本文選題：鼻咽癌　切入點(diǎn)：EB病毒核抗原　出處：《中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志》2014年17期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立能有效表達(dá)EB病毒核抗原1(EBNA1)基因的酵母工程菌株,并探討EBNA1重組蛋白在鼻咽癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用。方法以EBV DNA為模板,采用PCR法擴(kuò)增目的基因片段EBNA1,與畢赤酵母表達(dá)載體pPICZaA連接,轉(zhuǎn)化酵母菌GS115,甲醇誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE、免疫印跡法鑒定后,純化目的蛋白作為包被抗原,制備ELISA試劑檢測(cè)鼻咽癌患者和正常人群EBNA1-IgA抗體。結(jié)果在畢赤酵母菌中成功高效地表達(dá)了分泌型的EBNA1重組蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量為28 000,免疫印跡證實(shí)目的帶有免疫原性,目的蛋白經(jīng)純化后作為包被抗原檢測(cè)鼻咽癌患者和健康對(duì)照的敏感度和特異度分別為81.4%和95.8%。結(jié)論采用畢赤酵母系統(tǒng)高效分泌表達(dá)了EBNA1重組蛋白并對(duì)其在鼻咽癌血清篩選中的診斷價(jià)值進(jìn)行了初步評(píng)估,獲得了在鼻咽癌篩選中有一定診斷價(jià)值的pPICZa-EBNA1生產(chǎn)酵母工程菌株。
[Abstract]:Objective to establish a yeast engineering strain that can effectively express EBV nuclear antigen 1EBNA1 gene, and to explore the application of EBNA1 recombinant protein in serological diagnosis of nasopharyngeal carcinoma. Methods EBV DNA was used as a template. The target gene fragment EBNA1 was amplified by PCR and ligated with Pichia pastoris expression vector pPICZaA, then transformed into yeast GS115, and methanol induced the expression of recombinant protein. The expressed product was identified by SDS-PAGE.After being identified by Western blotting, the target protein was purified as coating antigen. ELISA reagent was prepared to detect EBNA1-IgA antibody in patients with nasopharyngeal carcinoma and normal population. Results the secreted EBNA1 recombinant protein was successfully expressed in Pichia pastoris with a relative molecular weight of 28000. The objective of immunoblotting was immunogenicity. Objective the sensitivity and specificity of purified protein for detecting nasopharyngeal carcinoma patients and healthy controls were 81.4% and 95.8 respectively. Conclusion the recombinant EBNA1 protein was secreted by Pichia pastoris and expressed in nasopharyngeal carcinoma blood. The diagnostic value of screening was preliminarily evaluated. An engineering strain of yeast producing pPICZa-EBNA1 with diagnostic value in nasopharyngeal carcinoma screening was obtained.
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗(yàn)科;海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：教育部第44批留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金(教外司留(2012)940)
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1585079