)防治CNV、防盲治盲都具有極其重要的現(xiàn)實(shí)意義。 TNF-α是一種主要由活化單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的多能性細(xì)胞因子,可介導(dǎo)角膜炎和角膜潰瘍中的急性炎癥反應(yīng)及宿主防御機(jī)制,并且在角膜創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中起到關(guān)鍵性作用,同時(shí)與CNV形成之間也存在緊密聯(lián)系。但目前關(guān)于TNF-α在CNV形成過(guò)程中所起到的具體作用及內(nèi)在機(jī)制仍未完全闡明,亦未見外源性TNF-α對(duì)堿燒傷CNV形成影響的報(bào)道。本課題從建立小鼠堿燒傷CNV模型著手,觀察重組鼠TNF-α對(duì)堿燒傷CNV的影響,利用免疫組織化學(xué)、RT-PCR和小鼠巨噬細(xì)胞特異剔除模型,探討TNF-α、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)三者之間在堿燒傷CNV形成中的作用與機(jī)制。 材料與方法 1、15只BALB/c小鼠制作左眼堿燒傷誘導(dǎo)CNV模型,通過(guò)眼局部滴藥隨機(jī)分為100μg/ml TNF-α實(shí)驗(yàn)組、500μg/ml TNF-α實(shí)驗(yàn)組、0.2%透明質(zhì)酸鈉對(duì)照組,每組5只小鼠,自堿燒傷后分別給予100μg/ml、500μg/ml TNF-α或0.2%透明質(zhì)酸鈉點(diǎn)眼,每日2次,持續(xù)1w,堿燒傷后1d、7d、14d裂隙燈顯微鏡下觀察各組角膜的炎癥反應(yīng)、角膜穿孔及新生血管形成情況,于堿燒傷后14d處死所有小鼠,取眼球行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組角膜組織中CD31的表達(dá),計(jì)數(shù)微血管密度,比較各組之間差異,分析TNF-α對(duì)堿燒傷CNV形成的作用。 2、20只BALB/c小鼠堿燒傷后隨機(jī)分為100μg/ml TNF-α實(shí)驗(yàn)組、0.2%透明質(zhì)酸鈉對(duì)照組,每組10只小鼠,自堿燒傷后分別給予100μg/ml TNF-α或0.2%透明質(zhì)酸鈉點(diǎn)眼,每日2次,于傷后2d、4d兩組隨機(jī)取5只小鼠處死,取角膜行RT-PCR法檢測(cè)兩組VEGF mRNA的表達(dá)情況,比較兩組之間的差異,分析TNF-α對(duì)堿燒傷角膜中VEGF表達(dá)的影響。 3、利用二氯亞甲基二磷酸脂質(zhì)體(Clodronate-liposomes, Cl2MDP-lip)腹腔注射制作小鼠巨噬細(xì)胞特異剔除模型,10只BALB/c小鼠隨機(jī)分為Cl2MDP-lip實(shí)驗(yàn)組及PBS-lip對(duì)照組,每組5只小鼠。所有小鼠自堿燒傷后均給予100μg/ml TNF-α滴眼,每日2次,持續(xù)1w,所有小鼠于堿燒傷后14d拍照記錄CNV形成情況,圖像分析軟件測(cè)量CNV長(zhǎng)度、計(jì)算CNV面積,比較兩組之間差異。分析巨噬細(xì)胞在TNF-α促進(jìn)堿燒傷CNV形成中的作用。 結(jié)果 1、堿燒傷后14d 100μg/ml TNF-α實(shí)驗(yàn)組CNV形成較對(duì)照組明顯增多,同時(shí)免疫組化法檢測(cè)MVD較對(duì)照組明顯增多(P0.05),而500μg/ml TNF-α實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間無(wú)明顯差異。表明低劑量TNF-α能促進(jìn)堿燒傷CNV形成。 2、堿燒傷后2d、4d 100μg/ml TNF-α實(shí)驗(yàn)組小鼠角膜組織中VEGF mRNA的表達(dá)水平均較對(duì)照組高(P0.05)。表明TNF-α能通過(guò)上調(diào)堿燒傷角膜中VEGF的表達(dá),促進(jìn)CNV的形成。 3、Cl2MDP-lip實(shí)驗(yàn)組小鼠堿燒傷后14d CNV長(zhǎng)度、面積均較對(duì)照組明顯減少(P0.05),表明巨噬細(xì)胞剔除可顯著降低TNF-α對(duì)堿燒傷CNV形成的促進(jìn)作用。 結(jié)論 1、低劑量重組鼠TNF-α具有促進(jìn)堿燒傷CNV形成的作用,而在高劑量時(shí)未表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)血管新生作用。 2、低劑量TNF-α促進(jìn)堿燒傷CNV形成的作用機(jī)制可能與促進(jìn)巨噬細(xì)胞向角膜組織的浸潤(rùn),同時(shí)上調(diào)巨噬細(xì)胞VEGF的表達(dá)有關(guān)。 3、通過(guò)對(duì)角膜局部TNF-α表達(dá)水平的干預(yù),可能成為臨床治療CNV一個(gè)新的途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R779.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1596638